يتم تقديم بروتوكول لإجراء تحد في مرفق غرفة التعرض للحساسية (AEC). أثبتت AECs أنها أدوات آمنة وفعالة لتحريض أعراض الحساسية أو كنقطة نهاية في اختبار فعالية العلاج المناعي للحساسية نظرا لقدرتها على الحفاظ على تركيزات الجسيمات المستقرة والظروف البيئية.
غرف التعرض للحساسية (AECs) هي مرافق سريرية تسمح بتعرض المشاركين للجزيئات المسببة للحساسية وغير المسببة للحساسية المحمولة جوا. أنها توفر تركيزات الجسيمات مستقرة في ظل ظروف بيئية خاضعة للرقابة. هذا له أهمية كبيرة سواء لأغراض التشخيص أو لرصد آثار العلاج.
هنا ، يتم تقديم بروتوكول والمتطلبات الفنية لأداء تحدي آمن وفعال لمسببات الحساسية في الأشخاص الذين تم توعيتهم بمسببات الحساسية المحمولة جوا (أي عث غبار المنزل [HDM]) في ALL-MED AEC. مع هذه الطريقة ، فإن إثارة أعراض الحساسية يتوافق مع التعرض الطبيعي. يمكن استخدام هذا لتشخيص الحساسية أو كنقطة نهاية معقولة في التجارب السريرية ، خاصة للعلاج المناعي للحساسية (AIT). يجب الحفاظ على بيئة خاضعة للرقابة (درجة الحرارة والرطوبة وثاني أكسيد الكربون [CO2]) في الغرفة. يجب أن تنتشر جزيئات مسببات الحساسية بالتساوي داخل AEC بمستويات مستقرة طوال التحدي. لهذا العرض التقديمي ، تم تسجيل مرضى التهاب الأنف التحسسي (AR) الحساسين لمسببات الحساسية HDM. تم تقييم أعراض AR من خلال المعلمات التالية: إجمالي درجة أعراض الأنف (TNSS) ، وقياس الأنف السمعي (ARM) ، وذروة تدفق الشهيق الأنفي (PNIF) ، ووزن إفراز الأنف. تم تقييم سلامة الإجراء من خلال ذروة معدل تدفق الزفير (PEFR) وحجم الزفير القسري في الثانية الأولى (FEV1). ظهرت الأعراض على الأشخاص الذين يعانون من الحساسية في غضون 120 دقيقة من التجربة. في المتوسط ، ظهرت الأعراض الأكثر حدة بعد 60-90 دقيقة ، وبعد الوصول إلى الهضبة ، ظلت مستقرة حتى نهاية التجربة.
أصبحت الحساسية المحمولة جوا مشكلة اجتماعية متنامية. التشخيص السليم ، وتقييم فعالية العلاج المناعي الخاص بمسببات الحساسية (AIT) ، وفهم العلاجات الدوائية هي النقاط الرئيسية في معالجة هذه المشكلة. ومع ذلك ، فإن توحيد هذه الإجراءات يتطلب تركيزات مستقرة من مسببات الحساسية ، وظروف بيئية مستقرة (مثل الرطوبة ودرجة الحرارة) ، والقدرة على التسبب في علامات الحساسية بطريقة متكررة. توفر غرف التعرض للحساسية (AECs) ظروفا بيئية مستقرة ، بغض النظر عن العوامل الخارجية ، ويتم التحكم في تركيز جزيئات مسببات الحساسية المشتتة بشكل جيد ومستقر أثناء التحديات في AECs 1,2.
اختبار تحدي مسببات الحساسية هو الأساس لتشخيص الحساسية المحمولة جوا لأنه يوفر دليلا مباشرا على الصلة السريرية لمسببات الحساسية المحددة بأعراض وشدة مرض الحساسية. تشمل تشخيصات الحساسية الكلاسيكية استفزازات الأنف والملتحمة والشعب الهوائية3،4،5. ومع ذلك ، يبدو أن اختبار تحدي مسببات الحساسية في AEC هو الأقرب إلى التعرض الطبيعي لمسببات الحساسية6.
تهدف هذه الدراسة إلى تقديم طريقة آمنة وفعالة لتحدي المشاركين الذين يعانون من مسببات الحساسية المختلفة المحمولة جوا في AEC لإثارة أعراض حساسية كبيرة تتوافق مع التعرض الطبيعي. هذه الطريقة مناسبة لتحريض السمات المرضية لأمراض الجهاز التنفسي ، بما في ذلك التهاب الأنف التحسسي والربو ، كنقطة نهاية في اختبار فعالية AIT وقد تساهم في تسريع التطوير السريري للعلاجات الدوائية2،3،7،8،9،10.
هناك أكثر من اثني عشر AECs في العالم11. ومع ذلك ، فإن AECs لا يمكن مقارنتها ببعضها البعض لأنها مصممة بشكل فردي ، وتستخدم أنواعا مختلفة من مسببات الحساسية (على سبيل المثال ، سوس غبار المنزل [HDM] ، أو حبوب لقاح البتولا ، أو حبوب لقاح العشب ، أو قطط ، أو حبوب لقاح عشبة الرجيد ، أو حبوب لقاح الأرز الياباني) ، ولها أنظمة قياس مختلفة للجزيئات الموزعة12،13،14،15،16،17،18،19 . لذلك ، يجب التحقق من صحة كل AEC لمسببات الحساسية الفردية. يضمن التحقق من صحة AEC أن التركيز المناسب لمسببات الحساسية آمن وأن الأعراض تحدث في المرضى. تم التحقق من صحة ALL-MED AEC لمسببات الحساسيةHDM 20.
يقع ALL-MED AEC في معهد البحوث الطبية في فروتسواف ، بولندا. يمكن أن يستوعب المرفق بشكل مريح 15-20 شخصا خلال تجربة واحدة. يتكون المرفق من غرفة بمساحة 12 م2 ، والتي يتم الوصول إليها عن طريق غرفة معادلة الضغط لمنع الجسيمات من البيئة الخارجية من دخولها. تتكون المعدات (المقاعد والجدران وما إلى ذلك) من أسطح غير لاصقة يمكن الوصول إليها ويمكن غسلها ، مثل الجلود البيئية والبلاستيك والمعدن. الكراسي متحركة ، مما يسمح بإعدادات مختلفة. تسمح نافذة العرض واتصال الميكروفون بالمراقبة المستمرة للأهداف (الشكل 1). يتم قياس تراكم الجسيمات بواسطة عداد جزيئات الليزر (LPC). يمكن تصنيف الجسيمات إلى نطاقات مختلفة ، بما في ذلك 0-20 ميكرومتر ، 20-50 ميكرومتر ، و 50-100 ميكرومتر ، ويتم إعطاء النتائج في الجسيمات لكل متر مكعب (p / m3) خلال وحدة زمنية محددة (على سبيل المثال ، كل دقيقة). توجد غرفتان ملحقتان بجوار AEC ، حيث يخضع المرضى للاختبارات قبل دخول الغرفة. تتكون معدات الإنقاذ من مزيل الرجفان وأجهزة الإنعاش الأخرى الموجودة في المنشأة. يحضر اثنان على الأقل من العاملين في مجال الرعاية الصحية ، بما في ذلك الطبيب ، خلال كل تحد.
هناك عدد محدود من مرافق AEC تعمل على مستوى العالم. تم اختبار مجموعة متنوعة من مسببات الحساسية في هذه المرافق ، وأكثرها شيوعا هو حبوب لقاح عشبة الرجيد وحبوب لقاح البتولا وحبوب لقاح العشب وحبوب لقاح الأرز الياباني و HDM. لا يتم تصنيف AECs كمنتجات طبية (وفقا للتوجيه 2001/83 / EC) أو الأجهزة الطبية (وفقا لتوجيه الأجهزة الطبية 93/42 / EEC) 24. تعتبر AECs أداة محتملة لقياس نقاط النهاية الأولية في دراسات تحديد الجرعة وفقا لإرشادات وكالة الأدوية الأوروبية (EMA) لتطوير منتجات AIT25,26.
الخطوات الحاسمة في البروتوكول
من الضروري توفير تركيزات مستقرة وعالية بما فيه الكفاية من مسببات الحساسية طوال التجربة بأكملها في AEC. تظهر الأبحاث أن مرضى AR لا تظهر عليهم أعراض الحساسية بتركيزات منخفضة من مسببات الحساسية20. حتى تركيزات مسببات الحساسية المعتدلة لا تؤدي إلى ظهور الأعراض ذات الصلة27. قد تسبب التركيزات العالية جدا ردود فعل شديدة، مثل تضيق الشعب الهوائية. لذلك ، فإن تركيزات مسببات الحساسية المثلى والمستدامة هي المفتاح لتجربة ناجحة. نظرا لأن AECs تختلف (كما هو موضح في المقدمة) ، يجب التحقق من صحة كل مادة مسببة للحساسية مستخدمة. تم التحقق من صحة ALL-MED AEC لمسببات الحساسية HDM. وجد أن نقطة النهاية المثلى لتقييم الأعراض كانت 120 دقيقة ، حيث وصلت الأعراض إلى هضبة بعد 60-90 دقيقة. تم اختيار وقت التحدي الأمثل وتركيز مسببات الحساسية بناء على التحديات مع تركيزات HMD المختلفة في أوقات مختلفة20. والجدير بالذكر أن الأعراض الحادة قد تحدث بعد تحدي مسببات الحساسية ، وخاصة تفاقم الربو.
وفقا للبروتوكول ، يكمل المشاركون استطلاعات TNSS في خمس نقاط زمنية أثناء التجربة. من الضروري ألا يروا ردودهم السابقة لتجنب الإيحاء الذاتي. لذلك ، إذا تم إكمال الاستبيانات على الورق ، فيجب جمع الاستبيانات المكتملة على الفور.
التعديلات واستكشاف الأخطاء وإصلاحها للطريقة
يمكن استخدام نقاط نهاية سريرية مختلفة اعتمادا على الأعراض التي يجب ملاحظتها أثناء التحدي (على سبيل المثال ، إجمالي درجة أعراض العين [TOSS] لتقييم التهاب الأنف والملتحمة أو درجة الأعراض غير الأنفية [NNSS] لتقييم الجهاز التنفسي).
يمكن استخدام قياس الأنف كبديل لقياس الأنف الصوتي. تستخدم كلتا الطريقتين لاختبار سالكية الأنف بموضوعية. قياس الأنف هو اختبار قياسي لتجويف الأنف. يتيح إجراء تقييم موضوعي لسالكية الممرات الأنفية عن طريق قياس المقاومة في تجويف الأنف أثناء الاستنشاق والزفير. قياس الأنف الصوتي هو دراسة حجم تجاويف الأنف. يتم تقييم سالكية تجويف الأنف بواسطة الموجات فوق الصوتية. لا توجد بيانات متاحة حول الطريقة الأكثر دقة لتحديات AEC28,29.
تمثل مجموعة سائل الأنف من إسفنجة رغوية واحدة وقياسات مستوى محددة من IgA1 و IgA2 و IgG و IgG و IgG4 و IgE اختبارات إضافية يمكن إجراؤها خلال تحدي AEC30,31. يمكن أيضا جمع خلايا المصل والدم المحيطي أحادي النواة (PBMCs) لتحديد الآليات الجزيئية AIT بشكل أكبر.
لا يسمح للمرضى باستخدام الأدوية التي قد تؤثر على ظهور أعراض الحساسية. أهم الفئات ، إلى جانب الحد الأدنى من الأوقات بين الجرعة الأخيرة وتحدي AEC ، هي مضادات الهيستامين (7 أيام) ، الكورتيكوستيرويدات المستنشقة و / أو الأنف (14 يوما) ؛ كرومولين مستنشق و / أو عن طريق الأنف (14 يوما) ، والكورتيكوستيرويدات الجهازية و / أو أستميزول (30 يوما) 18.
حدود الطريقة
يعد اختبار تحدي AEC أكثر تكلفة من اختبارات الاستفزاز المباشر (الأنف والملتحمة والشعب الهوائية) ، مما يعني أنه لا يستخدم في الممارسة اليومية. تختلف AECs من حيث مصادر مسببات الحساسية ، وقياس الجسيمات الموزعة ، ووقت التجربة ، مما يجعل من الصعب للغاية مقارنة الدراسات. عندما تم استخدام مسببات الحساسية HDM في AEC ، تم تطبيق مصادر مواد مختلفة: Der p 1 و Der f 1 ، مادة برازية Dp تحتوي بشكل أساسي على Der p1 بنسبة 20: 1 محددة مسبقا من Der p 1 إلى Der p 232 ، HDM مسببات الحساسية SQ 503 من الجسم والبراز الذي يحتوي على Der p 1 و Der p 233 ، ومقتطفات Dp. في ALL-MED AEC ، تم استخدام أجسام سوس Dp المجففة والمنقاة ، بما في ذلك Der p 1 و Der p 2 ،20. لذلك ، يجب إدخال معايير موحدة في المستقبل بحيث يمكن مقارنة النتائج بين AECs.
أهمية الطريقة فيما يتعلق بالطرق الحالية / البديلة
AECs مفيدة للغاية ولكنها ممثلة تمثيلا ناقصا في طريقة الجسم الحي في تشخيص الحساسية. بالإضافة إلى ذلك ، كنقطة نهاية لتقييم التجارب السريرية ، تظهر AECs تفوقا كبيرا على التقييمات الكلاسيكية “في الميدان”. من المهم فحص الارتباطات بين نقاط النهاية السريرية المختلفة ، لا سيما تشابه المعلمات الذاتية التي تم تقييمها من قبل المرضى (TNSS) والمقاييس الموضوعية (قياس الأنف الصوتي ، PNIF ، إفرازات الأنف) التي جمعها الباحث ، كخطوة أولية في التحقق من صحة نتائج AEC مقابل تلك التي تم الحصول عليها في إعداد “ميداني”.
التطبيقات أو الاتجاهات المستقبلية للطريقة
تقدم AECs طريقة ممكنة لتقسيم المرضى إلى مستجيبين محتملين وغير مستجيبين. تظهر هذه الطريقة وعدا كبيرا لتسريع التطورات السريرية في كل من العلاج الدوائي والعلاج المناعي لأمراض الحساسية34. وبالتالي ، كانت AECs واحدة من مجالات الاهتمام الرئيسية في السنوات الأخيرة. يمكن أن تكون AECs مفيدة في الدراسات طويلة الأجل عندما لا يكون من الممكن تقييم التعرض الطبيعي بسبب انخفاض عدد مسببات الحساسية.
The authors have nothing to disclose.
تم إعداد المنشور في إطار مشروع ممول من الأموال الممنوحة من وزارة العلوم والتعليم العالي في برنامج “المبادرة الإقليمية للتميز” للسنوات 2019-2022 ، المشروع رقم 016 / RID / 2018/19 ، مبلغ التمويل 11 998 121.30 زلوتي بولندي ، وعن طريق الإعانة الفرعية. A020.21.018 من الجامعة الطبية في فروتسواف ، بولندا.
Allergen exposure chamber (AEC) | custom made | — | with the air supply duct (with HEPA filters) and allergen blew into the AEC through a computer-controlled feeder |
Acoustic rhinometer | GM Instruments (Irvine, UK) | A1 clinical/ reseach | with reusable plastic tips, contoured for the right and left nostrils |
Air humidifier | Ohyama | SHM120D | |
Air quality meter | AZ Instrument | Green Eye VZ 7798 | termometer, humidity and CO2 meter |
Air-conditioning | DeLonghi | CKP 20EB | temperature range 18 – 25 °C |
Ceiling fans | Argos | Manhattan Ceiling Fan – 432/8317 | |
Computer-controlled feeder station | custom made | — | with control of "injection length", "break between injections ", “air supply” |
Disposable coveralls | VWR (Radnor, Pennsylvania, United States) | with hoodies | |
Floor fans | AEG | TVL 5537, column | |
Graphing program | GraphPad Software Inc. | Graph Pad Prism, v. 9.4.0 | |
House dust mite (HDM) | Allergopharma (Reinbek, Germany) | customized order | dried, purified Dermatophagoides pteronyssinus (Dp) mite bodies, stored at 4 °C until use |
Inspiratory flow meter | Clement Clarke International Ltd. (Harlow, UK) | portable inspiratory flow meter | with the disposable mask (size M), measuring inspiratory flow between 30 – 370 L/ min |
Laser particle counter (LPC) | Lighthouse Worldwide Solutions (USA) | SOLAIR Boulder Counte | |
Microphone system | Auna | VHF wireless microphone system | |
Peak flow matter (PFM) | CareFusion (Basingstoke, UK) | MicroPeak with a standard range of 60 – 900 L/ min | with the disposable paper tips |
Remote controls for filling questionnaires | Turning Technologies | Pilot TT ResponseCard LT, SAP: G040602A010 | a set of 32 remote controls for TT LT tests |
Spirometer | Medizintechnik AG (Zurich, Switzerland) | EasyOne 2001, NDD | with the disposable paper tips; the spirometer should meet the ISO 26 782: 2009 standard; daily calibration of the spirometer is required |
TV screen | Level | Level one 32" | |
Vacuum | Siemens | extreme silencePower VSQ5X1230 | with the HEPA filters |