تصنيع قوي للأنسجة من أجل زراعة طويلة الأمد لعضويات الدماغ المشتقة من iPSC لأبحاث الشيخوخة
Summary
يوفر البروتوكول الحالي إجراء خطوة بخطوة لتوليد وصيانة وتشيخ الكائنات العضوية الدماغية المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان (iPSCs). تتيح هذه الطريقة زراعة ونضج العضويات الدماغية لفترات طويلة ، مما يسهل نمذجة العمليات التي تنطوي عليها شيخوخة الدماغ والتسبب في الأمراض المرتبطة بالعمر.
Abstract
لا تلخص النماذج الحيوانية والخلوية المتاحة حاليا بشكل كامل تعقيد التغييرات التي تحدث في الدماغ البشري المسن. إن التطور الأخير للإجراءات التي تصف توليد العضويات الدماغية البشرية ، المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان (iPSCs) ، لديه القدرة على تحويل القدرة بشكل أساسي على نمذجة وفهم شيخوخة الدماغ البشري والعمليات المسببة للأمراض ذات الصلة. هنا ، يتم تقديم بروتوكول محسن لتوليد وصيانة وتشيخ وتوصيف الكائنات العضوية الدماغية البشرية المشتقة من iPSC. يمكن تنفيذ هذا البروتوكول لتوليد عضويات الدماغ بطريقة قابلة للتكرار ويعمل كدليل خطوة بخطوة ، ويتضمن أحدث التقنيات التي تؤدي إلى تحسين النضج العضوي والشيخوخة في الثقافة. تتم معالجة القضايا المحددة المتعلقة بالنضج العضوي ، والنخر ، والتباين ، وتأثيرات الدفعات. مجتمعة ، ستسمح هذه التطورات التكنولوجية بنمذجة شيخوخة الدماغ في المواد العضوية المستمدة من مجموعة متنوعة من المتبرعين البشريين الشباب والمسنين ، وكذلك الأفراد المصابين باضطرابات الدماغ المرتبطة بالعمر ، مما يسمح بتحديد الآليات الفسيولوجية والمسببة للأمراض لشيخوخة الدماغ البشري.
Introduction
أصبحت نماذج أمراض الشيخوخة ذات أهمية متزايدة مع استمرار ارتفاع متوسط العمر المتوقع للإنسان. كشفت الدراسات الجينومية واسعة النطاق عن السكان المسنين الذين يعانون من عدم تنظيم العمليات الجزيئية والتغيرات الجينية التي تؤثر على نوعية الحياة1. تتميز عملية الشيخوخة بفقدان عام لوظائف الكائن الحي ، بما في ذلك فقدان الوظيفة الإدراكية ، وزيادة خطر الإصابة بالاضطرابات التنكسية العصبية ، ومجموعة من الأمراض المزمنة2.
لا تمثل تقنيات زراعة الخلايا الحالية بشكل مناسب الطبيعة متعددة العوامل للشيخوخة ، حيث لا يمكن تكرار هذه الاختلالات بشكل صحيح باستخدام الطفرات أو السموم أو العدوى3. غالبا ما ترتبط النماذج الحيوانية التي تستكشف عملية الشيخوخة بأوقات تجريبية طويلة وتكاليف عالية ، ولكنها تجلب أيضا اعتبارات أخلاقية معها. يمكن أن يؤدي استخدام الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات (iPSCs) من المرضى إلى توضيح الآليات الجزيئية التي تكمن وراء تطور المرض حيث تسمح iPSCs بالتطور الطبيعي للخلايا إلى أنسجة ناضجة3. أصبحت iPSCs الحصان العامل للعديد من المختبرات التي تحقق في الاضطرابات التنكسية العصبية ، حيث لا يبدو أن إعادة البرمجة الخلوية للخلايا المحصودة تمحو المرض أو بصمات الشيخوخة للمتبرعين4. تلخص هذه البصمات الأنماط الظاهرية الخلوية التي تم إثباتها في النماذج البشرية والحيوانية ، مما يجعل iPSCs مناسبة لفحص التدهور الخلوي الفردي لأنسجة المخ عالية الكثافة 5,6. أصبحت المواد العضوية المشتقة من IPSC النموذج البارز لزراعة الأنسجة ثلاثية الأبعاد ، مما يتيح تفاعلات أكثر تعقيدا من خلية إلى أخرى وتحسين التلخيص التنموي. على الرغم من استخدامها في المقام الأول للبيانات التنموية ، فقد تم تطبيق المواد العضوية بشكل متزايد نحو نمذجة الأمراض ، وتحديدا نماذج الالتهاب والتنكس العصبي والشيخوخة7. بناء على دراسات iPSC السابقة ، تحتفظ الكائنات العضوية بالأنماط الظاهرية للمرض والأنماط الظاهرية الخلوية في السياق الفسيولوجي لاتصالات الشبكة الشبيهة بالأنسجة 8,9. ومع ذلك ، فإن زراعة الأنسجة ثلاثية الأبعاد ذات الأبعاد المعينة يمكن أن يكون أمرا صعبا ، خاصة لفترات طويلة من الزمن.
يقدم هذا العمل طريقة مفصلة للتوليد القابل للتكرار من العضويات الدماغية التي تسمح للأنسجة بالنضوج بشكل كبير في الحجم لفترات أطول. ظل إنشاء الأعضاء الدماغية موحدا نسبيا ، حيث اعتمد طرقا من عدة بروتوكولات بارزة10,11. ومع ذلك ، تم اقتراح العديد من التعديلات لتحسين التمايز والصيانة. تشمل هذه الطرق البديلة استخدام العوامل العصبية لتعزيز التمايز العصبي12 ، وسقالات إضافية لتحسين تبادل المغذيات لتعزيز طول العمر الخلوي 13 ، وإثارة الإجهاد المنخفض للثقافة والنمو لفترات طويلة14. تم دمج هذه التحسينات في هذه الطريقة لتطوير عضويات ناضجة قادرة على التعبير عن الأنماط الظاهرية التنكسية العصبية والشيخوخة.
Protocol
Representative Results
Discussion
يعد التكوين الموحد ل EBs خطوة حاسمة في التحويل القابل للتكرار للخلايا الجذعية متعددة القدرات إلى عضويات دماغية. يمكن أن يختلف تجميع قوة الخلايا الجذعية إلى أنسجة مفردة اعتمادا على هندسة الآبار المقعرة وكثافة البذر ومعالجة البئر. على الرغم من أن الطريقة الحالية تشير إلى نطاق قطر يتراوح بين 500 و 600 ميكرومتر بعد 6 أيام ، إلا أن هذه الأقطار لا تستبعد الأقطار الأخرى للتكوين العضوي السليم ، حيث أثبتت العديد من الأقطار الأخرى نجاحها. ومع ذلك ، فقد ثبت أن الأقطار المتفاوتة تؤثر على معدلات التمايز والنجاح29. لأغراض التكاثر ، يوصى بشدة بتغيرات القطر التي تقل عن 50 ميكرومتر20. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن تمديد عدد أيام الحث العصبي من 6 إلى 10 أيام للسماح لقطر EBs بالنمو ، حيث ثبت أن استخدام مثبطات SMAD ينتج بكفاءة ويحافظ على تكوين الظهارة العصبية بعد 5 أيام فقط من التعرض30. في غياب مثبطات SMAD ، يمكن أن يؤدي الحث العصبي إلى نتائج غير متسقة ، مما يتطلب فترات تحريض أطول. مثبطات SMAD المذكورة في هذا العمل هي الأكثر فعالية ، ولكن يمكن استخدام جزيئات صغيرة أخرى من dorsomorphin و TGF β بتركيزها الفعال.
توفر مصفوفة الغشاء القاعدي ركيزة ممتازة للنمو ويمكن إدارتها بشكل مختلف. تضمنت الاستخدامات المبكرة للمصفوفة الغشاء القاعدي كطلاء جيد31. ومع ذلك ، أظهر استخدام المصفوفة لتضمين الأنسجة لتحسين التمايز والنضج في هذه الأنسجة32. بالنسبة للعضويات ، فقد ثبت أن استخدام المصفوفة يحسن تمايز EB إلى عضويات ، ويعزز النضج ، ويطيل فترات الاستزراع33. في حين أنه لا يزال من الممكن تشكيل المواد العضوية بدون المصفوفة ، حيث سعت العديد من المجموعات إلى تحقيق زراعة أنسجة خالية من المصفوفة 34,35 ، فقد وجدت الدراسات أن الكائنات العضوية المضمنة فيالمصفوفة لديها فرصة أكبر لأوقات استزراع طويلة وتتطلب صيانة أقل 36. توفر طريقة الدمل للتضمين تغطية متساوية للسطح العضوي ، مما يضمن انتشارا مشابها ، والوصول إلى العناصر الغذائية ، والتمايز القابل للتكرار. بدلا من ذلك ، يمكن استخدام تضمين القبة لتغليف المواد العضوية بالكامل37.
يعد نقل EBs إلى غمازات مصفوفة الغشاء خطوة حاسمة. على الرغم من أن طرف ماصة سعة 1 مل له فتحة واسعة بما يكفي لنقل EBs ، إلا أنه يفضل استخدام طرف 200 ميكرولتر لسهولة النقل. يجب قطع أطراف 200 ميكرولتر لإنشاء فتحة كبيرة بما يكفي ، مما يضمن حافة ناعمة لتقليل إجهاد القص عند الماصة. بدلا من ذلك ، توجد أطراف عريضة التجويف 200 ميكرولتر لسهولة النقل. يجب أن يتم السحب ببطء ، لأن السحب السريع قد يعطل محيط العضو ويعيق النمو السليم. يجب إيلاء اهتمام خاص لضمان نقل وسيط كاف لتوفير العناصر الغذائية. القليل جدا من الوسط يتعرض لخطر جفاف العضو العضوي ، مما يسبب النخر. يمكن أن يؤدي نقل EB مع الكثير من وسائط الثقافة إلى تخفيف المصفوفة بشكل كبير والفشل في تغليف العضو العضوي بشكل آمن. من الناحية المثالية ، يجب عدم تخفيف المصفوفة بأكثر من 50٪ لضمان بلمرتها وعملها كوحدة تحكم في المحتوى المؤسسي ل EBs. إذا لم ينجح التضمين ، فيمكن استرداد EB وإعادة تغليفه. يمكن إجراء إعادة التغليف في المصفوفة الجديدة في أي وقت لتزويد العضو العضوي بدعم إضافي.
على غرار تضمين المصفوفة للسقالات ، توفر ألياف PLGA دعما إضافيا للنمو ثلاثي الأبعاد. تم دمجها في الأصل لإنتاج عضويات ممدودة وزيادة مساحة السطح38 ، وقد تم تحديد دمج ألياف PLGA تدريجيا كأداة إضافية لتحسين التمايز العضوي والنضج39. نظرا لأن المزيد من المختبرات تتطلع إلى تقليل استخدام المصفوفة أو إلغائها تماما ، فإن خصائص التنظيم الذاتي للعضويات المدعومة بالألياف المدمجة توفر سقالات كافية لإنشاء الأنسجة ثلاثية الأبعاد والتمايز39. هنا ، تم الجمع بين كلتا الطريقتين لزيادة فرص الثقافة طويلة الأجل38,39. يعد دمج الألياف أثناء التجميع الأولي أمرا بالغ الأهمية ، حيث قد لا يتم إدخالها في مرحلة لاحقة. بعد الطرد المركزي ، فإن التحقق من وجود اثنين من الألياف بين الخلايا المجمعة سيضمن دمج الألياف في EB. إذا لم ينجح ، فإن الطموح اللطيف للبئر وإعادة الطرد المركزي يجب أن يضمن الخلط.
خطوة أخرى حاسمة في صيانة المواد العضوية هي إدخال شاكر مداري لتحسين تروية الوسائط. في التكرارات المبكرة لبروتوكولات الأعضاء ، تم استخدام مفاعل حيوي دوار لإنشاء التحريض11. يوفر الهزاز المداري عند 90 دورة في الدقيقة تحريضا كافيا دون تدمير قطرة المصفوفة أو إتلاف مورفولوجيا العضوي. تمتنع بعض المجموعات عن استخدام سقالة المصفوفة ولكنها تحتفظ بإثارة شاكر لتوفير بيئة مناسبة34. كما هو الحال مع جميع البروتوكولات ، يجب ضبط سرعة الدوران اعتمادا على شاكر لتقليل مقدار إجهاد القص. إذا تم اختيار تضمين قبة ، فيمكن استخدام شاكر مائل لتقليل مقدار إجهاد القص11,34.
مجتمعة ، يوفر تكامل العديد من التقنيات المختارة طريقة قوية لتشكيل عضوي مشتق من iPSC. هناك عدة طرق لإنشاء المواد العضوية والحفاظ عليها ، لكن العديد منها يركز على مسارات التمايز المبكرة. في هذا العمل ، تم الجمع بين العديد من التقنيات المختلفة لزرع المواد العضوية لفترات طويلة من الزمن ، بعد مرحلة التمايز ، وفي فترة النضج حيث يمكن أن تبدأ الأنماط الظاهرية للشيخوخة في التطور. يسمح دمج هذه التقنيات بالنضج المطول دون الحاجة إلى عوامل بيولوجية خارجية للحفاظ على الثقافات ، مع الاحتفاظ بالتنظيم الذاتي والتقدم الطبيعي للشيخوخة.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
تم دعم هذا العمل من قبل مبادرة هولندا للأعضاء على الرقاقة ، وهو مشروع NWO Gravitation (024.003.001) بتمويل من وزارة التعليم والثقافة والعلوم في حكومة هولندا. ولحسن الحظ، تعترف DCB بالدعم المالي المقدم من المجلس الوطني للعلوم والتكنولوجيا (CONACyT) في شكل منحة دراسية للدكتوراه.
Materials
| 2-β-Mercaptoethanol | Thermo Fisher Scientific | 31350010 | |
| 4′,6-Diamidino-2-phenylindoledihydrochloride (DAPI) | Invitrogen | D1306 | 1:4000 |
| 6-well Clear Flat Bottom CELLSTAR Cell Culture Multiwell Plate | Greiner Bio-One | 657185 | |
| 6-well Clear Flat Bottom Ultra-Low Attachment Well Plate | Corning | 3471 | |
| 96-well Clear Round Bottom Ultra-Low Attachment Microplate | Corning | 7007 | |
| 96-Well, Nunclon Delta-Treated, Flat-Bottom Microplate | Thermo Fisher Scientific | 136101 | |
| Accutase | Sigma-Aldrich | 46964 | cell detachment solution |
| Antibiotic-Antimycotic (100x) | Gibco | 15240062 | |
| B27 Suppement (with Vitamin A) (50x) | Gibco | 17504044 | |
| B27 Supplement (minus Vitamin A) (50x) | Gibco | 12587010 | |
| BD Vacutainer™ Glass Mononuclear Cell Preparation (CPT) Tubes | Thermo Fisher Scientific | 02-685-125 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A9418 | |
| Centrifuge | Eppendorf | 5810 R | With plate holders |
| CHIR99021 | Selleck Chemicals | S2924 | |
| CytoTune Sendai Reprogramming Vector | Thermo Fisher Scientific | A1378001 | |
| ddPCR primers | human | MAPT | Bio-Rad | dHsaCPE192234 | |
| ddPCR primers | human | RBFOX3 (NeuN) | Bio-Rad | dHsaCPE5052108 | |
| DMEM/F12 | Thermo Fisher Scientific | 11320074 | |
| Doublecortin (DCX) | Santa Cruz Biotechnology | SC-8066 | 1:500 |
| Dulbecco’s phosphate buffered saline (DPBS) | Thermo Fisher Scientific | 14190144 | no calcium, no magnesium |
| Eppendorf cups, 1.5 mL | Eppendorf | 0030 125.215 | |
| Essential 6 | Gibco | A1516401 | |
| Essential 8 | Gibco | A1517001 | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) | Invitrogen | 15575020 | |
| Falcon tubes, 15 mL, conical | Greiner Bio-One | 188271-N | |
| Formaldehyde | Sigma-Aldrich | 252549 | 37% Stock solution, diluted to 4% in PBS |
| Geltrex LDEV-Free Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix | Thermo Fisher Scientific | A1413202 | |
| GlutaMax (100x) | Gibco | 35050038 | |
| Hemacytometer cell counter | Hausser scientific | 1490 | |
| HEPES Buffer | Thermo Fisher Scientific | 15-630-080 | |
| Insulin | Sigma-Aldrich | I9278 | |
| LDN 193189 | StemCell Technologies | 72147 | |
| MAP2 | Abcam | ab32454 | 1:200 |
| Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix, LDEV-free | Corning | 356230 | basement membrane matrix |
| MEM-Non Essential Amino Acid Solution (MEM-NEAA; 100x) | Thermo Fisher Scientific | 11140050 | |
| Multilabel Counter Victor 3 Plate Reader | Perkin Elmer | 1420 | luminometer |
| MycoAlert Mycoplasma Detection Kit | Lonza | LT07-318 | |
| N-2 Supplement (100x) | Thermo Fisher Scientific | 17502-048 | |
| NeuN | Millipore | MAB377 | 1:500 |
| Neurobasal Medium | Thermo Fisher Scientific | 21103049 | |
| Oct-3/4 Antibody (C-10) Alexa Fluor 647 | Santa Cruz Biotechnology | sc-5279 AF647 | 1:100 |
| Parafilm | Bemis | PM-996 | thermoplastic film sheet |
| PAX6 | Thermo Fisher Scientific | 42-6600 | 1:200 |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco | 15070063 | |
| Poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) microfilaments | Ethicon | J463 | |
| QX200 Droplet digital PCR system | Bio-Rad | 1864001 | |
| ROCK inhibitor (Y27632) | Selleck Chemicals | S1049 | |
| SB431542 | R&D Systems | 1614/50 | |
| SOX2 Monoclonal Antibody (Btjce), Alexa Fluor 488, eBioscience | Invitrogen | 53-9811-80 | 1:100 |
| Synapsin I (SYN) | Calbiochem | 574777 | 1:200 |
| Triton-X 100 | Sigma-Aldrich | T8787 | |
| TUJ1 | Santa Cruz Biotechnology | sc-80005 | Beta-3-tubulin; 1:500 |
| XAV939 | Tocris Bioscience | 3748 |
References
- Liu, G. H., et al. Aging Atlas: a multi-omics database for aging biology. Nucleic Acids Research. 49, 825-830 (2021).
- Ferrucci, L., et al. Measuring biological aging in humans: A quest. Cell. 19 (2), 13080 (2020).
- Mertens, J., Reid, D., Lau, S., Kim, Y., Gage, F. H. Aging in a dish: iPSC-derived and directly induced neurons for studying brain aging and age-related neurodegenerative diseases. Annu Rev Genet. 52, 271-293 (2018).
- Mertens, J., et al. Age-dependent instability of mature neuronal fate in induced neurons from Alzheimer’s patients. Cell Stem Cell. 28 (9), 1533-1548 (2021).
- Lin, Y. T., et al. APOE4 causes widespread molecular and cellular alterations associated with Alzheimer’s disease phenotypes in human iPSC-derived brain cell types. Neuron. 98 (6), 1141-1154 (2018).
- Fang, E. F., et al. Mitophagy inhibits amyloid-β and tau pathology and reverses cognitive deficits in models of Alzheimer’s disease. Nature Neuroscience. 22 (3), 401-412 (2019).
- Hu, J. L., Todhunter, M. E., LaBarge, M. A., Gartner, Z. J. Opportunities for organoids as new models of aging. Journal of Cell Biology. 217 (1), 39-50 (2018).
- Choi, S. H., et al. A three-dimensional human neural cell culture model of Alzheimer’s disease. Nature. 515 (7526), 274-278 (2014).
- Gonzalez, C., et al. Modeling amyloid beta and tau pathology in human cerebral organoids. Molecular Psychiatry. 23 (12), 2363-2374 (2018).
- Yoon, S. -. J., et al. Reliability of human cortical organoid generation. Nature Methods. 16 (1), 75-78 (2019).
- Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. Generation of cerebral organoids from human pluripotent stem cells. Nature Protocols. 9 (10), 2329-2340 (2014).
- Muratore, C. R., Srikanth, P., Callahan, D. G., Young-Pearse, T. L. Comparison and optimization of hiPSC forebrain cortical differentiation protocols. PLoS ONE. 9 (8), 105807 (2014).
- Giandomenico, S. L., Sutcliffe, M., Lancaster, M. A. Generation and long-term culture of advanced cerebral organoids for studying later stages of neural development. Nature Protocols. 16 (2), 579-602 (2020).
- Goto-Silva, L., et al. Computational fluid dynamic analysis of physical forces playing a role in brain organoid cultures in two different multiplex platforms. BMC Developmental Biology. 19 (1), 1-10 (2019).
- Sommer, A. G., et al. Generation of human induced pluripotent stem cells from peripheral blood using the STEMCCA lentiviral vector. Journal of Visualized Experiments. (68), e4327 (2012).
- Beers, J., et al. A cost-effective and efficient reprogramming platform for large-scale production of integration-free human induced pluripotent stem cells in chemically defined culture. Scientific Reports. 5 (1), 1-9 (2015).
- Wakao, S., et al. Morphologic and gene expression criteria for identifying human induced pluripotent stem cells. PLoS ONE. 7 (12), e48677 (2012).
- Schlaeger, T. M., et al. A comparison of non-integrating reprogramming methods. Nature Biotechnology. 33 (1), 58-63 (2015).
- JoVE. Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. Using a Hemacytometer to Count Cells. JoVE Science Education Database. , (2022).
- Choy Buentello, D., Koch, L. S., Trujillo-De Santiago, G., Alvarez, M. M., Broersen, K. Use of standard U-bottom and V-bottom well plates to generate neuroepithelial embryoid bodies. PLOS ONE. 17 (5), 0262062 (2022).
- Ellis, P., et al. SOX2, a persistent marker for multipotential neural stem cells derived from embryonic stem cells, the embryo or the adult. Developmental Neuroscience. 26 (2-4), 148-165 (2004).
- Lee, S., et al. TuJ1 (class III β-tubulin) expression suggests dynamic redistribution of follicular dendritic cells in lymphoid tissue. European Journal of Cell Biology. 84 (2-3), 453-459 (2005).
- Suzuki, S., Namiki, J., Shibata, S., Mastuzaki, Y., Okano, H. The neural stem/progenitor cell marker nestin is expressed in proliferative endothelial cells, but not in mature vasculature. Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 58 (8), 721-730 (2010).
- Soltani, M. H., et al. Microtubule-associated protein 2, a marker of neuronal differentiation, induces mitotic defects, inhibits growth of melanoma cells, and predicts metastatic potential of cutaneous melanoma. The American Journal of Pathology. 166 (6), 1841-1850 (2005).
- Wilson, P. G., Stice, S. S. Development and differentiation of neural rosettes derived from human embryonic stem cells. Stem Cell Reviews. 2 (1), 67-77 (2006).
- Gusel’nikova, V. V., Korzhevskiy, D. E. NeuN as a neuronal nuclear antigen and neuron differentiation marker. Acta Naturae. 7 (25), 42-47 (2015).
- Rao, M. S., Hattiangady, B., Shetty, A. K. The window and mechanisms of major age-related decline in the production of new neurons within the dentate gyrus of the hippocampus. Aging Cell. 5 (6), 545-558 (2006).
- Meng, L., et al. A synapsin I cleavage fragment contributes to synaptic dysfunction in Alzheimer’s disease. Aging Cell. 21 (5), 13619 (2022).
- Moon, S. H., et al. Optimizing human embryonic stem cells differentiation efficiency by screening size-tunable homogenous embryoid bodies. Biomaterials. 35 (23), 5987-5997 (2014).
- Chambers, S. M., et al. Highly efficient neural conversion of human ES and iPS cells by dual inhibition of SMAD signaling. Nature Biotechnology. 27 (3), 275-280 (2009).
- Lee, S. -. W., et al. Optimization of Matrigel-based culture for expansion of neural stem cells. Animal Cells and Systems. 19 (3), 175-180 (2015).
- Zhang, J., et al. Extracellular matrix promotes highly efficient cardiac differentiation of human pluripotent stem cells: The matrix sandwich method. Circulation Research. 111 (9), 1125-1136 (2012).
- Hocevar, S. E., Liu, L., Duncan, R. K. Matrigel is required for efficient differentiation of isolated, stem cell-derived otic vesicles into inner ear organoids. Stem Cell Research. 53, 102295 (2021).
- Birey, F., et al. Assembly of functionally integrated human forebrain spheroids. Nature. 545 (7652), 54-59 (2017).
- Kozlowski, M. T., Crook, C. J., Ku, H. T. Towards organoid culture without Matrigel. Communications Biology. 4 (1), 1-15 (2021).
- Kaiser, A., Kale, A., Novozhilova, E., Olivius, P. The effects of Matrigel® on the survival and differentiation of a human neural progenitor dissociated sphere culture. The Anatomical Record. 303 (3), 441-450 (2020).
- Kakni, P., et al. Intestinal organoid culture in polymer film-based microwell arrays. Advanced Biosystems. 4 (10), 2000126 (2020).
- Lancaster, M. A., et al. Guided self-organization and cortical plate formation in human brain organoids. Nature Biotechnology. 35 (7), 659-666 (2017).
- Tejchman, A., Znój, A., Chlebanowska, P., Frączek-Szczypta, A., Majka, M. Carbon fibers as a new type of scaffold for midbrain organoid development. International Journal of Molecular Sciences. 21 (17), 5959 (2020).
