Summary

Source et voie de contamination par les alcaloïdes pyrrolizidiniques dans les échantillons de thé

Published: September 28, 2022
doi:

Summary

Le présent protocole décrit la contamination des alcaloïdes pyrrolizidiniques (AP) dans les échantillons de thé provenant de mauvaises herbes productrices d’AP dans les jardins de thé.

Abstract

Les alcaloïdes pyrrolizidiniques toxiques (PA) se trouvent dans les échantillons de thé, qui constituent une menace pour la santé humaine. Cependant, la source et la voie de contamination par le PA dans les échantillons de thé sont restées incertaines. Dans ce travail, une méthode adsorbante combinée avec UPLC-MS/MS a été développée pour déterminer 15 PA dans la mauvaise herbe Ageratum conyzoides L., A. conyzoides sol rhizosphérique, feuilles de thé fraîches et échantillons de thé séché. Les taux de récupération moyens variaient de 78 % à 111 %, avec des écarts-types relatifs de 0,33 % à 14,8 %. Quinze paires d’échantillons de sol rhizosphérique d’A. conyzoides et d’A. conyzoides et 60 échantillons de feuilles de thé fraîches ont été prélevés dans le jardin de thé Jinzhai dans la province de l’Anhui, en Chine, et analysés pour les 15 PA. Les 15 AP n’ont pas tous été détectés dans les feuilles de thé fraîches, à l’exception de l’oxyde de N-intermédiaire (ImNO) et de la sénécionine (Sn). La teneur en ImNO (34,7 μg/kg) était supérieure à celle de Sn (9,69 μg/kg). En outre, ImNO et Sn étaient concentrés dans les jeunes feuilles du théier, tandis que leur contenu était plus faible dans les vieilles feuilles. Les résultats ont indiqué que les AP dans le thé ont été transférés par le chemin des mauvaises herbes productrices de PA – feuilles de thé fraîches dans les jardins de thé.

Introduction

En tant que métabolites secondaires, les alcaloïdes pyrrolizidiniques (AP) protègent les plantes contre les herbivores, les insectes et les agents pathogènes 1,2. Jusqu’à présent, plus de 660 PA et PA-N-oxydes (PANO) avec des structures différentes ont été trouvés dans plus de 6 000 espèces végétales dans le monde 3,4. Les plantes productrices de PA se trouvent principalement dans les familles Asteraceae, Boraginaceae, Fabaceae et Apocynaceae 5,6. Les PA sont facilement oxydés en alcaloïdes déhydropyrrolizidiniques instables, qui ont une forte électrophilie et peuvent attaquer les nucléophiles tels que l’ADN et les protéines, entraînant une nécrose des cellules hépatiques, des occlusions veineuses, une cirrhose, une ascite et d’autres symptômes 7,8. Le principal organe cible de la toxicité du PA est le foie. Les AP peuvent également causer une toxicité pour les poumons, les reins et d’autres organes, ainsi qu’une toxicité mutagénique, cancérogène et pour le développement 9,10.

Des cas d’intoxication humaine et animale ont été signalés dans de nombreux pays en raison de l’ingestion d’herbes, de suppléments ou de thés traditionnels contenant des AP ou de la contamination indirecte d’aliments tels que le lait, le miel ou la viande (toxique par ingestion de pâturages contenant des AP)11,12,13. Les conclusions de l’Autorité européenne de sécurité des aliments (EFSA) indiquent que des substances telles que le thé (à base de plantes) sont une source importante d’exposition humaine aux PA/PANO14. Les échantillons de thé ne produisent pas d’AP, alors que les plantes productrices d’AP se trouvent couramment dans les jardins de thé (par exemple, Emilia sonchifolia, Senecio angulatus et Ageratum conyzoides)15. On soupçonnait auparavant que le thé pouvait être contaminé par des AP provenant de leurs usines de production pendant la cueillette et la transformation. Cependant, des AP ont également été détectés dans certaines feuilles de thé cueillies à la main (c.-à-d. aucune plante produisant de l’AP), ce qui suggère qu’il doit y avoir d’autres voies ou sources de contamination16. Une expérience de co-culture de séneçons (Senecio jacobaea) avec des plantes de mélisse (Melissa officinalis), de menthe poivrée (Mentha piperita), de persil (Petroselinum crispum), de camomille (Matricaria recutita) et de capucine (Tropaeolum majus) a été menée, et les résultats ont montré que des AP ont été détectés dans toutes ces plantes17. Il a été vérifié que les AP sont effectivement transférés et échangés entre plantes vivantes via le sol18,19. Van Wyk et al.20 ont constaté que le thé rooibos (Aspalathus linearis) était gravement contaminé dans les sites riches en mauvaises herbes et contenait des AP du même type et de la même proportion. Cependant, aucun AP n’a été détecté dans le thé rooibos dans les sites exempts de mauvaises herbes.

À l’heure actuelle, la spectrométrie de masse en tandem par chromatographie liquide à ultra-haute performance (UPLC-MS/MS) à haute sélectivité et sensibilité a été largement utilisée dans l’analyse qualitative et quantitative des AP dans les produits agricoles et alimentaires21,22. La méthode de traitement des échantillons comprend généralement soit l’extraction en phase solide (SPE), soit le nettoyage QuEChERS (Quick Easy Cheap Effective Rugged Safe) d’extraits de matrices alimentaires complexes, qui peuvent obtenir la sensibilité la plus élevée possible12,19. Cependant, des méthodes analytiques robustes permettant la détection et la quantification des AP dans des matrices complexes comme le sol, les mauvaises herbes et les feuilles de thé fraîches font toujours défaut.

Cette étude a analysé 15 PA dans des échantillons de thé séché, des feuilles de thé fraîches, des mauvaises herbes et des échantillons de sol rhizosphérique avec UPLC-MS / MS combiné à une méthode de purification adsorbante. En outre, 15 échantillons appariés de mauvaises herbes et de sols rhizosphériques de mauvaises herbes et 60 échantillons de feuilles de thé fraîches ont été prélevés dans cinq sites d’échantillonnage du jardin de thé Jinzhai dans la province de l’Anhui, en Chine, et ont été analysés pour 15 AP. Ces résultats peuvent fournir une méthode d’enquête et des informations sur la source et la voie des PA (contamination) dans les échantillons de thé pour assurer la qualité et la sécurité du thé.

Protocol

Pour la présente étude, les espèces de mauvaises herbes suivantes ont été collectées : Ludwigia prostrata Roxb., Murdannia triquetra (Wall. ex C. B. Clarke) Bruckn., Ageratum conyzoides L., Chenopodium ambrosioides, Trachelospermum jasminoide (L.) Lem., Ageratum conyzoides L., Emilia sonchifolia (L.) DC, Ageratum conyzoides L. et Crassocephalum crepidioides (Benth.) S. Moore. Les feuilles de thé fraîches ont été cueillies dans la …

Representative Results

La méthode optimisée de purification et d’analyse des adsorbants de 15 PA dans des échantillons de thé séché, des feuilles de thé fraîches, des mauvaises herbes et de la terre a été établie et comparée à la méthode de purification couramment utilisée à l’aide de la cartouche SPE. Les résultats ont montré que les récupérations des 15 PA dans les échantillons de thé séché, les mauvaises herbes et les feuilles de thé fraîches à l’aide de la cartouche SPE étaient de 72% à 120%, tandis que c…

Discussion

Le présent travail a été conçu pour développer une méthode efficace et sensible pour explorer les voies de contamination et les sources d’AP dans les échantillons de thé ainsi que la distribution des AP dans différentes parties des théiers. Cependant, dans cette étude, seulement 15 AP ont été séparés avec succès sur la colonne chromatographique, ce qui est un très petit nombre par rapport au grand nombre d’alcaloïdes chez les espèces végétales 3,4<sup class="xre…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Ce travail a été soutenu par la Fondation scientifique naturelle nationale de Chine (32102244), le Projet national d’évaluation de la qualité, de la sécurité et des risques des produits agricoles (GJFP2021001), la Fondation scientifique naturelle de la province de l’Anhui (19252002) et l’USDA (HAW05020H).

Materials

Acetonitrile (99.9%) Tedia Company,Inc. 21115197 CAS No:75-05-8
Ammonia (25%-28%) Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co., Ltd. 181210 CAS No:1336-21-6
Ammonium formate (97.0%) Anpel Laboratory Technoiogies (shanghai) G0860050 CAS No:540-69-2
Carbon-GCB CNW B7760030 120-400 MESH, 10g. per box 
Centrifuge Z 36 HK HERMLE Z36HK 30000 rpm (min:10 rpm), Dimensions (W x H x D): 71.5 cm× 42 cm × 51 cm
Commercially available tea product Lvming, Qingshan, Luyuchun, Changling, Huixing, Wuyunjian, Heshengchun loose tea Green tea
Europine N-oxid (EuNO) (98.0%) BioCrick 323256 CAS No:65582-53-8
Europine (Eu) (98.0%) BioCrick 98222 CAS No:570-19-4
Formate (98.0%) Aladdin E2022005 CAS No:64-18-6
HC-C18 CNW D2110060 40-63 μm,100g.per box
Heliotrine (He) (98.0%) BioCrick 906426 CAS No:303-33-3
Heliotrine-N-oxide (HeNO) (98.0%) BioCrick 22581 CAS No:6209-65-0
High speed centrifuge TG16-WS cence 203158000 Max:16000 r/min, 330 × 390 × 300 mm (L × W × H), Capacity: 6 × 50 mL
HSS T3 column Waters 186004976 ACQUITY UPLC HSS T3 (2.1 × 100 mm 1.8 μm)
Intermedine (Im) (98.0%) BioCrick 114843 CAS No:10285-06-0
Intermedine-N-oxide (ImNO) (98.0%) BioCrick 340066 CAS No:95462-14-9
Jacobine (Jb) (98.0%) BioCrick 132282048 CAS No:6870-67-3
Jacobine-N-oxide (JbNO) (98.0%) ChemFaces CFN00461 CAS No:38710-25-7
Methyl Alcohol (99.9%) Tedia Company,Inc. 21115100 CAS No:67-56-1
PSA Agela P19-00833 40-60 μm, 60 Å 100g.per box
Retrorsine (Re) (98.0%) BioCrick 5281743 CAS No:480-54-6
Retrorsine-N-oxide (ReNO) (98.0%) BioCrick 5281734 CAS No:15503-86-3
Senecionine (Sc) (98.0%) BioCrick 5280906 CAS No:130-01-8
Senecionine-N-oxide (ScNO) (98.0%) BioCrick 5380876 CAS No:13268-67-2
Seneciphylline N-oxid (SpNO) (98.0%) BioCrick 6442619 CAS No:38710-26-8
Seneciphylline (Sp) (98.0%) BioCrick 5281750 CAS No:480-81-9
Senkirkine (Sk) (98.0%) BioCrick 5281752 CAS No:2318-18-5
SPE PCX Agilent Technologies 12108206 Cation Mixed Mode, 6 mL
Sulfuric acid (97%) Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co., Ltd. 1003019 CAS No:7664-93-9
Trisodium citrate Sinpharm Chemical Reagent Co., Ltd. 20121009 CAS No:6132-04-3
Ultrasonic cleaner Supmile KQ-600B Inner slot size: 500 × 300 × 150 mm; Capacity: 22.5 L
UPLC-xevoTQMS Waters ZPLYY-003 Triple four-stage rod mass analyzer, Waters Alliance 2695/Waters ACQUITY UPLC Liquid Phase System
Water bath thermostat oscillator Guoyu instrument SHY-2AHS Oscillation times:  60-300 times/min, Constant temperature range: room temperature to 100 °C

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Cite This Article
Jiao, W., Shen, T., Wang, L., Zhu, L., Li, Q. X., Wang, C., Chen, H., Hua, R., Wu, X. Source and Route of Pyrrolizidine Alkaloid Contamination in Tea Samples. J. Vis. Exp. (187), e64375, doi:10.3791/64375 (2022).

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