يوصف جهاز تحديد ملامح غسيل الكلى الدقيق لأخذ عينات من المواد المذابة في المياه المسامية المذابة عبر واجهة التربة والمياه المؤكسجة في الموقع بأقل قدر من الاضطراب. تم تصميم هذا الجهاز لالتقاط التغيرات السريعة في ملامح عمق التركيز الناجمة عن الاضطرابات في واجهة التربة والمياه وخارجها.
تتحول العمليات البيوجيوكيميائية بسرعة في كل من الأبعاد المكانية (مقياس المليمتر) والزماني (مقياس الساعة إلى مقياس اليوم) عند السطح البيني للأكسجين ونقص الأكسجين استجابة للاضطرابات. يتطلب فك رموز التغيرات البيوجيوكيميائية السريعة أدوات في الموقع ذات الحد الأدنى من التدخل الجراحي مع دقة عالية لأخذ العينات المكانية والزمانية. ومع ذلك ، فإن أجهزة أخذ العينات السلبية المتاحة ليست مفيدة للغاية في كثير من الحالات إما بسبب طبيعتها التي يمكن التخلص منها أو بسبب التعقيد وعبء العمل الواسع لإعداد العينات.
لمعالجة هذه المشكلة ، تم إنشاء ملف تعريف غسيل الكلى الدقيق مع 33 أنبوبا فرديا من الأغشية النانوية بولي إيثر سلفون (شبه منفذة ، <حجم مسام 20 نانومتر) مدمجة في الهيكل العظمي أحادي البعد (60 مم) لأخذ عينات متكررة من المركبات الذائبة في مياه المسام عبر واجهة التربة والماء بدقة عالية تبلغ 1.8 مم (القطر الخارجي بالإضافة إلى تباعد واحد ، أي 0.1 مم بين المجسات). تعتمد آلية أخذ العينات على مبدأ انتشار تدرج التركيز. يسمح التحميل التلقائي للمياه المنزوعة الغازات بالحد الأدنى من الاضطراب للأنواع الكيميائية عبر واجهة الأكسجين والأكسجين.
تصف هذه الورقة إجراءات إعداد الجهاز وأخذ عينات المياه المسامية المستمرة عبر واجهة التربة والمياه على أساس يومي. تم قياس ملامح عمق التركيز بشكل انتقائي قبل (في اليوم 6) وبعد (في اليوم 7) الاضطرابات الناجمة عن الري. أظهرت النتائج أن ملامح عمق التركيز كانت تمر بتغيرات سريعة ، خاصة بالنسبة للعناصر الحساسة للأكسدة والاختزال (أي الحديد والزرنيخ). يمكن أن تساعد هذه البروتوكولات في التحقيق في الاستجابات البيوجيوكيميائية عبر واجهة التربة والمياه في ظل الاضطرابات المختلفة الناجمة عن العوامل الفيزيائية والكيميائية والبيولوجية. تناقش الورقة بدقة مزايا وعيوب هذه الطريقة للاستخدام المحتمل في العلوم البيئية.
تعد واجهة الأكسجين ونقص الأكسجين إحدى السمات العامة في المحيط الحيوي والتي تعتبر حيوية للدورة البيوجيوكيميائية1. هذه الواجهة غير متجانسة للغاية ، حيث يمتد النطاق المكاني من ملليمترات في واجهة الرواسب / التربة والمياه 1,2 إلى آلاف الأمتار في منطقة نقص الأكسجين المحيطية 3,4. هذه الواجهة هي موطن مثالي لدراسة تعقيد الكيمياء الحيوية الأولية.
تتميز واجهات التربة والمياه بميزة تدرج أكسجين نموذجية في حدود سنتيمترات ويمكن تأسيسها بسهولة في تجارب mesocosm. بدءا من استهلاك الأكسجين الجزيئي من المياه السطحية ، تقود المجتمعات الميكروبية الوظيفية الطبقية تطوير تدرجات مختلفة ، مثل O2 ، ودرجة الحموضة ، وتدرجات Eh ، على مقياس المليمتر1. الدورة البيوجيوكيميائية في واجهة الأكسجين والأكسجين حساسة للاضطرابات المختلفة في الطبيعة 5,6. في حالة الرواسب وحقول الأرز ، يمكن أن تسبب مدخلات المواد العضوية الطازجة مثل القمامة والقش ، والفيضانات الدورية والصرف ، وتقلبات درجات الحرارة وتطرفها ، والتعكر الحيوي تغييرات في الدورة البيوجيوكيميائية عند السطح البيني للأكسجين والأكسجين ، مما يؤدي على الأرجح إلى تأثيرات دائمة ، مثل انبعاثات غازات الدفيئة ، والتخثث ، والتلوث في موقع معين. لذلك ، يوفر التدرج الأكسجيني – نقص الأكسجين في واجهة التربة والمياه نافذة لدراسة الدورات البيوجيوكيميائية العالمية واسعة النطاق. ولطالما كان أخذ العينات الزمانية المكانية وتحليل المواد الذائبة على طول السطح البيني بين التربة والمياه بدقة عالية موضع اهتمام؛ بيد أنه لم يحرز سوى تقدم محدود في هذه المنهجية.
للتحايل على عيوب استخراج المسام المدمرة ، يتم استخدام أخذ العينات السلبية غير المدمرة بشكل متزايد لتجنب التغييرات في كيمياء المسام ومعالجة تعقيد تحضير العينات7. تم استخدام العديد من الأجهزة التي يمكنها إجراء أخذ العينات بدقة عالية في الموقع (من مقياس الميكرومتر إلى السنتيمتر) على نطاق واسع ، بما في ذلك عينات غسيل الكلى في الموقع (المعروفة باسم مختلسو النظر)8 ، والتوازن المنتشر في الأغشية الرقيقة (DET) 9 ، والتدرج المنتشر في الأغشية الرقيقة (DGT) 10. يتم أخذ عينات من المواد الذائبة بشكل سلبي عبر آلية عمليات الانتشار والامتزاز. على الرغم من أنها أثبتت فائدتها في وصف الملامح الكيميائية للأكسجين-نقص الأكسجين ، إلا أنها لا تزال تستخدم مرة واحدة ، مما يحد من تطبيقها على نطاق أوسع.
في الآونة الأخيرة ، ظهرت تقنية غسيل الكلى المجهري كأداة حساسة يمكن استخدامها لمراقبة ديناميكيات المركبات القابلة للذوبان في التربة على المقاييس الزمنية من دقائق إلى أيام11،12،13،14. بالنسبة لسيناريو نموذجي يستخدم غسيل الكلى الدقيق في العلوم الطبية والبيئية ، يتم استخدام مسبار مصغر من النوع متحد المركز يتكون من غشاء أنبوبي شبه نافذ (أي جهاز غسيل الكلى الدقيق) لفحص السائل الخلالي أو محاليل التربة لمنع حدوث اضطرابات كبيرة في عمليات التمثيل الغذائي والانتواع الكيميائي15,16. واحدة من أعظم المزايا الكامنة في غسيل الكلى هو التقاط في الموقع من التغيرات تركيز تعتمد على الوقت في التربة أو الأنسجة البيولوجية15،16.
استنادا إلى مفهوم غسيل الكلى الدقيق، قمنا بتطوير جهاز تعريف غسيل الكلى الدقيق الأكثر سهولة في الاستخدام، والذي كان يسمى سابقا منشئ ملفات تعريف حقن المسام المتكاملة (IPI)، والذي يمكنه إجراء غسيل الكلى بالتوازن المستمر للمواد المذابة في المياه المسامية بناء على مبدأ انتشار تدرج التركيز2. يستخدم جهاز غسيل الكلى الدقيق أنابيب غشاء نانوي مجوف للتحميل المسبق النشط للمعطيات والانتشار السلبي للمواد المذابة ، والذي يختلف عن انتشار المسام السائبة المستخدم في مختلسو النظر ، ومرشحات الضغط مثل جهاز أخذ العينات Rhizon ، و DGT القائم على التراكم. تم اختبار الجهاز والتحقق من صحته في أخذ العينات الزمنية والمكانية لكل من العناصر الكاتيونية والأنيونية في كل من تربة المرتفعات والتربة المغمورة (الشكل 1A-1) 13،15،16. يقلل غسيل الكلى الدقيق البسيط للداخل والخارج من عدد الخطوات في تحضير العينة 2,15.
لقد قمنا بتصنيع ملف تعريف غسيل الكلى الدقيق من خلال دمج مجموعة من أجهزة أخذ العينات على هيكل عظمي دعم أحادي البعد ، وحقق هذا الملف أخذ عينات عالية الدقة في واجهة التربة والمياه والجذور2،15،17. في هذه الدراسة ، تم إجراء تعديلات كبيرة على جهاز أخذ العينات وطريقة أخذ العينات للسماح بجمع 33 عينة من المياه المسامية عند السطح البيني بين التربة والماء (عمق رأسي 60 مم) مع الحد الأدنى من الاضطراب لتحليل العناصر النهائية. يستغرق إجراء أخذ العينات بالكامل ~ 15 دقيقة. نظرا لأن ملف تعريف غسيل الكلى الدقيق جديد على مجتمع العلوم البيئية ، فإننا نقدم تفاصيل مكونات الجهاز وإجراءات أخذ العينات للإشارة إلى إمكانات غسيل الكلى الدقيق في مراقبة التغيرات في الإشارات الكيميائية في واجهة التربة والماء.
وصف ملف تعريف غسيل الكلى
يظهر في الشكل 1 جهاز تحديد ملفات تعريف غسيل الكلى الدقيق ، مع التعديلات المناسبة للتصميم السابق2. يقدر حجم المسام الفعال للغشاء النانوي (الشكل 1C-1) بعدة نانومتر فقط لمنع انتشار الجزيئات الكبيرة والخلايا الميكروبية. اقترح اختبار سابق أن الحضانة المغمورة لمدة 6 أشهر لم تسفر عن أي رواسب حديدية سواء داخل أو خارج سطح الأنبوب15. تم تصميم هيكل عظمي منحني مجوف (الشكل 1C-2) وطباعته ثلاثية الأبعاد باستخدام مادة نايلون ثابتة. تم تركيب ما مجموعه 33 أنبوبا غشاء نانويا (بولي إيثر سلفون ؛ حجم مسام السطح: 0-20 نانومتر ؛ القطر الداخلي × القطر الخارجي × طول أخذ العينات الفعال: 1.0 مم × 1.7 مم × 54 مم ؛ الحجم النظري: 42.4 ميكرولتر) متصلة بأنابيب بولي تترافلورو إيثيلين (PTFE) المتطابقة (الطول: 18 سم × قطر 2 سم الشكل 1C-1) على الهيكل العظمي وعبر جانب واحد من حاوية PVC (الشكل 1 ب). بالنسبة لهذا الجهاز ، يكون مكون أخذ العينات (الشكل 1B-1) على بعد 2 سم من الجدار الجانبي لحاوية PVC. بالنسبة لجانب الحقن (الشكل 1B-4) ، تم توصيل جميع الأنابيب بموصل واحد إلى متعدد ، والذي تم تثبيته في حاوية تخزين مؤقت بطريقة محكمة الإغلاق (الشكل 1B-7). تم استخدام كيس التسريب الطبي (الشكل 1B-11) للاتصال بحاوية التخزين المؤقت بواسطة صمام ثلاثي الاتجاهات. تم فحص محكم الهواء للنظام بعناية في الماء قبل إجراء المزيد من العمليات التجريبية. الماء المحمل مسبقا (18.2 متر مكعب ، 500 مل) في كيس التسريب الطبي دائما ما يكون خاليا من الأكسجين (الشكل 1C-8). يتم وصف الإعداد التفصيلي للجهاز وأخذ عينات من المسام على النحو التالي.
استنادا إلى التجارب والممارسات السابقة2 ، تتطلب بعض الاعتبارات اهتماما خاصا أثناء تجميع ملف تعريف غسيل الكلى الدقيق وأخذ عينات من مياه المسام. أولا ، يجب توصيل أنبوب الغشاء النانوي وأنبوب التوصيل بعناية لتجنب الانسداد أو التسرب عند الاتصال. عندما يتم تحضين التربة في ظل ظروف الفيضانات ، فإن إدخال الأكسجين سوف يتأكسد بسرعة ويترسب الحديد الحديدي في أنبوب غسيل الكلى (الشكل 4). لهذا السبب ، قبل تجميع ملف تعريف غسيل الكلى الدقيق ، يجب فحص كل أنبوب غسيل الكلى للتأكد من سلامته (بدون ضرر) ، وإحكام الوصلات ، وسالكية الأنبوب. وبالمثل ، يجب أن يتم توصيل إطار الدعم بالجدار الجانبي لحاوية الحضانة بعناية لتجنب التسرب. قبل التجارب الرسمية ، تكون فحوصات التسرب في مواقع الاتصال المختلفة أولوية دائما. ثانيا ، يجب أن تكون البيرفوسات في الكيس اللاهوائي غير مؤكسجة بشكل كاف. خلاف ذلك ، سوف يتفاعل الحديد الحديدي في ماء المسام مع الأكسجين الموجود في البيرفوسات لتكوين رواسب غير قابلة للذوبان (الشكل 4). سيؤدي ذلك إلى تغيير شديد في انتواع المذاب وتركيزه وعمليات الانتشار نحو أنابيب الغشاء النانوي. ثالثا، سيؤدي انخفاض تواتر أخذ العينات (أيام وأسابيع) إلى انتشار المذاب في المنطقة العازلة. قد يؤدي ذلك إلى تلويث عينة الملف الشخصي بأكملها. ولمعالجة هذه المشكلة، يمكن النظر في ثلاثة حلول ممكنة: (1) أخذ العينات بتواتر عال، مثل مرة واحدة في اليوم (ومع ذلك، قد يؤدي ذلك إلى استنفاد المذاب بالقرب من جهاز أخذ عينات غسيل الكلى عند إجراء عينات متعددة)؛ و (2) أخذ العينات بتواتر كبير، مثل مرة واحدة في اليوم (ومع ذلك، قد يؤدي ذلك إلى استنفاد المذاب بالقرب من جهاز أخذ عينات غسيل الكلى عند إجراء عينات متعددة)؛ و (2) أخذ العينات بتواتر عال؛ و (2) أخذ العينات بتواتر كبير، مثل مرة واحدة في اليوم (ومع ذلك، قد يؤدي ذلك إلى استنفاد المذاب بالقرب من جهاز أخذ عينات غسيل الكلى عند إجراء عينات متعددة)؛ و (2) أخذ العينات بتواتر كبير، مثل مرة واحدة في اليوم (ومع ذلك، قد يؤدي ذلك إلى استنفاد المذاب (2) تمديد طول أنبوب التوصيل في منطقة الحقن كما هو مطلوب ؛ (3) إعادة تصميم خط أنابيب أخذ العينات لتحقيق تحكم واحد في خط أنابيب واحد. هذه أيضا توجيهات لتحسين الجهاز في المستقبل. رابعا ، أثناء عملية أخذ العينات ، يجب التأكد من أن مستوى سطح الماء في الكيس اللاهوائي والتربة المغمورة وأنبوب أخذ العينات على نفس الارتفاع تقريبا لموازنة ضغط الماء. وإلا فإن فرق جهد الماء داخل الأنبوب الغشائي وخارجه سيؤدي إلى انخفاض أو زيادة انتشار المذاب.
القيود
أولا ، نظرا لأن ملف تعريف غسيل الكلى الدقيق غير متاح تجاريا ، تظل الطريقة تستغرق وقتا طويلا من حيث إعداد الجهاز. استغرق الأمر أياما لإعداد أنبوب غسيل كلوي واحد ، بما في ذلك طباعة الهيكل العظمي للدعم وتجميع الجهاز والتنظيف. لكن الميزات اللاحقة القابلة لإعادة الاستخدام تسد هذه الفجوة تماما. ثانيا ، هناك قيود معينة في تطبيق الجهاز على سيناريوهات التربة غير المغمورة ، والتي يمكن استخدام مختلسو النظر لمدة18 عاما. نظرا للفرق الكبير في جهد الماء بين داخل وخارج أنبوب الغشاء في التربة الجافة ، فإن المحلول المحمل مسبقا يتعرض لفقدان الانتشار ؛ في الواقع ، لوحظت عمليات استرداد مختلفة لحجم العينات في حدود 10٪ -36٪ في الاختبار الأولي (البيانات التفصيلية غير معروضة) ، مما يخلق حالة من عدم اليقين بشأن النتائج.
مقارنة الطريقة بالطرق الحالية أو البديلة
تعالج الطريقة جزئيا حقيقة أن العينات السلبية الحالية لا يمكنها أخذ عينات بشكل متكرر وتقلل من عبء العمل على تحضير العينة ، خاصة بالنسبة لأخذ عينات من مياه المسام وحفظها2. يمكن أن تعكس التغيرات الفورية في تركيز وانتواع المواد المذابة التي تم تحليلها بحساسية استجابة واجهة الأكسجين ونقص الأكسجين لأي اضطرابات بيئية. من الناحية النظرية ، يسمح أخذ العينات بتكرار دقائق أو ساعات أو أيام بالتقاط العمليات المتغيرة بسرعة في الواجهة. بالنسبة لأخذ العينات السلبية التي يجب أن تكون قيد النشر لعدة أيام ، يمكن تفويت بعض اللحظات الساخنة والنقاط الساخنة 6,19.
الأهمية والتطبيقات المحتملة في العلوم البيئية
يمكن لهذا النهج أن يعزز دراسات الكيمياء الجيولوجية الحيوية في واجهات الأكسجين ونقص الأكسجين ، على سبيل المثال ، للعثور على اللحظات الساخنة والنقاط الساخنة للعمليات البيوجيوكيميائية في ظل ظروف Eh-pH محددة. عملية الأكسدة والاختزال هي العملية الأساسية لأنشطة الحياة1. الكائنات الحية الدقيقة ، على وجه الخصوص ، تتطلب ظروف بيئة معيشية مثالية وحساسة للغاية للاضطرابات البيئية1. وهذا يؤدي إلى تطور ديناميكي للغاية للمجتمعات الميكروبية والعمليات البيوجيوكيميائية في البيئات غير المتجانسة20. يميل أخذ العينات المباشر ، دون النظر إلى عدم التجانس العالي ، إلى الحصول على عينة مختلطة من ظروف بيئية مختلفة. هذا يسبب عدم تطابق بين المعلومات الكيميائية المقاسة والكائنات الحية الدقيقة الرئيسية20. على بعد بضعة سنتيمترات من الطبقة السطحية للتربة أو الرواسب في حقل أرز نموذجي مغمور بالمياه ، توجد تدرجات أكسدة واختزال شديدة الانحدار ، بالإضافة إلى تدرجات فيزيائية وكيميائية21 وبيولوجيةمختلفة 1. يجب أن تكون التكنولوجيا قادرة على التقاط الإشارات البيوجيوكيميائية على نطاق المليمترات ؛ خلاف ذلك ، قد تؤدي البيانات التي لا تتطابق مع المقياس الفعلي إلى استنتاجات غامضة. إن جهاز تحديد ملفات تعريف غسيل الكلى الدقيق قادر على مراقبة الإشارات الكيميائية الحيوية على نطاق المليمتر عند واجهة التربة والمياه في أيام أو ساعات بأقل قدر من الاضطراب. في هذه الدراسة ، لوحظت الديناميات الزمانية المكانية للعناصر المختلفة على مدى فترة 48 ساعة ، ربما تتعلق باضطراب تجديد المياه. لذلك ، قد يساعد التطبيق الأوسع لملف تعريف غسيل الكلى الدقيق على فهم كيفية تأثير الاضطرابات على العمليات البيوجيوكيميائية الرئيسية في عالم متغير.
The authors have nothing to disclose.
يتم تمويل هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (41977320 ، 41571305) والصندوق الخاص للبرنامج الرئيسي ل XJTLU (KSF-A-20).
3D Printer | Snapmaker, United States | Snapmaker 2.0 | Model: A250 |
3M DP190 Scotch-Weld Gray | 3M United States | 489-483 | Gray |
Centrifuge tube | Titan, China | SWLX-JZ050-ZX | 50 mL, Sterilized DNASE/RNASE/Protease/Pyrogen Free |
Ceramic knife | R felngli, China | N.A. | General |
EDTA FREE ACID | Sigma-Aldrich | CAS 60-00-4 | Sigma-Aldrich#EDS-1KG |
Ethanol | Adamas | CAS 64-17-5 | Water ≤ 50 ppm (by K.F.), 99.5%, SafeDry, with molecular sieves, Safeseal |
Hot melt adhesive | Magic Dragon, China | N.A. | JTWJRRJB001 |
Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry | PerkinElmer, Inc., Shelton, CT USA | N.A. | Model: NexION 350X |
Medical Infusion Bag | Hunan Kanglilai Medical Equipment Co., Ltd | N.A. | 250 Ml, Sterlized |
Milli-Q water system | Mingche, Inc., China | N.A. | 18.3 MΩ, water purification system model: 24UV |
Nanomembrane Tube (polyethersulfone) | Motimo Membrane Technology Co., Ltd., Tianjin, China | N.A. | Polyethersulfone, inner diameter 1 mm, poresize <20 nm, pretreated with ethanol (99.5%) |
Nitrogen gas | Suzhou Gas, Chuina | N.A. | High puriety |
Nitrotic acid (Concentrated) | Adamas | CAS 7697-37-2 | 69%,Single Metal < 50 ppt, PFA Bottle |
Nylon Fiber | Soumiety | 10052076600273 | For 3D-printing |
Pipette | Bond A3 Pipette | N.A. | 200 μL |
Pipette Tip | Titan | T2-H-T0200 | 200 μL, 300 μL Tip Box Non-sterile|200 μL|Titan |
Polytetrafluoroethylene Tube | ROHS, China | CJ-TTL | Out diameter 1 mm |
Sample vial | Titan, China | EP0060-B-N | 0.6 mL, Sterilized DNASE/RNASE/Protease/Pyrogen Free |
Silicon cap | Fuchenxiangsu, China | N.A. | Inner diameter 1 mm, length 1 cm |
Sonicator | Elma | N.A. | model:E120H |
Square PVC water pipe | Taobao.com | N.A. | hight x width, 12 cm x 15 cm |
Three-way valve for infusion | OEM, China | N.A. | Medical level; Valve body: PC material; valve core: PE material; screw cap: ABS material |