Laborexperimente zur Bodenerwärmung verwenden normalerweise zwei oder mehr konstante Temperaturen in mehreren Kammern. Durch die Präsentation einer ausgeklügelten Klimakammer bieten wir eine genaue Temperaturkontrollmethode, um die Größe und Amplitude der In-situ-Bodentemperatur zu imitieren und das experimentelle Design von Bodeninkubationsstudien zu verbessern.
Die Untersuchung der Auswirkungen der Erwärmung auf Böden erfordert eine realistische und genaue Darstellung der Temperatur. In Laborinkubationsstudien bestand eine weit verbreitete Methode darin, konstante Temperaturen in mehreren Kammern zu erzeugen und durch Vergleiche von Bodenreaktionen zwischen Nieder- und Hochtemperaturkammern die Auswirkungen der Erwärmung auf Bodenveränderungen abzuleiten. Diese häufig verwendete Methode konnte jedoch weder die Größe als auch die Amplitude der tatsächlichen Temperaturen, wie sie unter Feldbedingungen beobachtet wurden, imitieren, was möglicherweise die Gültigkeit solcher Studien untergräbt. Da immer leistungsfähigere Klimakammern immer verfügbarer werden, ist es unerlässlich, alternative Methoden der Temperaturkontrolle für die Bodeninkubationsforschung zu untersuchen. Dieses Protokoll wird eine hochmoderne Umweltkammer einführen und sowohl konventionelle als auch neue Methoden der Temperaturkontrolle demonstrieren, um das experimentelle Design der Bodeninkubation zu verbessern. Das Protokoll besteht hauptsächlich aus vier Schritten: Temperaturüberwachung und -programmierung, Bodensammlung, Laborinkubation und Vergleich des Wärmeeffekts. Ein Beispiel wird vorgestellt, um verschiedene Methoden der Temperaturregelung und die daraus resultierenden gegensätzlichen Erwärmungsszenarien zu demonstrieren; Das heißt, ein konstantes Temperaturdesign, das als schrittweise Erwärmung (SW) bezeichnet wird, und simuliertes In-situ-Temperaturdesign als allmähliche Erwärmung (GW), sowie deren Auswirkungen auf die Bodenatmung, mikrobielle Biomasse und extrazelluläre Enzymaktivitäten. Darüber hinaus präsentieren wir eine Strategie zur Diversifizierung von Temperaturänderungsszenarien, um spezifische Forschungsbedürfnisse zum Klimawandel (z. B. extreme Hitze) zu erfüllen. Das Temperaturkontrollprotokoll und die empfohlenen maßgeschneiderten und diversifizierten Temperaturänderungsszenarien werden den Forschern helfen, zuverlässige und realistische Bodeninkubationsexperimente im Labor zu etablieren.
Es wird erwartet, dass die globale Oberflächentemperatur in diesem Jahrhundert um 1,8-6,4 ° C 1,2 steigen wird. Die globale Erwärmung kann den CO2 -Fluss vom Boden in die Atmosphäre erhöhen, was zu einer positiven Rückkopplung mit der Erwärmungführt 3,4,5,6. Da mikrobielle Gemeinschaften eine entscheidende Rolle bei der Regulierung der respiratorischen Reaktionen des Bodens auf die Erwärmung spielen7,8, waren die Veränderungen der mikrobiellen Atmung und die zugrunde liegenden mikrobiellen Mechanismen mit der Erwärmung ein Forschungsschwerpunkt. Obwohl Bodenerwärmungsexperimente, die im Feldzustand über ein Heizkabel9 und eine offene obere Kammer10 durchgeführt wurden, bei der Erfassung natürlicher Bodenmerkmale wie Temperatur11 vorteilhaft waren, haben ihre hohen Kosten für Installation und Wartung ihre Anwendung eingeschränkt. Alternativ sind Bodeninkubationsexperimente bei unterschiedlichen Temperaturen eine günstige Wahl. Der Hauptvorteil der Bodeninkubation in einem Labor besteht darin, dass die gut kontrollierten Umweltbedingungen (z. B. Temperatur) in der Lage sind, den Ein-Faktor-Effekt von anderen Störfaktoren in einer Feldversuchsumgebungzu trennen 12,13. Trotz der Unterschiede zwischen Wachstumskammer- und Feldexperimenten (z. B. Pflanzenwachstum) ist die Translation von Laborergebnissen in das Feld leicht verfügbar14. Die Inkubation von Bodenproben in einer Laborumgebung könnte dazu beitragen, unser mechanistisches Verständnis der Bodenreaktion auf die Erwärmung zu verbessern15.
Unsere Literaturübersicht identifizierte mehrere Temperaturkontrollmethoden und folglich unterschiedliche Temperaturänderungsmodi in früheren Bodeninkubationsstudien (Tabelle 1). Erstens werden Instrumente zur Temperaturregelung meist durch einen Inkubator, eine Wachstumskammer, ein Wasserbad und in seltenen Fällen durch ein Heizkabel verwendet. Mit diesen Instrumenten wurden drei typische Temperaturänderungsmuster erzeugt (Abbildung 1). Dazu gehören der am häufigsten implementierte Modus, konstante Temperatur (CT), lineare Änderung (LC) mit einer konstanten Temperaturänderungsrate ungleich Null und nichtlineare Änderung (NC) mit einer täglichen Temperaturart. Bei einem CT-Muster kann die Temperatur im Laufe der Zeit in der Größe variieren, obwohl die Temperatur während der Inkubation für einen bestimmten Zeitraum konstant bleibt (Abbildung 1B). Für LC kann die Rate der Temperaturänderung in verschiedenen Studien um mehr als zwei Größenordnungen variieren (z. B. 0,1 ° C / Tag vs. 3,3 ° C / h; Tabelle 1); Bei NC-Fällen stützten sich die meisten auf die intrinsische Kapazität der verwendeten Instrumente, was zu verschiedenen Modi führte. Trotzdem wurde eine Art tägliche Temperaturänderung durch ein Heizkabel oder einen Inkubator16,17 behauptet; Die Kammertemperaturen in diesen Experimenten wurden jedoch nicht validiert. Weitere wichtige Überprüfungsergebnisse in Tabelle 1 umfassen den Bereich der Inkubationstemperatur von 0-40 °C, wobei die meisten zwischen 5-25 °C liegen; Die Dauer der Experimente reichte von wenigen Stunden (<1 Tag) bis zu fast 2 Jahren (~725 Tage). Außerdem wurden Böden, die Inkubationen unterzogen wurden, aus Wald-, Grasland- und Ackerlandökosystemen mit dominantem Mineralhorizont, organischem Horizont und sogar kontaminiertem Boden gesammelt, die sich hauptsächlich in den USA, China und Europa befinden (Tabelle 1).
Angesichts der drei wichtigsten Temperaturänderungsmodi wurden mehrere unterschiedliche Erwärmungsszenarien, die in den vergangenen Studien erreicht wurden, in Tabelle 2 zusammengefasst. Dazu gehören die schrittweise Erwärmung (SW), SW mit unterschiedlicher Größe (SWv), die allmähliche Erwärmung linear (GWl), die allmähliche Erwärmung nichtlinear (GWn) und die allmähliche Erwärmung täglich (GWd).
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass frühere Bodeninkubationen in der Regel die durchschnittliche Luft- oder Bodentemperatur an einem Standort erfassten. In vielen Fällen, wie in Tabelle 1 gezeigt, wurden Inkubatoren oder Kammern manuell bei einer festen Temperatur programmiert, waren jedoch nicht in der Lage, die Temperatur automatisch wie gewünscht anzupassen, da sie nicht in der Lage waren, den Modus und die Rate der Temperaturänderung mit der Zeit zu steuern (Gleichung 1), was zu Schwierigkeiten führte, die Tagestemperatur des lokalen Bodens nachzuahmen. Auf der anderen Seite, obwohl in zwei Experimenten16,17 versucht, identifizierten wir keine Studien, die explizit die allmähliche Erwärmung tagaktiv (GWd) in ihren Inkubationsexperimenten imitierten (Tabelle 1). Basierend auf der Literaturrecherche liegt das Haupthindernis in einem schlechten experimentellen Design, insbesondere in dem Fehlen eines ausgeklügelten Instruments, das die Implementierung und Validierung von Tages- oder anderen allmählichen Erwärmungsszenarien ermöglicht.
(Gleichung 1)
Dabei ist ΔT die Größe der Temperaturänderung, m die Art der Temperaturänderung, r die Rate der Temperaturänderung und t die Dauer der Änderung.
Um die experimentelle Strenge bei der Bodeninkubation zu verbessern, wird in dieser Studie eine genaue und ausgeklügelte Temperaturkontrollmethode vorgestellt. Unter Verwendung einer hochmodernen Umweltkammer, die zunehmend verfügbar und wirtschaftlich rentabel ist, soll das neue Design nicht nur die genaue Simulation der In-situ-Bodentemperatur (z. B. Tagesmuster) ermöglichen, sondern auch durch die Berücksichtigung möglicher Temperaturänderungen eine zuverlässige Möglichkeit bieten, die Artefakte instrumenteller Verzerrungen zu minimieren. Das derzeitige Bodeninkubationsdesign sollte den Forschern helfen, optimale Strategien zu identifizieren, die ihren Inkubations- und Forschungsbedürfnissen entsprechen. Das übergeordnete Ziel dieser Methode ist es, Bodenbiogeochemikern einen hochgradig operationellen Ansatz zur Reform des Bodeninkubationsdesigns zu präsentieren.
Die Methode der konstanten Temperaturregelung wurde weitgehend angewandt (Tabelle 1). Die Größe und das zeitliche Muster der Temperatur, die in diesen Verfahren implementiert werden, simulieren jedoch schlecht die Bodentemperatur, die unter Feldbedingungen beobachtet wird. Trotz der sich abzeichnenden Bemühungen, das Tagesmuster in der Vergangenheit nachzuahmen, waren solche Studien selten und konnten die Ausrüstung und das Verfahren nicht klären; Sie validierten auch nicht die Temperatursimulation hinsichtlich Genauigkeit und Zuverlässigkeit16,17. Da die Gemeinschaft bestrebt war, ihr Verständnis der Reaktionen auf die Bodenerwärmung zu verbessern, ist die Optimierung des Bodeninkubationsprozesses mit realistischer Temperatur und praktikabler Kontrolle unerlässlich. Dennoch wurden solche neuen Methoden nicht entwickelt, so dass eine Standardmethode für zukünftige Inkubationsexperimente immer noch außer Reichweite ist. Angesichts der zunehmenden Komplexität der globalen Temperaturänderung in Größe, Amplitude, Saisonalität, Dauer und Extremalität ist ein umfassendes Verfahren sehr gefragt.
Hier wurde eine Methode zur Manipulation eines täglichen Temperaturänderungsverfahrens vorgestellt, die sich auf die ausgeklügelte Kammer stützt, um die Fähigkeit zu bieten, konstante, lineare und nichtlineare Temperaturänderungen und anschließend verschiedene Erwärmungsszenarien für zukünftige Forschungsbedürfnisse zu etablieren. Es gibt vier kritische Schritte innerhalb des Protokolls. Die erste besteht darin, die Bodentemperatur im Feldzustand zu bestimmen. Da die Bodenart und die interessierende Tiefe sowie die Landnutzungsart von Studie zu Studie variieren können, sollte die Anzahl der für den jeweiligen Forschungsstandort benötigten Temperatursonden so weit wie möglich an die tatsächlichen Bedingungen angepasst werden. Im Allgemeinen sollte die Bodentiefe für Temperatursonden den größten Forschungsbedarf bei 0-20 cm decken, und die Anzahl der Sonden zur Darstellung der Bodentemperatur sollte auf ein bis drei begrenzt werden. Der Schlüssel liegt darin, einen langfristigen kontinuierlichen und aufeinanderfolgenden Temperaturrekord an mindestens einem typischen Bodenstandort zu erreichen.
Der zweite kritische Schritt besteht darin, das Programm so einzurichten, dass die angestrebte Temperaturgröße und das angestrebte Temperaturmuster in der Kammer erreicht werden. Aufgrund der hohen Empfindlichkeit und Genauigkeit der Kammer (Abbildung 4) ist es möglich, eine genaue Darstellung der Temperatur zu programmieren, wie sie unter den Feldbedingungen beobachtet wird. Obwohl das aktuelle Protokoll nur die beobachtete stündliche Temperatur als in der Kammer angestrebt darstellte, kann durch dieses Verfahren eine häufigere Bodentemperaturüberwachung wie 30 min, 15 min oder noch kürzer erreicht werden. Dennoch muss eine Prüfung der Ziel- und Kammertemperaturen über 24 h durchgeführt werden, und vor dem Versuch müssen die Testergebnisse die Kriterien von weniger als 0,1 °C zwischen der Ziel- und der Kammertemperatur zu allen Zeitpunkten erfüllen. Je häufiger die Temperaturbeobachtung zur Simulation ausgewählt wird, desto mehr Schritte sind erforderlich, um das Programm vor dem Experiment in der Kammer einzurichten.
Der dritte kritische Schritt besteht darin, die Inkubation selbst durchzuführen. Um den Einfluss von Bodenheterogenitäten zu reduzieren63, ist die Homogenisierung von Bodenproben von entscheidender Bedeutung, und für jede Behandlung werden mindestens drei Replikate empfohlen. Vor der Inkubation ist eine Vorinkubationsbehandlung erforderlich, und das derzeitige Verfahren kann die Vorbehandlung erleichtern, indem Temperatur und Dauer vor dem offiziellen Beginn des Experiments programmiert werden. Dies ist vorteilhaft, um die experimentelle Störung zu reduzieren und die gesamte Inkubation nahtlos zu orchestrieren. Der letzte kritische Schritt besteht darin, sowohl konstante Temperatur- als auch variierende Temperaturbehandlungen einzubeziehen, damit ein Vergleich der Bodenerwärmungsreaktionen durchgeführt werden kann.
Dieses Protokoll kann leicht modifiziert werden, um die Größe, Amplitude und Dauer der Temperaturänderung zu manipulieren. Zum Beispiel können extreme Temperaturen während einer Hitzewelle im Sommer und plötzlicher Frost im zeitigen Frühjahr aufgrund des Klimawandels mit diesem Verfahren dargestellt werden, zusätzlich zu seiner Fähigkeit, ihre unterschiedliche Dauer und Intensität zu berücksichtigen. Die Simulation der regelmäßigen und unregelmäßigen Temperaturen in Kombination ermöglicht es auch, langfristige komplexe Temperaturänderungseffekte zu simulieren, wie sie in der Zukunft projiziert werden. Wie in Tabelle 2 zusammengefasst, können die Erwärmungsszenarien, die in vielen verschiedenen Studien untersucht wurden, in einer Studie gemeinsam durchgeführt werden. Es wird erwartet, dass dieses Protokoll eine ausgeklügelte Methode zur Simulation der Temperatur in Bodeninkubationsstudien bietet. In der Hoffnung auf eine breite Anwendung wird die Annahme dieses Protokolls dazu beitragen, eine genauere Methode für zukünftige Bodenerwärmungsstudien auf der Grundlage von Laborinkubation zu identifizieren oder zu validieren.
Eine wichtige Einschränkung des Verfahrens besteht darin, dass die im aktuellen Protokoll verwendete Kammer ein relativ kleines Volumen hat und daher nur neun Inkubationsgläser in jeder Kammer aufnehmen kann. Obwohl ein kleineres Glas die Kapazität der Kammer erhöht, wird ein großes Volumen der Kammer empfohlen. Ein neues Modell (z.B. TestEquity 1007) bietet achtmal mehr Kapazität und empfiehlt sich daher für Großexperimente. Trotz der Verbesserung des Temperaturkontrollverfahrens bei Bodeninkubationen werden die möglichen Komplikationen mit Feuchtigkeit und Bodenhomogenisierung durch die Annahme des aktuellen Protokolls nicht gelindert.
Wir demonstrieren wesentliche Vorteile des ausgeklügelten Temperierverfahrens. Es bietet eine zuverlässige und erschwingliche Temperaturregelungsstrategie, um eine genaue Temperatursimulation zu erhalten, und bietet eine praktikable Möglichkeit zur Verbesserung des Bodeninkubationsexperiments, das für ein besseres Verständnis der Bodenerwärmungsreaktionen erforderlich ist. Obwohl die konstante Temperaturregelung weithin akzeptiert und logistisch einfach zu bedienen ist, können die Artefakte einer langfristig konstanten Temperatur auf mikrobiellen Bodengemeinschaften die Bemühungen zur Erfassung der echten Bodenreaktionen ablenken. Die anderen berichteten Laborerwärmungsmethoden sind weitgehend weniger kontrollierbar und replizierbar. Das aktuelle Protokoll ist aufgrund seiner einfachen Bedienung, der hohen Genauigkeit und Reproduzierbarkeit der Temperatursimulation, der expliziten Programmierung und der Fähigkeit, verschiedene Temperaturänderungsszenarien in einem einzigen Experiment zu kombinieren, überlegen. Die Machbarkeit einer Temperaturregelung mit hoher Genauigkeit wird es den Forschern ermöglichen, verschiedene Temperaturänderungsszenarien zu untersuchen.
The authors have nothing to disclose.
Zu den Finanzierungsquellen, die zur Unterstützung der Forschung verwendet werden, gehören ein HBCU−EiR der US National Science Foundation (NSF) (Nr. 1900885), ein US Department of Agriculture (USDA) Agricultural Research Service (ARS) 1890s Faculty Research Sabbatical Program (Nr. 58-3098-9-005), ein USDA NIFA-Stipendium (Nr. 2021-67020-34933) und ein USDA Evans-Allen Grant (Nr. 1017802). Wir danken den Mitarbeitern des Main Campus Agriculture Research and Extension Center (AREC) der TSU in Nashville, Tennessee.
10 mL-Syringe | Fisher Scientific | 14-826-13 | for soil respiration measurement |
Composer Software | TestEquity | Model #107 | for incubation temperature setup |
Environmental chamber | TestEquity | Model #107 | for soil incubation |
Environmental gas analyzer | PP Systems | EGM5 | for soil respiration measurement |
Filter paper | Fisher Scientific | 1005-125 | for soil incubation |
Mason jar | Ball | 15381-3 | for soil incubation |
Oven | Fisher Scientific | 15-103-0520 | for soil moisture measurement |
Plastic Zipper Seal Storage Bag | Fisher Scientific | 09-800-16 | for soil collection |
Plate reader | Molecular devices | FilterMax F5 | for soil extracellular enzyme analysis |
R Software | The R Foundation | R version 4.1.3 (2022-03-10) | For statistical computing |
Refrigerator/Freezer | Fisher Scientific | 13-991-898 | for soil storation |
Screwdriver | Fisher Scientific | 19-313-447 | for soil collection |
Sharpie | Fisher Scientific | 50-111-3135 | for soil collection |
Sieve | Fisher Scientific | 04-881G | for sieving soil sample |
Silicone Septa | Duran Wheaton kimble | 224100-070 | for mason jars used for soil incubation |
Soil auger | AMS | 350.05 | for soil collection |
SpecWare Software | Spectrum Technologies | WatchDog E2700 (3340WD2) | for temperature collection interval setup |
Temperature probe | Spectrum Technologies | WatchDog E2700 (3340WD2) | for soil temperature measurements |
TOC/TN analyzer | Shimadzu | TOC-L series | for soil microbial biomass analysis |