In zona Ovo Iniezione intravascolare in embrioni di pollo
Summary
L’obiettivo generale di questo articolo è quello di descrivere come eseguire l’iniezione intracellulare ovo di materiali esogeni in embrioni di pollo. Questo approccio è molto utile per studiare la biologia dello sviluppo degli embrioni di pollo.
Abstract
Come sistema modello classico di biologia embrionale, l’embrione di pollo è stato utilizzato per studiare lo sviluppo e la differenziazione embrionale. La consegna di materiali esogeni in embrioni di pollo ha un grande vantaggio per lo studio della funzione genica, dell’allevamento transgenico e della preparazione della chimera durante lo sviluppo embrionale. Qui mostriamo il metodo di iniezione intravascolare in ovo in cui materiali esogeni come vettori plasmidici o cellule germinali primordiali modificate (PGC) possono essere trasferiti in embrioni di pollo donatori nelle prime fasi dello sviluppo. I risultati mostrano che l’iniezione intravascolare attraverso l’aorta dorsale e la testa consente ai materiali iniettati di diffondersi nell’intero embrione attraverso il sistema circolatorio del sangue. Nel protocollo presentato, l’efficacia dell’introduzione di plasmidi esogeni e vettori lentivirali e la colonizzazione di PGC esogeni iniettati nella gonade ricevente sono state determinate osservando la fluorescenza negli embrioni. Questo articolo descrive le procedure dettagliate di questo metodo, fornendo così un approccio eccellente allo studio della funzione genica, della biologia dell’embrione e dello sviluppo e della produzione di pollo gonad-chimeric. In conclusione, questo articolo consentirà ai ricercatori di eseguire in ovo iniezione intravascolare di materiali esogeni in embrioni di pollo con grande successo e riproducibilità.
Introduction
Gli embrioni di pollo sono stati ampiamente utilizzati per secoli in applicazioni di sviluppo, immunologiche, patologiche e altre applicazioni biologiche 1,2,3. Hanno molti vantaggi intrinseci rispetto ad altri modelli animali nello studio della tossicologia e della biologia cellulare4. Gli embrioni di pollo sono facilmente accessibili e possono essere manipolati in vitro e osservati direttamente in qualsiasi fase dello sviluppo, il che fornisce un pratico sistema di modelli di ricerca sugli embrioni.
In generale, gli attuali metodi di consegna dell’embrione di pollo come l’elettrotrasfezione e l’iniezione subgerminale-cavità hanno limitazioni come la necessità di attrezzature specialistiche e un programma progettato e l’inefficienza dovuta alla presenza di tuorlo e albume 5,6,7. Qui mostriamo un metodo di manipolazione semplice ed efficiente per la consegna di materiali esogeni in embrioni di pollo. Questo può essere un potente strumento utilizzato nello studio della biologia dello sviluppo. I materiali iniettati si diffondono all’intero embrione attraverso la circolazione sanguigna. Durante lo sviluppo precoce degli embrioni di pollo, i PGC potrebbero migrare attraverso il sangue, colonizzare la cresta genitale e quindi svilupparsi in gameti, che forniscono un prezioso percorso possibile per fornire materiali esogeni8. Ora, questo metodo è stato ampiamente utilizzato nello studio della funzione genica, della biologia dell’embrione e dello sviluppo e della produzione chimerica e transgenica di pollo 9,10,11.
Nell’iniezione intravascolare di ovo negli embrioni di pollo è un metodo ben consolidato e comunemente usato 12,13,14. In questo documento, mostriamo una descrizione completa di questo protocollo, inclusi materiali di iniezione, siti, dosaggio e risultati rappresentativi.
Protocol
Representative Results
Discussion
Il metodo di iniezione intravascolare in ovo di embrioni di pollo è ottimizzato per il trasferimento di materiali esogeni (vettori, virali o PGC) nell’embrione. Sulla base di questo metodo, abbiamo costruito modelli di embrioni di pollo con sovraespressione o interferenza genica stabile (SpinZ, JUN, UBE2I, ecc.) 17,18,19. Questi modelli consolidati dimostrano la fattibilità di questo approccio. Inoltre, non solo abbi…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (31972547). Apprezziamo il copyediting di Jing Wang e la voce fuori campo di Malik Donlic alla Washington State University, USA.
Materials
| Fluorescence macro-microscope | OLYMPUS | MVX10 | |
| Glass Capillaries | Narishige | G1 | |
| Lipofectamine 2000 | Invitrogen | 12566014 | liposome |
| pEGFP-N1 vector | Clontech | #6085-1 | |
| PKH26 Red Fluorescent Cell Linker Kit | Sigma | PKH26GL | |
| pLVX-EGFP lentivirus vector | Addgene | 128652 | |
| Pneumatic Microinjector | Narishige | IM-11-2 | |
| Puller | Narishige | PC-100 | |
| Trypan Blue Stain | Gibco | 15250061 |
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