海馬および前頭前野における樹状突起脊椎の可視化のための迅速なゴルジ染色

ニューロンを標識するために重クロム酸カリウムと硝酸銀を使用する方法は、Camillo Golgi ^1,2によって最初に記載され、続いてサンティアゴ・ラモン・イ・カハールによってニューロンおよびグリアのサブタイプを区別する膨大な量の仕事を生み出すために使用された。最近出版された彼のイラスト入りの本が発売されました³.100年以上前に発表されたラモン・イ・カハールの研究に続いて、ゴルジの含浸はほとんど使用されなかった。ゴルジ体含浸は、光学顕微鏡でニューロンを3次元的に可視化することを可能にする面倒なプロセスです。ゴルジ法には、方法をより簡単にし、染色をより一貫性のあるものにするために、長年にわたって多数の修正が加えられてきました⁴。1984年、GabbottとSomogyi⁵は、より迅速な処理を可能にする単一セクションのゴルジ含浸手順を説明しました。このゴルジ体含浸法では、4%パラホルムアルデヒドと1.5%ピクリン酸による灌流、固定後、3%重クロム酸カリウムの浴にビブラトーム切片が必要です。切片はスライドガラスに取り付けられ、カバースリップの四隅は硝酸銀に浸すと拡散が緩やかになるように接着されています。その後、カバースリップがはじけ、セクションが脱水され、最終的にカバーがマウント媒体で永久に滑り落ちます。この技術は、海馬のニューロンおよびグリア^6,7,8を標識するために首尾よく使用された。ここで説明する迅速なゴルジ法は、重クロム酸カリウムと硝酸銀の両方への曝露がはるかに少なく、パラホルムアルデヒドとピクリン酸が使用されていないため、改善点です。さらに、Gabbott and Somogyi⁵法の改変を用いて含浸させた細胞を分析することはできたが、脱水工程中に切片が過剰または露出不足であったり、スライドから落ちたりすることが多く、一般に、分析に十分な細胞を得るためにいくつかの実験をプールする必要があった。

本プロトコールは、ラットの海馬および内側前頭前野(mPFC)における樹状突起および樹状突起棘を標識するためのゴルジ染色キット(材料表を参照)の使用を記載している。以前の方法に対するこの方法の利点は、それが迅速であり、研究者にとって有害な化学物質への曝露が少なく、ニューロンの一貫した染色があることです。以下に記載するプロトコールは、多くの研究⁹、^10、11、¹²、¹³、^14、15においてラットの海馬およびmPFCにおける樹状突起脊椎密度を評価するために軽微な修正を加えて使用されている。