Het huidige protocol beschrijft de ontwikkeling van een open-source 5-keuze seriële reactietijd taak toolbox voor knaagdiermodellen, met behulp van Arduino en aanverwante hardware en een veelzijdige Matlab toolbox, inclusief een optioneel script voor geautomatiseerde gedragstraining. De scripts zijn aanpasbaar en vergemakkelijken de implementatie van verschillende trial-and-test ontwerpen.
De 5-keuze seriële reactietijdtaak (5-CSRTT) is een gedragstest die vaak wordt gebruikt om visuospatiale aandacht en impulsiviteit bij knaagdieren te bestuderen. De taak vereist dat dieren aandacht besteden aan een horizontale reeks van vijf kleine openingen uitgerust met lichtbronnen en, binnen een beperkt tijdvenster, één verlichte doelopening met de neus prikken om een voedselbeloning te krijgen bij het voedselmagazijn in de tegenoverliggende wand van de kamer. De taak houdt rekening met gedragscontrolemaatregelen zoals responsnauwkeurigheid en reactietijden en maakt het mogelijk om selectieve aandacht en impulsiviteit af te leiden. Taakmoeilijkheden kunnen worden beheerst door de stimulusduur en het taakontwerp in het algemeen aan te passen. Commercieel verkrijgbare apparatuur bestaat meestal uit een experimentele kamer en bepaalde software om taakparameters te specificeren, maar vanwege vaste hard- en software stellen ze veel beperkingen aan veranderingen in het algemene experimentele ontwerp en specifieke taakvereisten en de bijbehorende gegevensuitvoer. In dit artikel wordt een volledig aanpasbaar alternatief uitgelegd op basis van een gebruiksvriendelijke single-board microcontroller en standaard elektrotechnische componenten, een open-access Arduino-script en een Matlab-toolbox voor respectievelijk hardwarebesturing en gedragstaakspecificaties. De toolbox bevat een optionele trapprocedure, die geautomatiseerde gedragstraining mogelijk maakt. De complete hardware-installatie, die kan worden geïnstalleerd in aangepaste kamers, en de vrij aanpasbare software moedigen niet-gestandaardiseerde taak- en kamerontwerpen aan. Het ontwerp van het systeem en de open-source code voor hardwarebesturing en experimentele setup worden beschreven.
De 5-CSRTT is een gedragstest, vaak gebruikt bij knaagdieren om visuele aandachtsprocessen en impulsiviteit te bestuderen 1,2,3,4,5,6, zoals het bepalen van de rol van het cholinerge systeem in aandacht en de invloed van noradrenalineheropnameremmers op impulsief gedrag 7 . Het standaardapparaat maakt het mogelijk om verschillende controlemaatregelen te observeren, zoals responsnauwkeurigheid, reactietijden, impulsief en dwangmatig gedrag, motoriek en motivatie 1,2,3,4,5. Het bestaat uit een horizontale reeks van vijf met LED uitgeruste openingen, een voedselmagazijn op de kamerwanden tegenover de openingen en huisverlichting 2,5. Bij een typische taak wordt het huislicht verlicht en wordt het begin van een sessie gemarkeerd door de verlichting van het voedselmagazine, waar een gratis pellet wordt afgeleverd. De proefcursus wordt gestart wanneer het dier het magazijn neus-prikt om de pellet1 op te halen. Daarna wordt het licht van het voedselmagazine gedoofd en begint het inter-trial interval (ITI), waarbij het dier zijn aandacht op de openingen moet richten. Zodra de ITI is verstreken, wordt een stimulusverlichting gepresenteerd in een van de openingen 1,2,5. De stimulus wordt gegeven voor een specifieke lengte die bekend staat als de stimulusduur (StD). Het dier kan reageren op de stimulus terwijl deze wordt gepresenteerd of gedurende een beperkt tijdvenster nadat de soa voorbij is, bekend als limited hold (LH). Om te reageren, moet het dier de doelopening met de neus prikken en, indien correct uitgevoerd, wordt een beloning vrijgegeven in het voedselmagazine 1,2,5. Anders resulteert elke onjuiste reactie, evenals elke reactie vóór de presentatie van de stimulus (anticiperend of voortijdig) of het niet reageren (weglaten) in een time-out (TO), waarbij het huislicht gedurende een bepaalde duurwordt uitgeschakeld 1,2,5 (figuur 1). Over het algemeen meet de discriminerende stimulusnauwkeurigheid het aandachtsfunctioneren, terwijl voortijdige en volhardende reacties (herhaalde reacties bij de openingen na stimuluspresentatie) worden beschouwd als maatstaven voor impulsief gedrag en compulsiviteit, respectievelijk 1,4,5,6.
Figuur 1: Mogelijke proefsequenties van een typische 5-CSRTT. Na het intertriale interval wordt het stimuluslampje voor een bepaalde duur ingeschakeld en vervolgens uitgeschakeld tijdens het interval beperkte wachttijd. De rat kan correct antwoorden en een beloning ontvangen of verkeerd antwoorden en gedurende deze tijd een time-out krijgen. Als de rat niet op tijd antwoordt, resulteert het weglaten ervan in een time-out. Evenzo, als het reageert vóór de presentatie van de lichtprikkel, resulteert de voortijdige reactie in een time-out. Een andere proefperiode begint na het verzamelen van de beloning of het einde van de time-outperiode. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
De 5-CSRTT wordt veel gebruikt vanwege de flexibiliteit: door parameters van de onderzoeksopzet te wijzigen, kunnen verschillende subcategorieën van aandacht worden onderzocht. Terwijl het dier bijvoorbeeld geacht wordt zijn aandacht te verdelen over de vijf verschillende openingen (visuospatiale aandacht), maakt het gebruik van irrelevante stimuli (bijv. Auditieve stimuli) het testen van selectieve of aanhoudende aandachtmogelijk 1,2,5,6. Daartoe kan de experimentele opstelling worden uitgebreid met luidsprekers, die kunnen worden gebruikt als afleidende of zelfs versterkende stimuli 1,2,5,6. Bovendien kan de aandachtsbelasting direct worden gemoduleerd door de stimuluspresentatie te wijzigen of de ITI-duur10 te randomiseren. De 5-CSRTT wordt niet alleen gebruikt bij knaagdieren 3,7, maar is onlangs aangepast om niet-menselijke primaten 1,7,8 en vis 7,9 te testen, wat de haalbaarheid ervan verder aantoont. Een volledig aanpasbare 5-CSRTT toolbox maakt het mogelijk om het standaard knaagdierparadigma eenvoudig aan te passen aan andere diermodellen. Bovendien stimuleert de aanpassingsflexibiliteit van de 5-CSRTT-toolbox ook onderzoek met behulp van niet-standaard taakontwerpen.
De volledig aanpasbare 5-CSRTT toolbox die hier wordt gepresenteerd, bevat een Arduino-script voor hardwarebesturing, geprogrammeerd in een geïntegreerde ontwikkelomgeving. Het bestaat ook uit een Matlab-toolbox (versie R2019b of jonger) voor experimentcontrole. Het volgende protocol legt uit hoe u de 5-CSRTT toolbox configureert met het veelgebruikte standaardparadigma en toont optionele configuraties voor niet-standaard paradigma’s.
Het huidige protocol is gericht op het ontwikkelen en testen van een goedkoop en volledig aanpasbaar alternatief voor het standaard, in de handel verkrijgbare 5-keuze seriële reactietijdtaakapparaat. Gewoonlijk bieden commercieel verkrijgbare soorten apparaten een beperkte reeks functies als dat nodig is om het standaardonderzoek 5-CSRTT uit te voeren. Hierdoor zijn niet-standaard wijzigingen in de specifieke onderzoeksopzet, zoals wijzigingen in de proefvolgorde of doelstimuluscombinaties, meestal niet mogelijk. Bovendien worden veel van de beschikbare soorten apparaten geleverd met specifieke, gesloten software die mogelijk geen toegang biedt tot alle gedragsgegevens van het experiment, zoals de timing en het diafragma van voorbarige en volhardende antwoorden. Het essentiële voordeel van de hier gepresenteerde toolbox is daarentegen – naast de lage kosten – de mogelijkheid om veel verschillende proefontwerpen en onderzoeksparadigma’s te implementeren. Momenteel ondersteunt de toolbox de definitie van meerdere stimulusontwerpen, zoals het toestaan van gedimde stimuli en het gebruik van twee pelletafgiftesystemen en beloningsafhankelijkheid van reactietijd. Het ondersteunt ook het gebruik van een miniatuurluidspreker voor auditieve feedback. Het primaire doel is echter om eenvoudige aanpassingen van de proefvolgorde mogelijk te maken volgens het doel van de gebruiker, zoals het introduceren van gedimde verlichte openingen en belonende schema’s voor besluitvormingstaken of het integreren van state-of-the-art positieve versterkingstrainingsbenaderingen11. Bovendien worden alle ruwe gegevens die tijdens de sessie zijn verzameld, beschikbaar gesteld voor verdere analyse. De toolbox biedt een trapfunctie voor geautomatiseerde gedragstraining, die ook volledig aanpasbaar is en waarmee de gebruiker de criteria voor elke niveau-update, het aantal trainingsniveaus en de bij te werken parameters kan wijzigen. Bovendien is het apparaat zelf zeer aanpasbaar en zijn veranderingen in het proefontwerp en de indeling van de kamer gemakkelijk haalbaar, waardoor het mogelijk is om het 5-CSRTT-paradigma toe te passen op diersoorten die een ander onderzoeksontwerp nodig hebben dan wat de commercieel beschikbare soorten apparaten bieden.
Specifieke onderdelen van het protocol voor de softwareconfiguratie zijn van cruciaal belang voor een soepele workflow: vooral voor de eerste dag van het experiment is de voorbereiding van zowel de hardware- als experimentbesturingssoftware (stappen 2 en 3) en de configuratie van stap 5.3 cruciaal. Ervoor zorgen dat de seriële poortverbinding tussen de microcontrollerhardware, de software en de experimentbesturingssoftware goed werkt, is van cruciaal belang voor het opzetten van een volledig functionerende 5-CSRTT-toolbox. Aan het begin van elke experimentdag is het raadzaam om de drie bovenstaande stappen te herhalen om ervoor te zorgen dat de hardware- en experimentbesturingsscripts correct zijn geconfigureerd.
Ten slotte is de huidige beperking van de toolbox de implementatie ervan naar één exclusief programmeerplatform, wat helaas het gebruik ervan als een complete open-source toolbox in gevaar brengt. Niettemin moet de toolbox in principe gemakkelijk kunnen worden aangepast aan andere programmeertalen zoals Python, omdat het verloop van één proef ongewijzigd blijft.
In vergelijking met bestaande alternatieve methoden maakt de hier geïntroduceerde 5-CSRTT-toolbox de implementatie van het standaard 5-CSRTT-paradigma en wijzigingen ervan mogelijk, zoals het definiëren van een ingesteld tijdvenster voor volhardende antwoorden of het introduceren van afleidende of versterkende stimuli zoals luidsprekers of knipperende lichten. Naast het feit dat het gemakkelijk te gebruiken en zeer aanpasbaar is, is het apparaat goedkoop en kan het gemakkelijk worden gerepliceerd, en het stimuleert onderzoek met behulp van niet-knaagdierdiermodellen.
The authors have nothing to disclose.
Dit werk wordt ondersteund door DFG WE 5469/3-1.
1200 Ohm Resistor | Already available in the lab | ||
8-bit 10 kΩ digital potentiometer | Microchip | MCP42010-I/P | From Conrad.de: 1083205 |
ARD MEGA2560 KIT Arduino – Mega 2560 R3 Lernset | JOY-IT | ARD-Set01 | From Reichelt.de: ARD MEGA2560 KIT |
ARD SHD MOTOR Arduino Shield – Motor | Adafruit | 1438 | From Reichelt.de: ARD SHD MOTOR |
ARDUINO STACKABLE HEADER KIT – R3 | Sparkfun Electronics | PRT-11417 | From Antratek.de: PRT-11417 |
Chow | Altromin | 1324 N | Altromin chow products |
Euro-Gehäuse | Hammond Electronics | 1591EBK | From Conrad.de: 520691 |
Food pellets | Bio-Serv | F0021 | From Bio-serv.com: Dustless Precision Pellets Rodent |
Fritzing | Interaction Design Lab Potsdam | Fritzing Software download | |
Integrated Development Environment | Arduino | Arduino IDE download (Freely available) | |
IR Break Beam Sensor – 3mm LEDs | Adafruit | 2167 | From Mouser.de: 485-2167 |
Laptop or Computer | |||
LED white round 5mm 2000mcd 20mA | TruComponents | 1573731 | From Conrad.de: 1573731 |
Microswitch | Hartmann | MBB1 01 A 01 C 09 A | From Conrad.com: 707243 |
NeoPixel Stick – 8 WS2812 5050 RGB LEDs | Adafruit | 1426 | From Reichelt.de: DEBO LED NP8 2 |
Passive buzzer Speaker | Conrad Components | 93038c213a | From Conrad.de: 1511468 |
Pellet release disk | Already available in the lab. Similar products depicted below. Keep in mind that some of these products make use of different (and stronger) motors and infrared sensors. The use of the microswitch (row 7) and the Arduino Motor Shield (row 3) need to be adapted to fit these new specifications. We recommend 3d printing the disk to work with the provided materials and software. Carbatec universal base plate Open Science Framework Open Feeder Open Ephys 3d Model Food Pellet Dispenser Campden Instruments 45mg pellet dispenser |
||
Programming platform | Mathworks | R2019b or younger | |
Psychtoolbox Software | V3 | Psychtoolbox-3 download | |
Spur GEAR-MOTOR with DC brush motor | Micromotors | B138F.12.208 | Micromotos Series B138F Technical data |