Summary

Assemblaggio e caratterizzazione di un driver esterno per la generazione di flussi oscillatori sub-kilohertz in microcanali

Published: January 28, 2022
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Summary

Il protocollo dimostra un metodo conveniente per produrre un flusso oscillatorio armonico da 10-1000 Hz in microcanali. Questo viene eseguito interfacciando un diaframma dell’altoparlante controllato dal computer al microcanale in modo modulare.

Abstract

La tecnologia microfluidica è diventata uno strumento standard nei laboratori chimici e biologici sia per l’analisi che per la sintesi. L’iniezione di campioni liquidi, come reagenti chimici e colture cellulari, viene effettuata prevalentemente attraverso flussi costanti che sono tipicamente guidati da pompe a siringa, gravità o forze capillari. L’uso di flussi oscillatori complementari è raramente considerato nelle applicazioni, nonostante i suoi numerosi vantaggi, come recentemente dimostrato in letteratura. La significativa barriera tecnica all’implementazione di flussi oscillatori nei microcanali è probabilmente responsabile della mancanza della sua adozione diffusa. Le pompe a siringa commerciali avanzate in grado di produrre flusso oscillatorio, sono spesso più costose e funzionano solo per frequenze inferiori a 1 Hz. Qui viene dimostrato l’assemblaggio e il funzionamento di un apparato a basso costo, basato su altoparlanti di tipo plug-and-play, che genera flusso oscillatorio in microcanali. Flussi oscillatori armonici ad alta fedeltà con frequenze comprese tra 10 e 1000 Hz possono essere raggiunti insieme al controllo indipendente dell’ampiezza. Ampiezze che vanno da 10-600 μm possono essere raggiunte in tutta la gamma di funzionamento, comprese le ampiezze > 1 mm alla frequenza di risonanza, in un tipico microcanale. Sebbene la frequenza di oscillazione sia determinata dall’altoparlante, illustriamo che l’ampiezza dell’oscillazione è sensibile alle proprietà del fluido e alla geometria del canale. In particolare, l’ampiezza dell’oscillazione diminuisce con l’aumentare della lunghezza del circuito del canale e della viscosità del liquido e, al contrario, l’ampiezza aumenta con l’aumentare dello spessore e della lunghezza del tubo dell’altoparlante. Inoltre, l’apparecchio non richiede caratteristiche precedenti per essere progettato sul microcanale ed è facilmente rimovibile. Può essere utilizzato contemporaneamente a un flusso costante creato da una pompa a siringa per generare flussi pulsatili.

Introduction

Il controllo preciso della portata del liquido nei microcanali è fondamentale per le applicazioni lab-on-a-chip come la produzione di goccioline e l’incapsulamento1, la miscelazione 2,3 e lo smistamento e la manipolazione delle particelle sospese 4,5,6,7. Il metodo prevalentemente utilizzato per il controllo del flusso è una pompa a siringa che produce flussi costanti altamente controllati che erogano un volume fisso di liquido o una portata volumetrica fissa, spesso limitata a un flusso interamente unidirezionale. Le strategie alternative per la produzione di flusso unidirezionale includono l’uso della testa gravitazionale8, delle forze capillari9 o del flusso elettro-osmotico10. Le pompe a siringa programmabili consentono un controllo bidirezionale dipendente dal tempo delle portate e dei volumi erogati, ma sono limitate a tempi di risposta superiori a 1 s a causa dell’inerzia meccanica della pompa a siringa.

Il controllo del flusso a scale temporali più brevi sblocca una pletoradi 6,11,12,13,14,15 di possibilità altrimenti inaccessibili a causa di cambiamenti qualitativi nella fisica del flusso. Il mezzo più pratico per sfruttare questa variegata fisica del flusso è attraverso onde acustiche o flussi oscillatori con periodi di tempo che vanno da 10-110-9 s o 101 -109 Hz. L’estremità superiore di questa gamma di frequenze è accessibile utilizzando dispositivi a onda acustica di massa (BAW; 100 kHz-10 MHz) e onde acustiche di superficie (SAW; 10 MHz-1 GHz). In un tipico dispositivo BAW, l’intero substrato e la colonna di fluido vengono vibrati applicando un segnale di tensione attraverso un piezoelettrico legato. Ciò consente rendimenti relativamente elevati, ma si traduce anche in riscaldamento ad ampiezze più elevate. Nei dispositivi SAW, tuttavia, l’interfaccia solido-liquido viene oscillata applicando tensione a una coppia di elettrodi interdigitati modellati su un substrato piezoelettrico. A causa delle lunghezze d’onda molto corte (1 μm-100 μm) particelle piccole come 300 nm possono essere manipolate con precisione dall’onda di pressione generata nei dispositivi SAW. Nonostante la capacità di manipolare piccole particelle, i metodi SAW sono limitati alla manipolazione delle particelle locali poiché l’onda si attenua rapidamente con la distanza dalla sorgente.

Nella gamma di frequenza 1-100 kHz, i flussi oscillatori sono solitamente generati utilizzando piezo-elementi che sono legati a un microcanale di polidimetilsilossano (PDMS) sopra una cavità progettata16,17. La membrana PDMS sopra la cavità modellata si comporta come una membrana vibrante o un tamburo che pressurizza il fluido all’interno del canale. A questa gamma di frequenze, la lunghezza d’onda è maggiore della dimensione del canale, ma le ampiezze della velocità di oscillazione sono piccole. Il fenomeno più utile in questo regime di frequenza è la generazione di flussi di flusso acustico/viscoso, che sono flussi costanti rettificati causati dalla non linearità inerente al flusso di liquidi con inerzia18. I flussi di flusso costante si manifestano tipicamente come vortici controrotanti ad alta velocità in prossimità di ostacoli, spigoli vivi o microbolle. Questi vortici sono utili per miscelare19,20 e separare particelle di dimensioni 10 μm dal flussodi flusso 21.

Per le frequenze nell’intervallo 10-1000 Hz, sia la velocità della componente oscillatoria che il suo flusso viscoso costante associato sono considerevoli in grandezza e utili. Forti flussi oscillatori in questa gamma di frequenze possono essere utilizzati per la messa a fuoco inerziale22, facilitano la generazione di goccioline23 e possono generare condizioni di flusso (numeri di Womersley) che imitano il flusso sanguigno per studi in vitro . D’altra parte, i flussi di streaming sono utili per la miscelazione, l’intrappolamento delle particelle e la manipolazione. Il flusso oscillatorio in questa gamma di frequenze può anche essere realizzato utilizzando un elemento piezoelettrico legato al dispositivo come descritto sopra23. Un ostacolo significativo all’implementazione di flussi oscillatori attraverso un elemento piezoelettrico legato è che richiede che le caratteristiche siano progettate in anticipo. Inoltre, gli elementi degli altoparlanti incollati non sono staccabili e un nuovo elemento deve essere incollato a ciascun dispositivo24. Tuttavia, tali dispositivi presentano il vantaggio di essere compatti. Un metodo alternativo consiste nell’utilizzare una valvola a relè elettromeccanica20. Queste valvole richiedono sorgenti di pressione pneumatiche e software di controllo personalizzato per il funzionamento e quindi aumentano la barriera tecnica al collaudo e all’implementazione. Tuttavia, tali dispositivi consentono l’applicazione dell’ampiezza e della frequenza di pressione impostate.

In questo articolo, viene descritta la costruzione, il funzionamento e la caratterizzazione di un metodo user-friendly per generare flussi oscillatori nella gamma di frequenze di 10-1000 Hz nei microcanali. Il metodo offre numerosi vantaggi come l’assemblaggio economico, la facilità d’uso e la predisposizione per l’interfaccia con canali e accessori microfluidici standard come pompe a siringa e tubi. Inoltre, rispetto ai precedenti approcci simili25, il metodo offre all’utente un controllo selettivo e indipendente delle frequenze e delle ampiezze di oscillazione, compresa la modulazione tra forme d’onda sinusoidali e non sinusoidali. Queste caratteristiche consentono agli utenti di implementare facilmente flussi oscillatori e, quindi, facilitano l’adozione diffusa in una vasta gamma di tecnologie e applicazioni microfluidiche attualmente esistenti nei campi della biologia e della chimica.

Protocol

1. Progettazione e fabbricazione rapida di stampi prototipali Aprire AutoCAD su un PC. Selezionare File sulla barra delle applicazioni, quindi selezionare Apri e individuare e fare clic su un file di modello tridimensionale (3D) dello stampo del canale con estensione .dxf o .dwg. Selezionate l’intero modello facendo clic su di esso e trascinando una casella attorno ad esso. Esportare il progetto come file con estensione stl selezionando File | <strong…

Representative Results

Per illustrare la capacità e le prestazioni della configurazione di cui sopra, vengono presentati i risultati rappresentativi del flusso oscillatorio in un semplice microcanale lineare con una sezione trasversale quadrata. La larghezza e l’altezza del canale sono 110 μm e la sua lunghezza è di 5 cm. In primo luogo, descriviamo il movimento delle particelle traccianti sferiche di polistirene e come queste possono essere utilizzate per verificare la fedeltà del segnale oscillatorio e la gamma di ampiezze di oscillazion…

Discussion

Abbiamo dimostrato l’assemblaggio (vedi protocolli critici 3 e 4) e il funzionamento (vedi protocolli critici passaggi 5 e 6) di un apparato esterno basato su altoparlanti per la generazione di flusso oscillatorio con frequenze comprese tra 10 e 1000 Hz in dispositivi microfluidici. Il tracciamento delle particelle traccianti sospese è necessario per determinare la fedeltà del moto armonico e per calibrare l’intervallo di ampiezze di oscillazione ottenibili nell’intervallo delle frequenze operative. La curva ampiezza-f…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Vorremmo riconoscere il supporto fornito e le strutture fornite dal Dipartimento di Scienze Meccaniche e Ingegneria Rapid Prototyping Lab presso l’Università dell’Illinois per consentire questo lavoro.

Materials

Oscillatory Driver Assembly
Alligator-to-pin wire Adafruit 3255 Small alligator clip to male jumper wire (12)
Aux cable Adafruit 2698 3.5 mm Male/Male stereo cable 1 m
Controller chip Damgoo TPA3116 50w+50w 2 channel audio amplifier (bluetooth and AUX)
DC adapter Adafruit 798 12 V DC 1A regulated switching power adapter
Micro-pipette tip VWR Signature 37001-532 200 ul micropipette tip
Silicone sealant Loctite 908570 Clear silicone waterproof sealant (80 ml)
Speaker Drok 6843996 4.5 inch 4 Ohm 40 W speaker
Speaker mount 3D printed from 'speakermount.stl' in supplementary files
Speaker-to-tube adapter 3D printed from 'speaketubeadapter.stl' in supplementary files
Microchannel Manufacture
Biopsy punch Miltex 15110 Biopsy punch with plunger (1 – 4 mm)
Degasser
Disposable cup
Disposable spoon
Glass Slides VWR Signature 16004-430 3" x 1" pre clean 1 mm thick
Mold Si – SU-8 or 3D printed
Oven Fischer Scientific Isotemp
PDMS resin and cross-linker Dow Chemical 4019862 Sylgard 184 PDMS resin and crosslinker (500 g)
Polyethylene tubing Becton Dickinson Intramedic 427440 Polyethylene tubing (PE 60 – PE 200)
Razor blades VWR 55411-050 Single edge industrial razor blades
RF plasma generator Electro-Technic Products BD – 20 High frequency generator
Silicone Mold Release CRC 03301 Food Grade Silicon Mold release (16 oz)
Observation and Characterization
Camera Edgertronic SC2+
Lens Nikon Plan Fluor 10x
Microscope Nikon Ti Eclipse manual stage
Needles Becton Dickinson 305175  PrecisionGlide 20G
Syringe Becton Dickinson 1180100555 Monoject 1 ml
Syringe pump Harvard Apparatus Dual syringe programmable syringe pump
Tracer Particles Spherotech PP-10-10 Polystyrene tracer particles 1 um

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Cite This Article
Vishwanathan, G., Juarez, G. Assembly and Characterization of an External Driver for the Generation of Sub-Kilohertz Oscillatory Flow in Microchannels. J. Vis. Exp. (179), e63294, doi:10.3791/63294 (2022).

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