マウスバガル・アファレントニューロンにおけるGタンパク質結合受容体発現 の 検出

迷走性の細胞体は、頸部、ペトロサル、および無用量神経節^1、2、3に含^{まれている}。彼らの軸索は、頭蓋神経、胸部、および腹部の領域^{4、5、6、7}に迷走神経のいくつかの枝を介して一緒に移動^します。彼らの内臓の終わりから、迷走者は生理学的および有害な刺激の広い範囲に応答することができます^8、9、10.しかし、バジクエンセンシングに関与するシグナル伝達分子や受容体の分布は、依然として十分に特徴付けされていません。これは、迷走性神経節が、その小さなサイズにもかかわらず、多数のGPCRs8、11、12、13を含む幅広い受容体スペクトル^を発現するためである。さらに、迷走性の無フェレントニューロンは本質的に異種であり、明確な分子プロファイル¹⁴を表示する。問題を複雑にするために、頸部、ペトロサル、およびノードーズ神経節がマウスに取り付けられ、それによって単一の神経節塊を形成する。最後に、動物のサブセットにおいて、無用量神経節は交感神経節¹⁵に交感神経節に付着している。

過去に、研究者は、迷走性の神経細胞^16、17、18の神経化学的構成を研究するために免疫体系化学に目を向けました。検証された抗体を用いた免疫組織化学は有用であるが、免疫組織化学の研究結果は慎重に解釈されなければならない。例えば、GPCRsに対する特定の抗体を同定するための数多くの努力は^{、19、20、21、22、23、24、25}に失敗し、研究者はGPCBに対する抗体の大半が信頼できないと結論付けました。これらの問題を回避するために、定量PCR(qPCR)は、げっ歯類迷膜神経節系質量^{26、27、28、29}における遺伝子発現を評価するために広く使用されている。しかし、qPCRを用いた遺伝子発現の検討は、空間情報の損失を犠牲にして生じる。特に、対象となる特定の遺伝子(例えば、無用量対頸部細胞)を発現する細胞の数や細胞タイプは予測できない。また、反復的な問題としては、隣接組織との汚染や迷走神経の可変長、上頸部、および解剖¹⁵中の頸管神経節の含めることも含まれる。上記の困難の結果として、論争は、迷走性の神経細胞におけるいくつかのGPCBの発現と分布を取り巻く。特に不可解な例の1つは、グレリン受容体(Ghsr)に関する。いくつかの研究は、バガルの無フェレントニューロン^30、31、32でこの受容体の広範な発現を発見しているのに対し、他の研究は、Gsr mRNAが^、11,14の無用量でほとんど検出できないことが判明した。したがって、迷走神経節系質量におけるGhsr mRNAの詳細なマッピングが保証される。

また、この中で、迷走神経節塊^{7、11、12、33、34、35}の遺伝子発現パターンを評価するためにも使用されている。RNAベースの技術は、ほとんどの状況下で抗体ベースの技術よりも信頼性が高く、特異的なままであるため^{、36、37、ISH}研究は、迷膜の発泡神経細胞の神経化学的コーディングのより良い理解のために価値があることが証明されています。それにもかかわらず、伝統的なISH技術自体は注意点がないわけではありません。放射性ISHは敏感であるが、背景を生成し、面倒な³⁸のままです。非放射性のISHは複雑ではなく、感度が低い³⁸です。対照的に、最近開発されたRNAscope ISH法は高感度で、最小限の背景³⁹を生成します。現在の研究では、マウスの迷走性の神経細胞におけるGPCBの検出に多重蛍光RNAscopeを適用した。我々は、Ghsrの分布をマッピングすることに焦点を当て、その分布をコレシストキニン受容体(Cck1r)と比較し、無用量神経節³⁴で発現することがよく知られている別のGPCRである。最後に、2つの転写因子は、ペアドライホメオボックス2b(Phox2b)およびPRドメインジンクフィンガータンパク質12(Prdm12)と、それぞれ¹⁴個の無用量および頸状の帯状神経細胞に対する選択マーカーとして使用した。Phox2bまたはPrdm12を視覚化しなければ、確実に頸部対無用量のアフェレントを特定することは困難です。潜在的な技術的な落とし穴についても、記事全体で説明されています。