Criblage chromosomique d’embryons humains préimplantatoires à l’aide de milieux de culture épuisés : prélèvement d’échantillons et analyse de la ploïdie chromosomique

Les techniques de procréation assistée (ART) sont de plus en plus utilisées pour le traitement de l’infertilité. Cependant, le taux de réussite des traitements antirétroviraux, tels que la FIV, a été limité et le taux de fausse couche est significativement plus élevé que celui de la population normale¹. La principale cause de ces problèmes est les anomalies chromosomiques, qui existent couramment dans les embryons humains préimplantatoires². Le PGT-A est une méthode efficace de dépistage de l’équilibre chromosomique des embryons avant l’implantation ^3,4. Certaines études ont prouvé que le PGT-A peut réduire le taux d’avortement et améliorer le taux de grossesse 5,6,7,8. Cependant, le PGT-A nécessite une expertise technique complexe qui nécessite une formation et une expérience spécifiques. La procédure invasive de biopsie embryonnaire pourrait également causer des dommages aux embryons⁹. Des études ont montré que la biopsie du blastomère peut entraver le développement ultérieur et que le nombre de TE biopsiées peut affecter les taux d’implantation¹⁰. Bien que la question de la biosécurité à long terme de la biopsie embryonnaire n’ait pas encore été évaluée de manière approfondie chez l’homme, des études animales ont montré ses influences négatives sur le développement de l’embryon^11,12,13.

Des rapports antérieurs indiquaient que des traces d’ADN étaient sécrétées dans le milieu de culture au cours du développement de l’embryon, et des efforts ont été faits pour effectuer un criblage chromosomique complet (CCS) à l’aide de milieux de culture embryonnaires épuisés 14,15,16,17,18. Cependant, les taux de détection et la précision des tests n’ont pas répondu aux exigences d’une utilisation clinique étendue. La présente étude a fait état d’une amélioration du test NICS pour augmenter les taux de détection ainsi que la précision du test NICS¹⁹. Au cours des dernières années, le liquide blastocoele (BF) a été étudié en tant qu’échantillon analytique de PGT-A mini-invasif. Cependant, la proportion d’amplification réussie à l’échelle du génome et d’ADN détectable dans les échantillons de liquide de blastocyste varie de 34,8 % à 82 %^20,21,22. Le volume de BF rapporté dans diverses études varie de 0,3 nL à 1 μL. Compte tenu de la faible quantité d’ADN dans BF, il est possible d’augmenter la quantité d’ADN acellulaire en mélangeant le liquide du blastocyste et le milieu de culture pour améliorer le taux de réussite et la cohérence de la détection. Kuznyetsov et al.²³ et Li et ^al.24 ont traité la zone pellucide avec un laser et ont libéré du liquide de blastocyste dans le milieu de culture pour améliorer la quantité totale d’ADN embryonnaire, et le taux d’amplification des échantillons combinés milieu/BF après WGA était de 100 % et 97,5 %, respectivement. Jiao et ^al.25 ont également obtenu un taux de réussite d’amplification de 100% en utilisant la même méthode.

La présente étude fait état d’un protocole détaillé qui comprend la préparation des échantillons de milieux usés, la préparation du NGS et l’analyse des données. En retirant soigneusement les cellules de cumulus des ovocytes, la présente étude a effectué une injection intracytoplasmique de spermatozoïdes uniques (ICSI) et une culture de blastocystes. Le support dépensé du jour 4, du jour 5 et du jour 6 a été collecté pour la préparation de la bibliothèque WGA et NGS. En utilisant la technologie NICS, la présente étude a rationalisé les étapes de préparation des bibliothèques WGA et NGS en environ 3 h et a obtenu des résultats CCS non invasifs en environ 9 h.