Summary

Ein einstellbares Hochauflösendes Bildgebungssystem für Verhaltensstudien von Drosophila Erwachsenen

Published: June 08, 2021
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Summary

Dieses Protokoll beschreibt, wie man eine einfache Erwachsene Drosophila Verhaltensbeobachtungskammer macht und wie man hochauflösende Fotos / Videos der Morphologie oder des Verhaltens verschiedener Arten von Fruchtfliegen in der Beobachtungskammer mit relativ einfachen und erschwinglichen Methoden macht.

Abstract

Drosophila melanogaster ist ein sehr leistungsfähiges Modell in der biologischen Forschung, aber ein schlechtes Modell für Fotografie oder Videografie. Dieser Artikel beschreibt eine einfache, aber effektive Methode, um das Verhalten oder die Morphologie von Fliegen zu beobachten und zu dokumentieren. Fliegen wurden in einer durchscheinenden Beobachtungskammer c.a. platziert. Ø15 x 5mm (kein Essen innen) oder Ø15 x 12 mm (mit einem 8 mm hohen Stück Futter innen). Nach der Abdeckung mit einem ultravioletten (UV) / klaren Filter mit hoher Lichtdurchlässigkeit wurde die Kammer unter ein Stereomikroskop mit 5-50-fachem Zoom gelegt, und auf beiden Seiten des Mikroskops wurden Videoleuchten mit Mini-Leuchtdioden (LED) platziert, um die Kammer zu beleuchten, um gleichmäßiges, weiches, helles und nahezu schattenfreies Licht zu erhalten. Dann wurde eine kompakte Digitalkamera mit 3-5-fachem optischem Zoom, die 1080 P hochauflösende oder höher aufgelöste Videos (bei einer Bildrate von ≥30 fps) aufnehmen kann, über eine Halterung mit dem Okular des Mikroskops verbunden und Fotos oder Videos wurden durch das Okular aufgenommen. Durch die Einstellung des Zoom-Knopfes des Zoom-Stereomikroskops war es sehr einfach, die Fliegen zu verfolgen und nach Bedarf Panorama- oder detaillierte Nahaufnahmen aufzunehmen, während die Kamera alles unter dem Mikroskop aufzeichnete. Da die Fliegen an jeder Position in der Kammer bleiben können, können sie aus allen Richtungen beobachtet und aufgezeichnet werden. Die aufgenommenen Fotos oder Videos sind von guter Bildqualität. Diese Methode kann sowohl für die wissenschaftliche Forschung als auch für die Lehre eingesetzt werden.

Introduction

Drosophila melanogaster ist ein herausragendes Modell in der biologischen Forschung; Es ist jedoch ein schlechtes Modell für Fotografie oder Videografie, da es zu klein für eine Kamera oder einen Camcorder und zu groß für ein zusammengesetztesMikroskop 1ist. Trotz exzellenter Forschung, die in der Literatur beschrieben wird, haben die meisten Studien nur verschwommene, unklare Bilder geliefert, anstatt klare und scharfe Fotos mit klaren Details, die das beschriebene Fliegenverhalten veranschaulichen. Obwohl das Verhalten von Fliegen ausführlich untersucht wurde (z. B. Balz und Kämpfen), haben die meisten dieser Papiere Illustrationen verwendet, um ihre Forschung den Lesern zu erklären.

Dieses Papier beschreibt einen einfachen und wirtschaftlichen Ansatz. Mit dieser Methode können nicht nur die verschiedenen Verhaltensweisen von Drosophila beobachtet werden, sondern auch alle Details, die unter einem Stereozoommikroskop beobachtet werden können, können klar und scharf aufgezeichnet werden. Natürlich kann diese Methode auch verwendet werden, um die Morphologie von Fliegen aufzuzeichnen, denn wenn sie in einen Schlaf- oder Halbschlafzustand eintreten, ermöglicht das stationäre Modell dem Benutzer, ein Foto oder einen Stapel von Fotos mit verschiedenen Fokusebenen aufzunehmen, um ein erweitertes Tiefenschärfefoto zu erhalten. Diese Methoden können ohne komplizierte Technik und teure Ausrüstung oder sogar hervorragende manuelle Fähigkeiten realisiert werden.

Die Videokomponente dieses Artikels zeigt Videos von mehreren typischen Verhaltensweisen von Fliegen. Der Zweck der Präsentation dieser Videos ist zweifach: Einer besteht darin, das Publikum wissen zu lassen, was erfasst werden kann, und die mit dieser Methode erzielte Bildqualität zu präsentieren; die andere besteht darin, neuen Schülern, die sich für Drosophila interessieren, aber bisher nicht die Möglichkeit hatten, das Verhalten von Fliegen tatsächlich zu beobachten, das Verhalten von Fliegen (wie Balz, Kämpfen) durch diese klaren Videos und nicht durch Illustrationen oder verschwommene Bilder verstehen zu lassen.

Ergänzendes Video: Fruchtfliegenverhalten: Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.

Protocol

1. Aufbau des Beobachtungs-/Dokumentationssystems HINWEIS: Die Materialien, die zum Aufbau des Flugverhaltensbeobachtungs-/Dokumentationssystems benötigt werden, sind in Abbildung 1und das fertige System in Abbildung 2 dargestellt. Das Protokoll zum Aufbau des Systems und seine Verwendung werden im Folgenden beschrieben. Machen Sie einen fly behavior o</st…

Representative Results

Schießen Sie durch einen UV-Filter für klare und scharfe BilderFühren Sie ein einfaches Experiment durch, um den Unterschied zwischen einem UV-Filter und gewöhnlichem Glas im Labor zu beobachten. Nehmen Sie ein Durchstechflasche mit Fliegenkultur, entfernen Sie den Stopfen, legen Sie ihn unter ein Stereo-Seziermikroskop und bedecken Sie ihn (abwechselnd) mit einem UV-Filter und einem Petrischalendeckel. Die in diesen beiden Fällen aufgenommenen Fotos sind in Abbildung 5 darg…

Discussion

Licht ist das Herzstück der Fotografie und Videografie und der entscheidende Faktor für qualitativ hochwertige Bilder16. Hier wurden zwei LED-Videoleuchten mit einstellbarer Helligkeit und Farbtemperatur als Leuchtmittel verwendet, und ein transluzentes Material wurde ausgewählt, um das FBOC herzustellen. Die LED-Lichtpaneele auf beiden Seiten sorgten für genügend Helligkeit, und das transluzente Material erweichte und streute Licht, wodurch schließlich gleichmäßiges, weiches und helles Li…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Wir danken Professor Li Xiangdong und dem Fotografen Herrn Cheng Jing für hilfreiche Diskussionen und Anregungen. Diese Arbeit wurde durch das Exploratory Project (20200101) des Life Science Experimental Teaching Demonstration Center der China Agricultural University unterstützt.

Materials

compact camera, Nikon P310 Nikon 3-5x optical zoom, cam record 1080 P HD video
ethylamine foam 60 mm x 60 mm x 15 mm
Food Blue No 1 CAS 3844-45-9
mini LED lights and transformer GODOX LED-P120 have 5000-5600 K color temperature
small container (e.g. bottle cap) about Ø 15 mm x 20 mm
UV / Clear filter high-quality UV/Clear filter with high transmittance, 30-40 mm
zoom stereo microscope 5-50x zoom

References

  1. Chyb, S., Gompel, N. . Atlas of Drosophila morphology: Wild-type and classical mutants. , (2013).
  2. Yang, D. Carnivory in the larvae of Drosophila melanogaster and other Drosophila species. Scientific Reports. 8, 15484 (2018).
  3. Piper, M. D., et al. A holidic medium for Drosophila melanogaster. Nature Methods. 11, 100-105 (2014).
  4. Shiraiwa, T., Carlson, J. R. Proboscis extension response (PER) assay in Drosophila. Journal of visualized experiments : JoVE. (3), e193 (2007).
  5. Yang, C. -. H., Belawat, P., Hafen, E., Jan, L. Y., Jan, Y. -. N. Drosophila egg-laying site selection as a system to study simple decision-making processes. Science. 319 (5870), 1679-1683 (2008).
  6. Yang, D. Simple homemade tools to handle fruit flies-Drosophila melanogaster. Journal Of Visualized Experiments: JoVE. (149), e59613 (2019).
  7. Nichols, C. D., Becnel, J., Pandey, U. B. Methods to assay Drosophila behavior. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (61), e3795 (2012).
  8. Barron, A. B. Anesthetizing Drosophila for behavioural studies. Journal of Insect Physiology. 46 (4), 439-442 (2000).
  9. . My not quite complete protective filter article Available from: https://www.lensrentals.com/blog/2017/06/the-comprehensive-ranking-of-the-major-uv-filters-on-the-market (2017)
  10. . UV and clear lens protection filters review Available from: https://www.the-digital-picture.com/Reviews/UV-and-Clear-Lens-Protection-Filters.aspx (2013)
  11. Shaw, P. J., Cirelli, C., Greenspan, R. J., Tononi, G. Correlates of sleep and waking in Drosophila melanogaster. Science. 287 (5459), 1834-1837 (2000).
  12. Barradale, F., Sinha, K., Lebestky, T. Quantification of Drosophila grooming behavior. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (125), e55231 (2017).
  13. Szebenyi, A. L. Cleaning behaviour in Drosophila melanogaster. Animal Behaviour. 17 (4), 641-651 (1969).
  14. . Plexiglas : optical and transmission characteristics Available from: https://www.plexiglas.com/export/sites/plexiglas/.content/medias/downloads/sheet-docs/plexiglas-optical-and-transmission-characteristics.pdf (2000)
  15. . Calculation of the light reflection and transmission Available from: https://www.glassproperties.com/reflection/ (2007)
  16. Hunter, F., Biver, S., Fuqua, P. . Light science & magic: an introduction to photographic Lighting. , (2015).
  17. Hendricks, J. C., et al. Rest in Drosophila is a sleep-like state. Neuron. 25 (1), 129-138 (2000).
  18. Rieger, D., et al. The fruit fly Drosophila melangaster favors dim light and times its activity peaks to early dawn and late dusk. Journal of Biological Rhythms. 22 (5), 387-399 (2007).

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Cite This Article
Li, T., Weng, Y., Yang, D. An Adjustable High-Definition Imaging System for Behavioral Studies of Drosophila Adults. J. Vis. Exp. (172), e62533, doi:10.3791/62533 (2021).

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