אינדוקציה היפותרמיה משך זמן קצר בחולדות באמצעות מודלים למחקרים הבוחנים רלוונטיות קלינית ומנגנונים

כל ההליכים הניסיוניים היו בהתאם לקוד התרגול האוסטרלי לטיפול ושימוש בבעלי חיים למטרות מדעיות ואושרו על ידי ועדת הטיפול והאתיקה בבעלי חיים של אוניברסיטת ניוקאסל (A-2013-343 ו- A-2020-003). בנוסף לשיטות האינדוקציה היפותרמיה המתוארות להלן, הפרוטוקולים הבאים נעשים באופן שגרתי בשילוב עם היפותרמיה: קנוניציה קו הירך כדי לפקח על לחץ הדם וקצב הלב21, ושבץ ניסיוני22. 1. השתלת Datalogger הערה: התקן datalogger המשמש בפרוטוקול זה לא היה מסוגל לספק קריאה בזמן אמת של טמפרטורת הגוף. הקריאה אפשרית לאחר שמפתה הנתונים הוסר מהחיה ומחובר בחזרה למחשב. כתוצאה מכך, בדיקת הטמפרטורה רקטלית משמשת כדי לספק מידע בזמן אמת במהלך תהליך הקירור וההחלמה מחדש. בנוסף, הבדיקה רקטלית חיונית גם לשיטה זו מכיוון שמזרן החום הכירורגי שעליו ממוקם בעל החיים במהלך ההליך מוסדר על ידי מערכת הבדיקה ההסגרית. datalogger משמש גם מטרה חשובה של מתן נתוני טמפרטורה בחופשיות נע, חולדות ערות חשוב להבטיח כי טמפרטורת הגוף נורמלי נשמר לאחר התחממות. לכן, שני התקני ניטור טמפרטורה חשובים לפרוטוקול זה. מרדים 10-12 שבועות זכר גדל עכברוש Wistar עם איזופלוראן (5% עבור אינדוקציה ו 2-2.5% לתחזוקה) בתערובת 50% N2 ו 50% O2. לאחר אינדוקציה, מניחים את החולדה בתנוחה נוטה על מחצלת חום כירורגית. מקם את החולדה כך שהאף יושב בקונוס האף. אבטחו את האף עם סרט ניתוחי כדי להבטיח שאף גז לא יברחו. לגלח את הפרווה מהבטן הימנית התחתונה ולהזריק לאתר תת עורית עם הרדמה מקומית, Bupivacaine 0.2 מ”ל, 0.05%. יש למרוח תמיסת חיטוי על האזור המגולח הטרי. באמצעות כלים כירורגיים מעוקרים, לבצע חתך אורך 2 ס”מ לאורך אזור הבטן הימנית, פרוקסימלי לירך ימין. הפוך את החתך עמוק מספיק כדי לחשוף את החלל בקמט הירך הגחון. השתמש hemostats ומלקחיים כדי ליצור ‘כיס’ מתחת לעור כי הוא גדול מספיק כדי להחזיק את המכשיר. הכנס את מכשיר datalogger ניטור הטמפרטורה לכיס ולסגור את השריר והעור באמצעות 5-0 תפרי משי. השיטה התת עורית המתוארת כאן עדיפה על השיטה התוך-צפקית מכיוון שהיא פחות פולשנית ומאפשרת התאוששות טובה יותר לאחר ההליך. ודא שמבדק נתונים ובדיקה רקטלית מכוילים צולבים לניטור טמפרטורה (ראה דיון). ודאו כי מאגר הנתונים אינו נח על מחצלת החום של החיה לאחר ההחדרה, מכיוון שהדבר ישפיע על קריאות הטמפרטורה. איור 1: השתלת התקן datalogger. (A)לוחות משמאל לימין מראים חתירה של כ -2 ס”מ שנעשה בצד ימין של הבטן התחתונה של החולדה. (B)datalogger ניטור טמפרטורה הוכנס תת עורית לתוך חתך הכיס. (ג)ההסתה נסגרה בתפרים ניילון. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה. 2. אינדוקציה של היפותרמיה פעילה (מהירה) ללימודים מכניים הגדרת היפותרמיה (ראו איור 2). מניחים שני עמדות תשובה עם מלחציים משני צדי גופו של החולדה. חבר מאוורר 60 מ”מ 12 v/130 mA לכל דוכן תגמולים המבטיח שהאוהדים מכוונים לגב התחתון של החולדה. המרחק בין המלחציים לחולדה הוא כ-20 ס”מ. המאוורר בו נעשה שימוש חייב להיות במהירות של 4,000 סל”ד. יש מנורת חום בעלי חיים מוכן או בצד או על דוכן תשובה שלישי. התחל היפותרמיה על ידי התאמת מחצלת חום בעלי חיים לטמפרטורת היעד הרצויה. בדוגמה זו, 32 °C (32°F) היא טמפרטורת היעד (3.75 ביחידת בקרת הטמפרטורה). הפעל את שני המאווררים והחל שלושה עד ארבעה תרסיסים של 70% אתנול (בקבוק תרסיס פלסטיק סטנדרטי) על הגב התחתון של החולדה. קפל פרוות בעלי חיים בעת ריסוס עבור אינדוקציה קירור מהר יותר.הערה: אתנול משמש כפתרון מועדף על פני מים כי יש לו קצב מהיר יותר של אידוי ולכן התוצאה אינדוקציה היפותרמיה מהירה יותר. יש להקפיד לא להרוות יתר על המידה את הפרווה, שכן זה יכול לתרום overshooting טמפרטורת היעד.הערה: המאווררים יאיצו את אידוי האתנול ואת תהליך הקירור. אפשר מרווחים קצרים בין יישומי אתנול תוך שמירה מקרוב על הטמפרטורה רקטלית של החולדה. הפסק כל יישום נוסף של אתנול ברגע שהטמפרטורה רקטלית מגיעה בתוך 1 °C (50°) של טמפרטורת היעד. כבה את שני המאווררים לאחר שהטמפרטורה הגיעה בתוך 0.5 מעלות צלזיוס מטמפרטורת היעד (33 °C (33 °F) במקרה זה).הערה: כיבוי מאווררים לפני הגעת טמפרטורת היעד מסייע במניעת תרסיס יתר של החולדה מעבר לטמפרטורה הנדרשת. אפשר לטמפרטורה לרדת ל 32 °C (5 °F). אם מתרחשת תרסיס יתר, השתמש במנורת חום בעלי חיים כדי לחמם קלות את החיה בחזרה למטרה. סיוע של אוהד אחד עשוי לשמש כדי למנוע התחממות מחדש של חבטה חוזרת. לאחר טמפרטורת היעד הוא הגיע והתייצב, להמשיך לפקח על הטמפרטורה. הטמפרטורה בדרך כלל תישאר יציבה מאוד למשך שארית תקופת ההיפותרמיה ללא צורך בריסוס, שימוש במאווררים או שימוש במנורת חום. כדי לחמם מחדש את החיה בסוף ההיפותרמיה, להתאים את טמפרטורת מחצלת החום בחזרה ל 37 °C (6 על יחידת בקרת הטמפרטורה המשמשת בדוגמה זו) ולאפשר לחיה thermoregulate על פני תקופה של 30 דקות.הערה: הגדרות הטמפרטורה על יחידות בקרת טמפרטורה עשוי להשתנות וזה עשוי, ולכן, יהיה צורך לקבוע הגדרות עבור היפותרמיה היעד ונורמוטמיה במכשירים בודדים. 3. אינדוקציה של היפותרמיה הדרגתית בר השגה קלינית ללא קירור עור פעיל להשיג היפותרמיה על ידי הפחתת הטמפרטורה של טמפרטורת הליבה מוסדר מחצלת חום הומיאותרמי במרווחים קטנים לטמפרטורת היעד הנדרשת. בדוגמה המאוירת (איור 3B), נעשה שימוש במרווח של 1 °C כל 30 דקות. מצננים את החיה כדי למקד את הטמפרטורה על פני התקופה הרצויה (2 שעות בדוגמה המתוארת). לאחר התקררות, לשמור על היעד עבור המרווח הרצוי. בדרך כלל, אין צורך בהתערבות נוספת אם הם נשמרים על מחצלת החום ההומיאותרמית שנקבעה לטמפרטורת היעד הרצויה. אין צורך בקירור חיצוני עם פרוטוקול זה כמו הרדמה מונעת את הרגולציה הרגילה של טמפרטורת הגוף הליבה.הערה: דרישות Isoflurane לרדת עם היפותרמיה. ברוב בעלי החיים, ריכוז איזופלוראן התחלתי של 2% ניתן להפחית במרווחים של 0.1% כל 20-30 דקות עד 1.5% כדי לשמור על קצב נשימה יציב (>50 נשימות / דקה), קצב הלב ולחץ הדם, ולשמור על דיכוי תגובות רפלקס. כדי לחמם מחדש את החיה לאחר היפותרמיה, להתאים את מחצלת החום כדי לאפשר לחיה לחמם מחדש על המרווח הרצוי. בדוגמה, התחממות מחדש עם התאמה אחת ל 37 °C (6 על יחידת בקרת הטמפרטורה FHC המשמש בדוגמה) הושג על פני תקופה של 30 דקות. למחקרים ארוכי טווח הדורשים התאוששות בעלי חיים, שמור על בעלי חיים בכלוב שמונח חצי מעל מחצלת חום כדי לאפשר לחיה להתרמורמולג ולהימנע מהיפותרמיה לאחר ניתוח בשוגג. אקמול רקטלי (250 מ”ג/ק”ג) יכול להינתן להתאוששות והקלה על כאבים השחלות. זריקות מלוחות תת עוריות (2 x 1.5 מ”ל) ניתן גם לתת כדי למנוע התייבשות מהרדמה והליכים כירורגיים.