כתמים, הדמיה וניתוח של פטריות, בלוטות טעם של הרכבה מלאה, מקיפים וחיך

בלוטות הטעם הן אוספים של 50-100 תאי כינוי מיוחדים הקושרים תת-קבוצות של גירויים בעלי טעם כימי הנמצאים בחלל הפה. תאים טרנס-טרנסדוקציה טעם נחשבים בדרך כלל קיימים כמו סוגים^{1,2,3,4,5,6,7,8,9}, בתחילה מבוסס על קריטריוני מיקרוסקופיה אלקטרונים שהיו מאוחר יותר בקורלציה עם סמנים מולקולריים. תאים מסוג II מבטאים פוספוליפאז C-beta 2 (PLCβ2)² ואת קולטן חולף פוטנציאל cation ערוץ, חבר M subfamily 5¹ וכוללים תאים המתמרנים מתוק, מר, umami^1,10. תאי סוג III מבטאים אנהידריז קרבוני 4 (Car4)¹¹ וחלבון הקשור סינפטוזומלי 25⁸ ומצביעים על תאים שמגיבים בעיקר לטעם חמוץ¹¹. התאים המעבירים מליחות לא היו מתווים בבירור^12,13,14, אך עשויים לכלול תאים מסוג I, סוג II וסוג III^{15,16,17,18,19}. סביבת בלוטות הטעם מורכבת ודינמית, בהתחשב בכך שתאים ממחליפו טעם מתהפכות ברציפות לאורך כל הבגרות ומוחלפות באבות הבסיסיים^3,20,21. תאים אלה מעבירי טעם מתחברים לסיבי עצב פסאודו-חד-קוטביים מהגרעיקים הגנניים והפטרוסאליים, המעבירים מידע טעם לגזע המוח. נוירונים אלה סווגו בעיקר על סמך סוג של מידע טעם שהם נושאים^22,23 כי מידע על המורפולוגיה שלהם היה חמקמק עד לאחרונה²⁴. תאים מסוג II מתקשרים עם סיבי עצב באמצעות חלבון אפנון הסידן הומאוסטזיס 1 ערוצי יונים²⁵, ואילו תאים מסוג III מתקשרים באמצעות סינפסות קלאסיות^8,26. אפיון נוסף של תאי בלוטות הטעם – כולל טרנסולציה של שושלות סוג התא, גורמים המשפיעים על הבידול שלהם, ואת המבנים של חיבור arbors הם כל תחומי החקירה הפעילה.

מחקרי בלוטות טעם הופרעו על ידי מספר אתגרים טכניים. הרקמות ההטרוגניות והצפופות המרכיבות את הלשון מפחיתות באופן משמעותי את חמידות הנוגדנים לאימונוהיסטוכימיה^27,28,29. מכשולים אלה חייבו פרוטוקולי חלוקה המביאים לפיצול בלוטות הטעם על פני מקטעים, כך שהמדידות משוערות על סמך מקטעים מייצגים או מסתכמות על-פני מקטעים. בעבר, נעשה שימוש במקטעים דקים מייצגים כדי להעריך הן ערכי אמצעי אחסון והן את ספירת התאים של התמתן³⁰. חתך סדרתי עבה יותר מאפשר הדמיה של כל מקטעי בלוטות הטעם וסיכום המדידות מכל סעיף³¹. חיתוך קטעים עבים כאלה ובחירת רק בלוטות טעם שלם הטיות דגימה לכיוון בלוטות טעם קטנות יותר^32,33,34. הערכות פנימיות עצביות מבלוטות טעם חלקיות התבססו על ניתוחים של מספרי פיקסלים^13,35, אם כימותו בכלל^36,37,38. מדידות אלה מתעלמות לחלוטין מהמבנה ומספר הארבורים העצביים הבודדים, מכיוון שארבורים מפוצלים (ובדרך כלל מסומנים בצורה גרועה). לבסוף, למרות קילוף האפיתל מאפשר בלוטות טעם שלמות להיות מוכתם^39,40, זה גם מסיר סיבי עצב בלוטות טעם ועלול לשבש את היחסים הרגילים בין תאים. לכן, חקירות של היחסים המבניים בתוך בלוטות הטעם הוגבלו בגלל הפרעה זו הנגרמת על ידי גישות מכתימות.

אוסף מבנה שלם מבטל את הצורך בסעיפים מייצגים ומאפשר קביעת מדידות בעלות ערך מוחלט של אמצעי אחסון, ספירת תאים ומורפולוגיות מבנה⁴¹. גישה זו גם מגבירה את הדיוק, מגבילה הטיה ומפחיתה את השונות הטכנית. אלמנט אחרון זה חשוב מכיוון שבלוטות הטעם מראות שונות ביולוגית ניכרת הן בתוך^34,42 והן על פני אזורים^43,44, וניתוחים שלם של בלוטות הטעם מאפשרים להשוות מספרי תאים מוחלטים בין תנאי שליטה וניסיוניים. יתר על כן, היכולת לאסוף בלוטות טעם שלמות מאפשרת ניתוח של היחסים הפיזיים בין תאים שונים transducing וסיבי העצב הקשורים שלהם. מכיוון שתאים מעבירי טעם עשויים לתקשר זה עם זה⁴⁵ ולתקשר עם סיבי עצב⁴⁶, יחסים אלה חשובים לתפקוד תקין. לפיכך, תנאי אובדן תפקוד לא יכול להיות עקב אובדן תאים, אלא שינויים ביחסי תאים. כאן יש שיטה לאיסוף בלוטות טעם שלמות כדי להשיג את היתרונות של מדידות מוחלטות עבור ניתוחי נפח זיקוק עבור בלוטות הטעם שלהם ואת innervations שלהם, ספירות תאי טעם וצורות, ועל להקל על ניתוחים של מערכות יחסים בין תאים transducing ומורפולוגיות עצב-arbor. שתי זרימות עבודה מוצגות גם במורד הזרם של שיטת הרכבה מלאה חדשנית זו להכנת רקמות: 1) לניתוח נפח בלוטות הטעם ו- innervation מוחלט ו -2) לתיוג גנטי של תאים דלילה של נוירוני טעם (עם תת-קבוצות של תאים ממחלימים בטעם המסומנים) וניתוחים הבאים של מורפולוגיה של ארבור עצב הטעם, מספר סוגי תאי הטעם וצורותיהם, ושימוש בתוכנת ניתוח תמונה כדי לנתח את היחסים הפיזיים בין תאים transducing ואלה בין transducing תאים וארבור העצבים שלהם. יחד, זרימות עבודה אלה מספקות גישה חדשנית להכנת רקמות ולניתחים של בלוטות טעם שלמות והמורפולוגיה המלאה של הארבורים הפנימיים שלהם.