В этом исследовании представлены результаты бенчмаркинга для межлабораторного сравнения (ILC), предназначенного для проверки стандартной операционной процедуры (SOP), разработанной для коллоидных дисперсий золота (Au), характеризующихся ультрафиолетово-видимой спектроскопией (UV-Vis), среди шести партнеров из проекта H2020 ACEnano для подготовки образцов, измерения и анализа результатов.
Физико-химическая характеристика наноматериалов (НМ) часто является аналитической проблемой из-за их небольшого размера (по крайней мере, одно измерение в наноразмере, т.е. 1-100 нм), динамической природы и разнообразных свойств. В то же время надежная и воспроизводимая характеристика имеет первостепенное значение для обеспечения безопасности и качества при производстве NM-подшипниковой продукции. Существует несколько методов мониторинга и достижения надежного измерения наноразмерных свойств, одним из примеров которых является ультрафиолетово-видимая спектроскопия (UV-Vis). Это хорошо зарекомендовавший себя, простой и недорогой метод, который обеспечивает неинвазивную и быструю скрининговую оценку в режиме реального времени размера НМ, концентрации и состояния агрегации. Такие особенности делают UV-Vis идеальной методологией для оценки схем тестирования квалификации (PTS) валидированной стандартной операционной процедуры (SOP), предназначенной для оценки производительности и воспроизводимости метода характеризации. В этой статье PTS шести партнерских лабораторий из проекта H2020 ACEnano были оценены путем межлабораторного сравнения (ILC). Стандартные золотые (Au) коллоидные суспензии различных размеров (в диапазоне 5-100 нм) были охарактеризованы UV-Vis в различных учреждениях для разработки реализуемого и надежного протокола для характеристики размера НМ.
Наноматериалы (НМ) стали популярными благодаря своим уникальным свойствам в наномасштабе (от 1 до 100 нм), которые отличаются от свойств их объемных аналогов либо из-за размерных, либо квантовых эффектов (например, увеличение удельной площади поверхности по объему) наряду с различными реакционными, оптическими, тепловыми, электрическими и магнитными свойствами1,2 . Потенциальные применения НМ в обществе разнообразны и широко связаны с такими областями, как здравоохранение, пищевая промышленность, косметика, краски, покрытия и электроника3,4,5. Наночастицы золота (AuNPs) широко применяются в нанотехнологиях (например, в здравоохранении, косметике и электронных приложениях), главным образом из-за их простого изготовления, зависящих от размера оптических характеристик, потенциала функционализации поверхности и физико-химических свойств, которые могут быть пригодны для многих ключевых применений6,7.
Качество и воспроизводимость синтеза и характеристики НМ чрезвычайно важны для обеспечения качества, а также для безопасного производства продуктов на нанооснове, особенно из-за реакционной способности НМ, особенно в сложных средах, где свойства НМ, такие как распределение по размерам и морфология, могут претерпевать быстрые изменения.8,9. Доступны многочисленные методы мониторинга свойств, связанных с наноразмером. Например, сканирующая/просвечивающая электронная микроскопия (SEM/TEM) – это методы, используемые для получения оптической и композиционной информации НМ с высоким разрешением (вплоть до субнанометра); атомно-силовая микроскопия (AFM) обеспечивает наноразмерное разрешение в вертикальном (ось z) измерении; а рентгеновская дифракция (XRD) предоставляет информацию об атомной структуре НМ; все эти методы могут быть использованы только на сухих образцах (порошках)10,11. Методы, подходящие для характеристики НМ в жидких средах, включают фракционирование полевого потока (FFF), которое позволяет разделять крупные молекулы, агрегаты и частицы на основе их размера; динамическое рассеяние света (DLS); и анализ отслеживания наночастиц (NTA) — два метода, широко используемых для определения профиля распределения частиц по размерам с использованием броуновского движения, — и ультрафиолетово-видимая спектрофотометрия (UV-Vis), которая позволяет оценивать характеристики НМ, такие как размер, состояние агрегации и показатель преломления, путем простого измерения поглощения11,12,13. Хотя все эти методы позволяют характеризовать НМ, их производительность зависит от настройки прибора, различий, связанных с приборами, сложной методологии подготовки образцов и уровня знаний пользователя. Кроме того, большинство методов не позволяют в режиме реального времени контролировать размер НМ, целостность образца или дифференциацию дисперсных или агрегированных частиц.6. УФ-Вис-спектроскопия является широко используемым методом, который обеспечивает неинвазивную и быструю оценку в режиме реального времени размера НМ, концентрации и состояния агрегации. Кроме того, это простой и недорогой процесс с минимальной пробоподготовкой, что делает этот метод важным инструментом, который широко используется в многочисленных лабораториях во многих дисциплинах и на многих рынках.6,12,14. UV-Vis работает путем измерения пропускания электромагнитного излучения длиной волны от 180 до 1100 нм через жидкий образец. Спектральные диапазоны UV и VIS охватывают диапазон длин волн для ультрафиолетового (от 170 нм до 380 нм), видимого (от 380 нм до 780 нм) и ближнего инфракрасного (от 780 нм до 3300 нм)4,14. Измеряется длина волны света, проходящего через ячейку образца; интенсивность света, поступающего в образец, называется I0, а интенсивность света, возникающего на другой стороне, обозначается как I114. Закон Бира-Ламберта отражает взаимосвязь между А (поглощением) как функцией концентрации образца С, коэффициентом вымирания образца ε и двумя интенсивностями.14. Измерения поглощения могут собираться на одной длине волны или в расширенном спектральном диапазоне; измеренный коэффициент пропускания света преобразуется в измерение поглощения, следуя уравнению закона Бира-Ламберта. Стандартным уравнением для поглощения является A = ɛlc, где (A) — количество света, поглощенного образцом для данной длины волны (ɛ) — коэффициент молярного затухания (поглощение/(г/дм)3) l) – расстояние, которое свет проходит через раствор (см), и (c) – концентрация на единицу объема (г/дм)3). Поглощение рассчитывается как отношение между интенсивностью эталонного образца (I0) и неизвестный образец (I), как описано в следующем уравнении14:
Простота UV-Vis делает его идеальным методом для сравнения PTS установленного протокола измерения6,12,15. Целью ILC или PTS является проверка эффективности и воспроизводимости метода с использованием SOP15. Это, в свою очередь, обеспечивает стандартизированный подход для быстрой характеристики суспензий наночастиц для других пользователей.
Чтобы оценить мастерство, последовательность и надежность метода, представленного здесь, шесть лабораторий приняли участие в ILC в качестве членов проекта Horizon 2020 ACEnano (https://cordis.europa.eu/project/id/720952). ILC включал UV-Vis характеристику стандартных Au коллоидных дисперсий различных размеров частиц (5-100 нм). Всем участвующим лабораториям была предоставлена СОП для обеспечения одинаковой подготовки суспензий AuNP, оценки и отчетности о результатах, чтобы способствовать разработке осуществимого и надежного многоуровневого подхода к физико-химической характеристике НМ, интерпретации данных и совершенствованию протоколов наилучшей практики для промышленных и нормативных потребностей8.
Существует несколько методов характеристик свойств, связанных с наноразмером (например, аналитическое ультрацентрифугирование (AUC), сканирующая электронная микроскопия/просвечивающая электронная микроскопия (SEM/TEM) и динамическое рассеяние света (DLS)10,11). Однако этим методам не хватает простоты UV-Vis для получения первичных результатов в характеристике НМ12,13. UV-Vis является распространенным инструментом даже в не очень хорошо оборудованных лабораториях, что делает его непревзойденным инструментом для определения характеристик NMs6. При характеристике НМ важно учитывать ограничения, сильные и слабые стороны применяемых методов. В спектрометре UV-Vis световой пучок проходит через отсек образца, что приводит к значениям поглощения; в результате внешние вибрации, внешний свет, загрязняющие вещества и производительность пользователя могут помешать измерению и результатам4,12. Аналогичным образом, при построении калибровочной кривой для определения размера неизвестного образца важно регистрировать все измерения, необходимые для построения калибровки, поскольку отсутствующие факторы могут способствовать различиям между измерениями и пользователями.
Например, высокая вариация общего среднего значения Absmax неизвестного образца может быть связана с различиями между лабораториями из-за зависимости между интенсивностью пучка, положением и самим прибором17,18. Кроме того, отсутствующие данные для размера 100 нм из лаборатории 5 из-за проблемы загрязнения могут также способствовать большим различиям между результатами, поскольку отсутствующие данные могли повлиять на калибровочную кривую и построенное полиномиальное уравнение, используемое для расчета размера неизвестной суспензии AuNP. Конечно, воспроизводимость между протоколами и лабораториями может быть сложной, так как многие факторы могут способствовать отсутствию последовательности в лабораторной деятельности, в результате чего исследователи иногда не могут воспроизводить результаты из других лабораторий, что может привести к замедлению научного прогресса, потере времени, денег и ресурсов19. Успешная характеристика физико-химических свойств НМ, особенно размеров, требует простого в выполнении метода всеми участвующими лабораториями, который в основном может быть решен путем систематического и концептуального воспроизведения, такого как создание СОП, обучение приборам и избежание использования неправильно идентифицированных или перекрестно загрязненных образцов15,19.
Аналогичным образом, качество и стабильность коллоидной суспензии также являются важными факторами, которые следует учитывать, поскольку изменения в их физико-химических свойствах могут привести к различным результатам. Поэтому, чтобы обеспечить их стабильность в течение более длительных периодов времени, суспензии наночастиц следует хранить в темноте при 4 °C. Аналогичным образом, в процессе транспортировки аликвоцитированные образцы следует хранить в холодном состоянии, так как длительные периоды при комнатной температуре могут привести к значительной агрегации20. Кроме того, для преодоления сбоев в характеристике НМ необходимо обеспечить доступ к исходным данным, протоколам и ключевым исследовательским материалам между сотрудничающими лабораториями, особенно при оценке квалификации, согласованности и надежности с помощью ILC15. Обеспечение ясности и доступности этих факторов является ключом к достижению успешной характеристики НМ любой лабораторией или оборудованием. Игнорирование этих аспектов может привести к отсутствию воспроизводимости, точности и вводящим в заблуждение или ошибочным результатам15. Хотя было продемонстрировано, что УФ-Вис-спектроскопия является золотым стандартом в характеристике НМ, она может быть использована во многих других областях, поскольку она позволяет количественно определять расширенный динамический диапазон растворов как в неорганических, так и в органических соединениях6,21.
Кроме того, UV-Vis можно легко комбинировать с другими инструментами для измерения большого разнообразия атрибутов, тем самым улучшая качество любого анализа22. Основываясь на этих особенностях, UV-Vis широко используется во многих областях, таких как биофармацевтическая область путем измерения спектров UV-Vis в белковых растворах с высокой концентрацией, в экологическом контроле при сравнении сходства между загрязняющими веществами и их примесями, связанными с продуктом, в режиме реального времени, в промышленных очистных сооружениях в рамках правил определения цвета и приемлемости сточных вод22, 23. Конечно, по мере развития технологий и появления более продвинутых функций и опыта в спектрофотометрии будет происходить дальнейшее расширение приложений и параметров, которые могут быть измерены с помощью этого метода22. Например, в полевых приложениях онлайн-спектрометрия UV-Vis является ценным инструментом для мониторинга многочисленных параметров в режиме реального времени и в различных типах жидкостей, что является исключительной особенностью среди онлайн-сенсорных систем22.
ILC, описанный здесь, был разработан как тест СОП, разработанной для UV-Vis среди шести участвующих лабораторий, участвующих в проекте H2020 ACEnano. Анализ результатов показал, что КМП предоставляет ценную информацию, позволяющую каждой участвующей лаборатории обеспечить техническую уверенность во внутреннем методе характеристики НМ. Сбор данных в установленном шаблоне подтвердил согласованность и более быструю интерпретацию результатов и обеспечил модель для оценки размера неизвестной выборки AuNP, которая также отображала повторяемость между результатами при включении достаточного количества точек в калибровочную кривую. Кроме того, результаты подтвердили эффективность UV-Vis для определения характеристик НМ, а также важность создания протоколов наилучшей практики. Такой подход также дает возможность реализованной процедуре способствовать разработке законодательной базы посредством воспроизводимых протоколов определения характеристик НМ, основанных на выборе методов и интерпретации данных, которые имеют отношение к регулирующим органам аккредитации и органам управления исследованиями.
The authors have nothing to disclose.
ACQ хотел бы поблагодарить Национальный совет по науке и технике (CONACyT) в Мексике за финансирование ее докторских исследований. Все авторы признают поддержку со стороны Программы Европейского Союза Horizon 2020 (H2020) в рамках грантового соглашения no 720952, проекта ACEnano (назовем NMBP-26-2016).
Absorption Ultra-Micro-cuvette, 200 µL | Hellma | 105.201-QS | |
Cary 5000 spectrophotometer (Spectrophotometer C) | Agilent | Cary 5000 | |
Gold nanoparticles 5 nm | BBI solutions | EM.GC5 | |
Gold nanoparticles 20 nm | BBI solutions | EM.GC20 | |
Gold nanoparticles 40 nm | BBI solutions | EM.GC40 | |
Gold nanoparticles 60 nm | BBI solutions | EM.GC60 | |
Gold nanoparticles 80 nm | BBI solutions | EM.GC80 | |
Gold nanoparticles 100 nm | BBI solutions | EM.GC100 | |
Agilent / HP 8453 (Spectrophotometer E) | |||
Jenway 6800 spectrophotometer (Spectrophotometer A) | Jenway | UV6800 | |
Polystyrene cuvette, 1.5 mL, micro 10 mm pathlength | Sigma | 759015 | |
Polystyrene cuvette, 3 mL (10 mm x 10 mm x 45 mm) | Sarstedt Inc | 67.742 | |
Semi-micro quartz cuvette, 1mL (1 mm x 10 mm x 45 mm) | Agilent | 6610001 | |
Ultrapure water (UPW) (18.2 MΩcm). | / | / | |
UV-1800 spectrophotometer (Spectrophotometer B) | Shimadzu | UV1800 | |
Varian Cary 50 spectrophotometer (Spectrophotometer D) | Agilent | Cary 50 |