تقدم هذه الدراسة نتائج القياس للمقارنة بين الطوابق (ILC) المصممة لاختبار إجراء التشغيل القياسي (SOP) الذي تم تطويره لتشتيت الغروانية الذهبية (Au) التي تتميز بالتنظير الطيفي المرئي للأشعة فوق البنفسجية (UV-Vis) ، بين ستة شركاء من مشروع ACEnano H2020 لإعداد العينات وقياسها وتحليل النتائج.
غالبا ما يشكل الوصف الفيزيائي الكيميائي للمواد النانوية تحديا تحليليا، نظرا لصغر حجمها (بعد واحد على الأقل في مقياس النانو، أي 1-100 نانومتر)، والطبيعة الديناميكية، والخصائص المتنوعة. وفي الوقت نفسه، فإن التوصيف الموثوق به والتكرار له أهمية قصوى لضمان السلامة والجودة في تصنيع المنتجات الحاملة للنم. هناك العديد من الطرق المتاحة لرصد وتحقيق قياس موثوق للخصائص ذات الصلة بالنانو، ومن الأمثلة على ذلك التحليل الطيفي المرئي للأشعة فوق البنفسجية (UV-Vis). هذه تقنية راسخة وبسيطة وغير مكلفة توفر تقييم فحص غير الغازية وسريعة في الوقت الحقيقي من حجم NM، والتركيز، وحالة التجميع. هذه الميزات تجعل الأشعة فوق البنفسجية فيس منهجية مثالية لتقييم مخططات اختبار الكفاءة (PTS) لإجراء التشغيل القياسي المعتمد (SOP) الذي يهدف إلى تقييم أداء طريقة التوصيف وقابليتها للاستنساخ. في هذه الورقة، تم تقييم نقاط ما بعد الصدمة لستة مختبرات شريكة من مشروع H2020 ACEnano من خلال مقارنة بين المختبرات (ILC). وتميزت تعليق الذهب القياسية (الاتحاد الافريقي) الغروانية من أحجام مختلفة (تتراوح بين 5-100 نانومتر) من قبل UV-Vis في المؤسسات المختلفة لوضع بروتوكول قابل للتنفيذ وقوية لتوصيف حجم NM.
أصبحت المواد النانوية (NMs) شائعة بسبب خصائصها الفريدة في مقياس النانو (1 إلى 100 نانومتر) ، والتي تختلف عن خصائص نظيراتها السائبة ، إما بسبب التأثيرات المتعلقة بالحجم أو الكم (على سبيل المثال ، زيادة مساحة سطح محددة من حيث الحجم) إلى جانب التفاعل المتميز والبصري والحراري والكهربائي والمغناطيسي 1،2 . التطبيقات المحتملة للNMs في المجتمع متنوعة وترتبط على نطاق واسع بمجالات مثل الرعاية الصحية وصناعة الأغذية ومستحضرات التجميل والدهانات والطلاء والإلكترونيات3،4،5. يتم تطبيق الجسيمات النانوية الذهبية (AuNPs) على نطاق واسع في تكنولوجيا النانو (على سبيل المثال ، في الرعاية الصحية ومستحضرات التجميل والتطبيقات الإلكترونية) ، ويرجع ذلك بشكل رئيسي إلى تصنيعها البسيط ، والميزات البصرية المعتمدة على الحجم ، وإمكانات التشغيل السطحي ، والخصائص الفيزيائية الكيميائية ، والتي يمكن أن تكون مناسبة للعديد من التطبيقات الرئيسية6،7.
الجودة والقابلية للاستنساخ في توليف وتوصيف NMs مهمة للغاية لضمان الجودة ، ولكن أيضا للتصنيع الآمن للمنتجات النانوية ، خاصة بسبب التفاعل مع NMs ، لا سيما في البيئات المعقدة ، حيث قد تخضع خصائص NM ، مثل توزيع الحجم والمورفولوجيا ، لتغيرات سريعة8,9. تتوفر العديد من الطرق لمراقبة الخصائص المتعلقة بالنانو. فعلى سبيل المثال، يعتبر الفحص المجهري الإلكتروني (SEM/TEM) تقنيات تستخدم للحصول على معلومات بصرية وتركيبية عالية الاستبانة (حتى نانومتر) عن ال NMs؛ يوفر المجهر القوة الذرية (AFM) دقة النانو في البعد العمودي (محور z)؛ ويوفر حيود الأشعة السينية (XRD) معلومات عن التركيب الذري للNMs؛ كل هذه الطرق يمكن استخدامها فقط على عينات جافة (مساحيق)10,11. وتشمل التقنيات المناسبة لتوصيف ال NMs في الوسائط السائلة تجزئة تدفق الحقل (FFF) ، والتي تسمح بفصل الجزيئات الكبيرة والمجاميع والجسيمات استنادا إلى حجمها ؛ تشتت الضوء الديناميكي (DLS)؛ وتحليل تتبع الجسيمات النانوية (NTA) – وهما طريقتان تستخدمان على نطاق واسع لتحديد حجم توزيع الجسيمات باستخدام الحركة البراونية – وقياس الطيف المرئي فوق البنفسجي (UV-Vis)، والذي يسمح بتقييم خصائص NM مثل الحجم وحالة التجميع ومؤشر الانكسار عن طريق قياس امتصاص بسيط11,12,13. على الرغم من أن جميع هذه التقنيات تسمح تحديد خصائص NM، فإن أدائها يعتمد على إعداد الصك، والاختلافات المتعلقة الصك، ومنهجية معقدة لإعداد العينة، ومستوى المستخدم من الخبرة. وعلاوة على ذلك، فإن معظم التقنيات لا تسمح في الوقت الحقيقي رصد حجم NM، سلامة العينة، أو التفريق بين الجسيمات المتناثرة أو المجمعة6. الأشعة فوق البنفسجية فيس الطيفية هي تقنية تستخدم على نطاق واسع التي توفر غير الغازية وسريعة في الوقت الحقيقي لتقييم حجم NM، والتركيز، وحالة التجميع. بالإضافة إلى ذلك ، فهي عملية بسيطة وغير مكلفة مع الحد الأدنى من إعداد العينة ، مما يجعل هذه التقنية أداة أساسية تستخدم على نطاق واسع في العديد من المختبرات داخل العديد من التخصصات والأسواق6,12,14. يعمل UV-Vis عن طريق قياس انتقال الإشعاع الكهرومغناطيسي لطول موجي يتراوح بين 180 و 1100 نانومتر من خلال عينة سائلة. تغطي النطاقات الطيفية للأشعة فوق البنفسجية و VIS نطاق الطول الموجي للأشعة فوق البنفسجية (170 نانومتر إلى 380 نانومتر) ، المرئية (380 نانومتر إلى 780 نانومتر) ، والأشعة تحت الحمراء القريبة (780 نانومتر إلى 3300 نانومتر)4,14. يتم قياس الطول الموجي للضوء الذي يمر عبر خلية العينة؛ ويشار إلى كثافة الضوء دخول العينة كما أنا0، و يتم تعيين شدة الضوء الناشئ على الجانب الآخر كما أنا114. يعكس قانون بير لامبرت العلاقة بين A (الامتصاص) كدالة لتركيز العينة C ومعامل انقراض العينة ε والكثافة اثنين14. ويمكن جمع قياسات الامتصاص على طول موجي واحد أو على مدى طيفي ممتد؛ يتم تحويل نقل الضوء المقاس إلى قياس الامتصاص باتباع معادلة قانون بير لامبرت. المعادلة القياسية للامتصاص هي A = ɛlc، حيث (أ) هي كمية الضوء التي تمتصها العينة لطول موجي معين (ɛ) هو معامل توهين الضرس (امتصاص/(g/dm)3) (ل) هي المسافة التي يقطعها الضوء عبر المحلول (سم)، و(ج) هي التركيز لكل وحدة حجم (g/dm3). يتم حساب الامتصاص كنسبة بين كثافة العينة المرجعية (I0) والعينة المجهولة (I)، كما هو موضح في المعادلة التالية14:
بساطة الأشعة فوق البنفسجية فيس يجعلها تقنية مثالية لمقارنة PTS من بروتوكول القياس المنشأة6،12،15. الهدف من ILC أو PTS هو التحقق من أداء واستنساخ طريقة باستخدام SOP15. وهذا بدوره يوفر نهجا موحدا لتوصيف سريع لتعليق الجسيمات النانوية للمستخدمين الآخرين.
لتقييم كفاءة واتساق وموثوقية الطريقة المعروضة هنا، شاركت ستة مختبرات في لجنة القانون الدولي كأعضاء في مشروع أفق 2020 ACEnano (https://cordis.europa.eu/project/id/720952). وشملت لجنة القانون الدولي توصيف الأشعة فوق البنفسجية فيس من التشتت الغرواني الاتحاد الافريقي القياسية من أحجام الجسيمات المختلفة (5-100 نانومتر). وقدم برنامج عمل شامل لجميع المختبرات المعنية لضمان الإعداد المطابق لتعليق تقييم النتائج وتقييمها والإبلاغ عنها للمساهمة في وضع نهج قابل للتنفيذ وقوي في التوصيف الفيزيائي الكيميائي ل NM وتفسير البيانات وتحسين بروتوكولات أفضل الممارسات للاحتياجات الصناعية والتنظيمية8.
وهناك عدة طرق متاحة لتحديد خصائص الخواص المتصلة بالنانو (مثل الطرد الفائق التحليل(AUC)، ومجهر الإلكترون المسح الضوئي/المجهر الإلكتروني (SEM/TEM)، وتشتت الضوء الديناميكي (DLS)10،11). ومع ذلك، تفتقر هذه التقنيات إلى بساطة الأشعة فوق البنفسجية فيس للحصول على النتائج الأولية في توصيف NMs12،13. الأشعة فوق البنفسجية فيس هو أداة مشتركة حتى في المختبرات غير مجهزة تجهيزا جيدا، مما يجعلها أداة لا تضاهى لوصف NMs6. عند توصيف NMs ، من المهم النظر في القيود ونقاط القوة والضعف في التقنيات التي سيتم تطبيقها. في مطياف الأشعة فوق البنفسجية-فيس، شعاع الضوء يمر عبر حجرة العينة مما أدى إلى قيم الامتصاص. ونتيجة لذلك، قد تتداخل الاهتزازات الخارجية، والضوء الخارجي، والملوثات، وأداء المستخدم مع القياس والنتائج4,12. وبالمثل، عند رسم منحنى المعايرة لتحديد حجم عينة غير معروفة، من المهم تسجيل جميع القياسات اللازمة لبناء المعايرة، حيث أن العوامل المفقودة قد تسهم في الاختلافات بين القياسات والمستخدمين.
على سبيل المثال، قد يكون الاختلاف الكبير في متوسط Absmax العام للعينة غير المعروفة مرتبطا بالاختلافات بين المختبرات بسبب الاعتماد بين كثافة الحزمة وموقعها والأداة نفسها17,18. وعلاوة على ذلك، فإن البيانات المفقودة لحجم 100 نانومتر من المختبر 5، بسبب مشكلة تلوث، قد تسهم أيضا في الاختلافات العالية بين النتائج، لأن البيانات المفقودة ربما أثرت على منحنى المعايرة والمعادلة المتعددة الحدود المرسومة المستخدمة لحساب حجم تعليق AUNP غير المعروف. ومن المؤكد أن إمكانية الاستنساخ بين البروتوكولات والمختبرات يمكن أن تكون معقدة، لأن العديد من العوامل قد تسهم في عدم الاتساق في الأنشطة المختبرية، مما يؤدي إلى عدم قدرة الباحثين في بعض الأحيان على إعادة إنتاج النتائج من مختبرات أخرى، مما قد يؤدي إلى تباطؤ التقدم العلمي، وإضاعة الوقت والمال والموارد19. ويتطلب التوصيف الناجح للخصائص الفيزيائية الكيميائية للمركبات غير الكيميائية، ولا سيما الحجم، طريقة سهلة التنفيذ من جانب جميع المختبرات المشاركة، يمكن معالجتها في الغالب باتباع تكرار منهجي ومفاهيمي، مثل إنشاء نظام تشغيلي، وتدريب على الأجهزة، وتجنب استخدام عينات غير مسماة أو متعددة التلوث(19).
وبالمثل، فإن جودة واستقرار تعليق الغروانية هي أيضا عوامل هامة للنظر، كما التغيرات في خصائصها الفيزيائية الكيميائية قد تؤدي إلى نتائج مختلفة. لذلك ، لضمان استقرارها لفترات أطول ، يجب تخزين تعليق الجسيمات النانوية في الظلام عند 4 درجات مئوية. وبالمثل، خلال عملية الشحن، يجب أن تبقى عينات aliquoted الباردة، كما فترات طويلة في درجة حرارة الغرفة قد يؤدي إلى تراكم كبير20. بالإضافة إلى ذلك، للتغلب على الإخفاقات في توصيف NM، من الضروري توفير الوصول إلى البيانات الأصلية والبروتوكولات والمواد البحثية الرئيسية بين المختبرات المتعاونة، خاصة عند تقييم الكفاءة والاتساق والموثوقية من خلال ILC15. إن توضيح هذه العوامل وإتاحتها أمر أساسي لتحقيق توصيف ناجح ل NM من قبل أي مختبر أو معدات. قد يؤدي تجاهل هذه الجوانب إلى عدم إمكانية إعادة الإنتاج والدقة والنتائج المضللة أو الخاطئة15. على الرغم من أن الأشعة فوق البنفسجية فيس الطيف ثبت أن معيار الذهب في توصيف NM، فإنه يمكن استغلالها في العديد من المجالات الأخرى لأنها تسمح بتحديد كمي لمجموعة ديناميكية موسعة من الحلول في كل من المركبات غير العضوية والعضوية6،21.
الى جانب ذلك ، يمكن بسهولة الأشعة فوق البنفسجية فيس يمكن الجمع بينها وبين أدوات أخرى لقياس مجموعة كبيرة ومتنوعة من السمات ، وبالتالي تحسين نوعية أي analysis22. واستنادا إلى هذه الميزات، يستخدم UV-Vis على نطاق واسع في العديد من المجالات مثل في مجال الأدوية الحيوية من خلال قياس أطياف UV-Vis في حلول البروتين عالية التركيز، في التحكم البيئي عند مقارنة أوجه التشابه بين الملوثات والشوائب المتعلقة بالمنتج في الوقت الحقيقي، في محطات معالجة مياه الصرف الصحي الصناعية كجزء من اللوائح لتحديد لون مياه الصرف الصحي ومستوى المقبولية22، 23- ال 23- الأرباح التي ي بالتأكيد ، مع تقدم التكنولوجيا والميزات والخبرات الأكثر تقدما تصبح متاحة في قياس الطيف ، فإن زيادة توسيع التطبيقات والمعلمات التي يمكن قياسها باستخدام هذه التقنية سيحدث22. على سبيل المثال، في التطبيقات الميدانية، يعد قياس الطيف بالأشعة فوق البنفسجية على الإنترنت أداة قيمة لرصد العديد من المعلمات في الوقت الحقيقي وفي أنواع مختلفة من السوائل، وهي ميزة استثنائية بين أنظمة الاستشعار عبر الإنترنت22.
تم تصميم ILC الموصوفة هنا كاختبار ل SOP الذي تم تطويره للأشعة فوق البنفسجية بين ستة مختبرات مشاركة تشارك في مشروع ACEnano H2020. وأظهر تحليل النتائج أن لجنة القانون الدولي توفر معلومات قيمة تتيح الثقة التقنية في طريقة داخلية لتوصيف NM من قبل كل مختبر مشارك. وأكد جمع البيانات في قالب ثابت اتساق النتائج وسرعة تفسيرها، وقدم نموذجا لتقدير حجم عينة غير معروفة من عينة من عينات الكمية غير المعروفة من الكمية، مما أظهر أيضا إمكانية التكرار بين النتائج عند إدراج نقاط كافية في منحنى المعايرة. وعلاوة على ذلك، أثبتت النتائج فعالية الأشعة فوق البنفسجية فيس لتوصيف NM وكذلك أهمية وضع بروتوكولات أفضل الممارسات. ويتيح هذا النهج كذلك فرصة للإجراء المنفذ للمساهمة في وضع إطار تشريعي من خلال بروتوكولات توصيف NM القابلة للاستنساخ القائمة على اختيار الأسلوب وتفسير البيانات ذات الصلة بجهات تنظيم الاعتماد وهيئات إدارة البحوث.
The authors have nothing to disclose.
تود ACQ أن تشكر المجلس الوطني للعلوم والتكنولوجيا (CONACyT) في المكسيك على تمويل دراسات الدكتوراه. يعترف جميع المؤلفين بالدعم المقدم من برنامج أفق الاتحاد الأوروبي 2020 (H2020) بموجب اتفاقية المنح no 720952، مشروع ACEnano (اتصل ب NMBP-26-2016).
Absorption Ultra-Micro-cuvette, 200 µL | Hellma | 105.201-QS | |
Cary 5000 spectrophotometer (Spectrophotometer C) | Agilent | Cary 5000 | |
Gold nanoparticles 5 nm | BBI solutions | EM.GC5 | |
Gold nanoparticles 20 nm | BBI solutions | EM.GC20 | |
Gold nanoparticles 40 nm | BBI solutions | EM.GC40 | |
Gold nanoparticles 60 nm | BBI solutions | EM.GC60 | |
Gold nanoparticles 80 nm | BBI solutions | EM.GC80 | |
Gold nanoparticles 100 nm | BBI solutions | EM.GC100 | |
Agilent / HP 8453 (Spectrophotometer E) | |||
Jenway 6800 spectrophotometer (Spectrophotometer A) | Jenway | UV6800 | |
Polystyrene cuvette, 1.5 mL, micro 10 mm pathlength | Sigma | 759015 | |
Polystyrene cuvette, 3 mL (10 mm x 10 mm x 45 mm) | Sarstedt Inc | 67.742 | |
Semi-micro quartz cuvette, 1mL (1 mm x 10 mm x 45 mm) | Agilent | 6610001 | |
Ultrapure water (UPW) (18.2 MΩcm). | / | / | |
UV-1800 spectrophotometer (Spectrophotometer B) | Shimadzu | UV1800 | |
Varian Cary 50 spectrophotometer (Spectrophotometer D) | Agilent | Cary 50 |