כמות מינימלית של ויטריפיקציה של חתולים לא בוגרים

הקפאה הקריוגנית הפכה לשלב מפתח של טכניקות שעתוק בסיוע (אומנויות). בבני אדם, היא מאפשרת שימור פוריות או דחייה של ההורות מסיבות רפואיות או אישיות. בבעלי חיים, יש צורך להתגבר על מרחק וזמן במקצועות מתוכננים, בעיקר בבעלי חיים חקלאיים ובחיות מחמד, או לשמר חומר גנטי של נושאים יקרי ערך בתוכניות שימור, במיוחד במינים פראיים בסכנת הכחדה. שמירת המשחק היא הבחירה הטובה ביותר כאשר אנשים להיות מתרבה לא נבחרו עדיין או על מנת למנוע בעיות אתיות הקשורות לקיפאון העובר, במיוחד ברפואה האנושית¹. הזרע קל יחסית לשמר ולתת תוצאות משביע רצון לאחר הפשרה, אבל oocytes, בשל התכונות הקונסטרוקטיביות שלהם, יכול להיות מורכב יותר לאחסן. ואכן, היחס הנמוך של פני השטח/נפח, כמו גם הנוכחות של הסונה pellucida סביב האופלמה, מגביל את התנועה של הcryoprotectants והמים על פני התא². יתר על כן, בעלי חיים ביתיים כולל felids, הם מאופיינים על ידי ציטופלסמה עשיר ליפיד, אשר נחשב להפוך אותם רגישים יותר לקריוגנית³.

רוב הפלאידים מאוימים, והחתול המקומי משמש כמודל לפיתוח פרוטוקולים לשימור גארפלמטר בזכות הזמינות של הגונדות מניתוח שגרתי. בחיות בר, הגונדות ניתן להשיג לאחר ניתוחים בחירה או (לעתים קרובות יותר) לאחר המוות, ולא בוגר (בתוספת vesicle לפוחית) מגיים ניתן לאחזר. גירוי הורמונלי שנועד לקבל בוגרת (מטאמשלב II) oocytes אינו נפוץ כמו באמנויות האדם בגלל הסוגיות המוסריות ואת התגובה הספציפית מיני לטיפולים⁴.

לכן, ההתפתחות של אסטרטגיות הקריואופרסטית התמקדה gametes בוגרים, אשר בדרך כלל ניתן לאחזר לאחר מוות בלתי צפוי או פתאומי של אנשים נדירים. מבחינה ביולוגית של השקפה, ישנם כמה הבדלים הקריוגנית של משחטים בוגרים או מבוגרים, כל אחד בעל יתרונותיה. ראשית, ה-DNA הוא מוגן יותר oocytes בוגר, אשר שלפוחית נבטי מכיל כרומוזומים מוקפת קרום גרעיני, בעוד הציר meiotic של השנייה oocytes יכול להיות פגיע יותר לקריופציעות⁵. שנית, נזק הנגרמת על ידי הצטננות השלד עשוי להשפיע על סיבוב ציר, הגוף שחול הקוטב, הגירה ברורה ו ציטוקינזה, אשר יכול להיות השפעות שונות על פי השלב ההתפתחותי oocyte, השפעה על התקדמות מיוזה או לאחר הפריה אירועים. בסופו של דבר, ואולי החשוב ביותר, בעוד oocytes בוגרת מוכנים להיות מופרית, בוגרים גמטות להסתמך על התמיכה של תאי קומולוס המקיפים לעבור התבגרות גרעינית cytoplasmic⁶, וזו הסיבה מדוע תלולית השלם מתחמי oocyte (cocs) הם cryopreserved. עם זאת, אובדן של תאים קומולוס ו/או אובדן של חיבור פונקציונלי בין תא רבייה והתאים הסומטיים שמסביב הם כנראה ההשפעה הפוגעת ביותר של הקריוגנית של cocs בלתי מפותחים.

בין טכניקות הקפאת שיריון, ויטריפיקציה הוא אחד כי ניתן להחיל בקלות רבה יותר בתנאי שדה. לעומת איטי (או שיעור מבוקר) קופא, ויטריפיקציה הוא מהיר יותר אינו דורש ציוד ספציפי, כגון מקפיא לתכנות. על מנת לספק את שלושת העקרונות הבסיסיים של ויטריפיקציה (כלומר, צמיגות גבוהה, מחובר לריכוז כימיות גבוה, כרכים קטנים וירידה בטמפרטורה מהירה), מספר מדיה ותמיכה במיוחד פותחו ובשימוש אצל חתולים עבור האוזציטים הן בוגרות והן בוגרת. החל עם קשיות פשוטה⁷, התקנים פותחו אז כדי להגיע “נפח מינימלי” המטרה. קריולופ⁸, פתח משכו קשיות (OPS)⁹, מרזבים פלסטיק (שונה קש)¹⁰ ו קריוצינוריות¹¹ כבר בשימוש, עד מכשיר יעיל יותר (כלומר, קריוטופ) היה מועסק¹¹, שיפור הישרדות ו היוסיס חידוש. קריוטופ (משלים איור 1) היא תמיכה מסחרית הפכה להיות מערכת פתוחה בחירה עבור ויטריפיקציה. פותח עבור הויטריפיקציה של האדם האוציטים ועוברים, הוא מורכב רצועת סרט קטן המצורפת בעל פלסטיק קשיח, מוגן על ידי כובע צינור פלסטיק במהלך אחסון¹². בזכות השימושיות שלה ועל הפחתת הקיצונית ויטריפיקציה volume (מעט כמו 0.1 μl), אשר גם מוביל לשיעורי קירור מהירה ביותר ומחמם, זו תמיכה ויטריפיקציה הוחל יותר ויותר במינים מספר, כולל החתול המקומי, שבו הוא שימש עם מגוון רחב של מדיה^{13,14,15,16,17}.

מטרת כתב היד הזה היא לתאר את הפרוטוקול אוסף-ויטריפיקציה-התחממות, עם שינויים קלים מן האחד שפותחה במקור עבור הנגיף האנושי, אשר מעסיקה מעבדות מתוצרת מסחרית ותמיכה מסחריים עבור אמצעי אחסון מינימלי ויטריפיקציה והוא יכול להיות בקלות להחיל בתנאי שדה עבור קריוגנית של חתולים בלתי מפותחים COCs.