Entrega de anticorpos no cérebro usando ultrassom de varredura focalizado

O ultrassom terapêutico é uma tecnologia emergente voltada para o tratamento de doenças cerebrais de forma não invasiva, em parte facilitando o acesso de agentes terapêuticos ao ^{cérebro1,2,3}. Como apenas uma pequena fração de anticorpos terapêuticos voltados para doenças cerebrais são absorvidos e retidos no ^cérebro4, o ultrassom terapêutico oferece a possibilidade de aumentar sua absorção e engajamento ^{direcionado5,6}.

Em nosso laboratório, estamos desenvolvendo abordagens terapêuticas para doenças neurodegenerativas nas quais um anticorpo em vários formatos é entregue através da barreira hematoencefálica (BBB) usando microbolhas. Para isso, o ultrassom é aplicado através do crânio no cérebro em vários pontos usando um modo de varredura que chamamos de ultrassom de varredura (SUS)⁷. A interação mecânica entre a energia do ultrassom, os microbolhas injetadas por via intravenosa e a vasculatura cerebral separa transitoriamente as junções apertadas do BBB em um determinado volume de sônica, permitindo anticorpos e outras cargas, incluindo agentes terapêuticos para efetivamente atravessar essa ^{barreira7,8,9} . Além disso, o ultrassom tem sido mostrado para facilitar a absorção de anticorpos do cérebro intersticicial em células cerebrais, como neurônios, onde o anticorpo se distribui por todo o corpo celular e até mesmo em processos neuróticos5,10.

A doença de Alzheimer é caracterizada por uma patologia amilóide-β e ^tau11, e uma série de modelos animais está disponível para dissecar mecanismos patogênicos e validar estratégias terapêuticas. Uma abordagem do SUS, pela qual o ultrassom é aplicado em um padrão sequencial em todo o cérebro, quando repetida em várias sessões de tratamento, pode reduzir a patologia da placa amiloide no cérebro de camundongos mutantes de proteína precursora amilóide-β (APP) e ativar microglia que toma o amiloide, levando à melhoria na função ^cognitiva7. A abertura do BBB com ultrassom e microbolhas também reduz a patologia tau em pR5, K3 e rTg4510 tau transgênicos camundongos5,12,13. É importante ressaltar que, enquanto a microglia remove depósitos de proteína extracelular, um dos mecanismos de liberação subjacentes às patologias intraneuronas induzidas pelo SUS é a ativação da autofagia ^neuronal12.

Aqui, delineamos um processo experimental, pelo qual anticorpos fluorescentes rotulados são preparados, e depois misturados com microbolhas à base de lipídios interna, seguidos de injeção retroorbital em camundongos anestesiados. A injeção retroorbital é uma alternativa à injeção da veia da cauda que descobrimos ser igualmente eficaz e simples de realizar repetidamente. Isso é imediatamente seguido pela aplicação do SUS no cérebro. Para determinar a absorção de anticorpos terapêuticos, os camundongos são sacrificados e o aumento da concentração de anticorpos no cérebro é então quantificado. Como proxy da mudança na homeostase cerebral, a atividade fagocítica microglial é determinada pela histologia e reconstrução volumosa 3D.

Os dados gerados sugerem que a entrega de ultrassom de anticorpos é uma abordagem potencialmente atraente para tratar doenças neurodegenerativas. O protocolo pode ser aplicado da mesma forma a outros candidatos a medicamentos, bem como a cargas modelo, como dextrans fluorescentemente rotulados de tamanhos ^definidos14.