神経筋解析のためのラット声帯の調製

ラット喉頭は、発達、老化、疾患および薬理学的薬剤^1,2,3,4,5に対する構造的および機能的な神経筋喉頭適応を調査するための確立されたモデル^である。組織学的方法の一貫性は、筋肉の準備と分析に関与する複数の複雑さだけでなく、喉頭軟骨内にカプセル化された筋肉の喉頭の大きさ、形状、および地形に関連する課題があるので、この作業ラインに不可欠です1,6,7,8,9,10,11 .ラットの本来の喉頭筋のサイズが小さいため、系統的埋め込み、凍結、および凍結切断は、一貫した正確な結果を達成するために重要です。例えば、ラットの声帯をコロナ平面で切り離すとき、4つの内在性喉頭筋の神経筋接合(NJ)は、組織深度¹¹の1.8mm未満以内に位置する。したがって、凍結切断中の喉頭筋解剖学の正確なモニタリングは、対象のセクションを正確に特定し、組織の過剰切除を防ぐことが不可欠です。ターゲット筋肉の過大な切断は、^NMJs11の数と地形の不正確な識別をもたらすか、または目標筋肉がランドマークの向きの混乱のために廃棄された場合、サンプルサイズの全体的な減少をもたらす可能性があります¹²。喉頭筋の研究とそれぞれの適応の新しいモデルが開発される中で、結果が正確で信頼性が高く、研究全体で再現可能であることを保証するためには、標準的な手術手順が不可欠です。

本稿の目的は、最適な縦断および断面分析のためのラットの声の折り目の調製を詳述することです。当研究室で定期的に使用される詳細な方法は、凍結切断中に標的筋のランドマークを同定するために記述されています。同様の方法は複数の研究室で使用されていますが、初心者の研究者によって実装された場合に信頼性と正確なレプリケーションを確実にするために、文献よりも詳細な情報が提供されています。このチュートリアルの目的は、検査室と調査の一貫性を向上させるために、ラットの声帯の免疫組織化学(IHC)評価のための標準的な方法論を提供することです。