ラットの小腸を標的とする:上腸間膜動脈への長期注入

この原稿に記載されている研究は、地元の動物倫理委員会(ローマのサクロ・クオーレ大学)によって承認され、イタリア保健省に従って行われました。 1. SMAの近位枝に挿入するためのカニューレの調製 0.93mmの大きなカニューレを必要な長さ(約30cm)に切ります。 小さなカニューレ(0.4 mm O.D、0.25 mm I.D.)を約5cmの長さに切り、大きなカニューレに1cm挿入します。 2つのカニューレをシアノクリレート接着剤で一緒に固定し、内腔の閉塞を避けます。 より大きなカニューレの自由な極度を、生理食音溶液で満たされた1 mLのシリンジに取り付けられたLuerスタブアダプタ(23 G)に接続します。 SMAの枝にカテーテルを挿入できるように、小さなカニューレの自由な先端をハサミで研ぎ澄まします。 生理液で洗い流してカニューレの熟愛を確認します。注意:カニューレの鋭い端は固定され、容器に沿って滑らないので動物の動きの間に動脈を損傷しない。 2. 手術のためのラットの準備 ケタミン/キシラジン(100/10 mg/kg)で筋肉内麻酔を行います。注:十分な麻酔深さは、足ピンチ反射の欠如または近い不在によって判断されます。 外科領域から毛皮を剃る:SMAカニューリンの枝のための腹部、およびカニューレ出口のための首の後ろ。 外科的な足のピンチ反射を使用して無菌の外科領域をきれいにしなさい。注: すべての準備は無菌技術で行う必要があります。 スクラブまたは溶液を円形運動で塗布し、続いて滅菌生理液または70%エタノールを3回加える。 動物を、4本の手足を固定して、動物を上の位置に置きます。 3. SMAの近位枝のカンヌレーション 切開前に足ピンチ反射をテストすることにより、適切な麻酔深さを確認します。 無菌の外科、耐水性のカーテンを適用する。 メスの刃で、腹膜にすべての腹部面を通して、中胃領域の正中線にまっすぐ3cmの切開で腹壁を開きます。 手術ドレープの上に開腹切開の周りに、生理液を浸したガーゼを置く。縫合糸を使用して外科的切開を開いたままにします。注:すべての綿棒および外科用器具は無菌でなければなりません。 綿棒を使用して小腸を識別し、露出します。腸間質を識別するために、その自然な性質に従ってください。腹腔内切りから腸間腸を抽出し、ガーゼの上に下向きに置きます(図1A)。 脈動を感じることによってSMAを識別する。 綿棒を使用して腸間脂肪の間を「道を作る」とSMAとその近位枝の2-3を明らかにする。 SMAの近位枝を選択して、カニュールの外科的操作を可能にするのに十分大きい。この枝を(4-0シルク縫合糸で)その起源から下流に3〜4 cm結び、後で操作するのに十分な長さの縫合糸を維持するその拡張を可能にします。 SMA のブランチの下に固定サポートを配置します。外科鉗子のハンドルはここで十分である。 小さなカニューレ(反対の四肢で大きなカニューレと連結)の端を鉗子を使用して支配的な手で保持し、縫合端をもう一方の手で引っ張って容器を緊張させ、カテーテルの侵入を容易にする(図1B)。 血管の平面から、血管の平面から血流と反対の方向に20°の角度でカニューレの先端を保持します。 先端を軽く押して動脈壁を貫通し、カニューレを挿入します。注:カヌレーションは動脈を切断せずに行われます。カテーテルの先端は容器の壁を壊し、入り口を促進する。カニューレに戻って流れる血液は正しい挿入を確認する。 SMAから原点に近い動脈枝に別の1cmのカニューレの挿入を続ける。 外科用結び目(4-0シルク)でカニューレを動脈に固定し、1 mLの無菌生理液を洗い流すか、血液サンプリングで正しく機能していることを確認します。 4. カニューレのトンネリングと輸液支援システムへの配置 動物の位置を変更する前に切開に無菌の外科用ドレープを置きます。注:後ろから腹部へのトンネルは、尖った外科器具で皮下空間に圧力をかけることで作成されます。腹部および背中の切開部に無菌の外科用ドレープを使用する必要があります。 首の後部領域の1cmの切開を行い、球状弁を収容する。 腹腔切れから頸部に置かれた弁にカニューレを通して皮下組織を通す(図2A)。カテーテルプラグでカニューレの遠位を閉じて、空気の流入を避けます。 腹腔内の小腸を交換してください。腹壁を閉じ、連続した3-0シルク縫合糸で皮膚切開を閉じます。 ステッチで首の皮膚にバルブを固定します。連続した3-0シルク縫合糸で皮膚切開を閉じます。 5. 術後管理 ボタンバルブを保護するために、ジャケットでラットをドレスアップ。注入の間に鋼鉄棒でカニューレの露出部分を保護し、弁にそれをしっかり止める(図2B)。注:手術は無菌技術で行われるため、抗生物質は示されていません。NSAIDは、疼痛制御のために術前投与する必要があります (5 mg/mL メロキシカム注射, 1 mg/kg 1 日 1 回最大 3 日間).操作後、ラットを注入時(24h)の代謝ケージで安定化させる。次に、注入系を分解するのに必要な時間のイオブルラン吸入でラットを再麻酔します。その後、12時間の明暗サイクルと食料と水への自由なアクセスと通常のケージにラットを収容することが可能です。 注入時の代謝ケージでラットを安定させる。ネズミは今目を覚まし、ケージの中で自由に動いて食べることができます。 カニューレの遠位の端数を、50 mLの無菌生理食糸溶液で満たされたエラストマーポンプ(最大100 mL体積、5.0 mL/h流量)に接続します。24時間の注入を進めます(図2C)。 最初の日に、筋肉内抗生物質(最初の24時間のエンロフロキサシン10mg /kg)を投与し、経口投与(飲用水中500mLで500mgのエンロフロキサシン100mg)に渡す。目覚め時に筋肉内で鎮痛療法を分配する (ケトプロフェン 5.0 mg/kg) 次の日に経口 (パラセタモール 200 飲料水中 mg).注:飲料水中に投与される希薄な経口療法は、耐え難い味を得る。体重測定と水分補給を監視します。 注入時間の終わりに(24時間)は、ラットからポンプ、ジャケット、スチールロッド、およびバルブを除去することによって、動物の外部注入システムを分解する。カニューレが首から出てくると閉じて切り取り、縫合糸を巻いた後に首の皮膚の下にこの四肢を残します。注:この段階では、イオブルオレアン吸入によって数分間ラットを麻酔する必要があるかもしれません。 12時間の明暗サイクルと食料と水への無料アクセスを備えた通常のケージに、ラットを個別に収容します。注:ベースラインポストオペ食品摂取量は約30g/日ベースラインの水の摂取量は約50ml/日である。平均体重は約 400 mg である必要があります。.