Culture de la petite colonie Variante de Pseudomonas aeruginosa et Quantitation de son Alginate

Les infections pulmonaires chroniques avec Pseudomonas aeruginosa sont une cause majeure de morbidité et de mortalité chez les patients atteints de fibrose kystique (FK). Pendant la petite enfance, les patients sont colonisés par de multiples agents pathogènes bactériens, y compris des isolats nonmucoïdes de P. aeruginosa^1,2. L’émergence des isolats de la petite colonie (SCV) ainsi que des isolats mucoïdes est un marqueur pour l’apparition d’infections chroniques. Les isolats SCV sont très résistants aux médicaments³ en raison de leur faible taux de croissance⁴, ce qui les rend un moyen de dissuasion sévère dans les régiments de traitement et d’autres infections chroniques⁵ par P. aeruginosa. Les travaux d’Al Ahmar et coll.⁶ ont montré un lien entre le VHC et la mucoidy lié par la biosynthèse de novo pyrimidine. La famine de pyrimidine, due aux mutations dans les gènes impliqués dans la production de pyrimidine, a eu comme conséquence le phénotype de SCV dans la souche de référence nonmucoid PAO1 et le dérivé mucoid, PAO581 (PAO1mucA25).

Même si la surproduction d’alginate est un marqueur important de la maladie pour les infections pulmonaires chroniques dans les fc, il n’est pas clair s’il existe une corrélation directe entre la quantité d’alginate et la pathologie pulmonaire, et il n’est pas clair si l’alginate peut être utilisé comme marqueur de pronostic pour le traitement⁷. La production d’alginate est principalement réglementée par deux opopons, un opperon réglementaire (algUmucABCD)^8,9 et l’opéron biosynthétique(algd opéron)^10,11. La production d’alginate est étroitement réglementée par le facteur sigma AlgU^9,12 (également connu sous le nom AlgT) et la dégradation du facteur anti-sigma MucA¹³. La capacité de surveiller la production d’alginate in situ à partir des échantillons d’écrachats des patients peut aider au développement de nouvelles options thérapeutiques.

Ici, nous décrivons une condition de croissance qui détecte la présence de VCS causée par des mutants qui ne peuvent pas synthétiser la pyrimidine de novo. La supplémentation de l’uracil et/ou de la cytosine, la base azotée du nucléotide de pyrimidine, au milieu active la voie de récupération, rétablissant ainsi la croissance normale chez les mutants. Cette méthode de croissance pour ces mutants spécifiques de SCV peut être employée comme méthode de criblage pour identifier des mutations de pyrimidine dans des échantillons patients. En outre, nous discutons deux méthodes pour la détection et la mesure de l’alginate produit et sécrété par P. aeruginosa. La première est la méthode traditionnelle^14,15,16 de dégrader le polysaccharide en utilisant une forte concentration d’acide, puis en ajoutant un indicateur colorimétrique pour quantifier la concentration dans l’échantillon. La deuxième méthode, développée en laboratoire, utilise l’Analyse immunosorbent enzymatique (ELISA) à l’aide d’un anticorps monoclonal anti-alginate (mAb) développé par QED Biosciences. La méthode ELISA s’avère plus spécifique et plus sensible que l’indice d’acide uronique et permet une utilisation plus sûre en raison de l’évitement de l’acide sulfurique très concentré. Avec la capacité de l’ELISA d’être utilisé directement sur les échantillons d’émoi du patient pour mesurer l’alginate, il peut être développé comme un outil de diagnostic de surveillance pour suivre la quantité d’alginate présente dans les poumons à différentes périodes de l’infection.