モリス水迷路を用いたアルツハイマー病マウスモデルにおける学習能力と記憶力の解析

このプロトコルは、北京中国医学大学動物倫理委員会によって承認され、中国の実験動物のケアと使用のためのすべてのガイドラインに従っていました。実験手順中に偶発的な死亡状況はなく、この研究で安楽死させる動物は必要ない。 1. 準備 30個の雄SAMP8マウスと10匹の雄SAMR1マウスを購入する(年齢:8ヶ月)。 マウスを24 ±2 °Cの温度と12時間の暗い/光サイクルで個々の換気ケージに個別に収納します。 標準的なペレットダイエット利用可能なアドリビタムでマウスに餌を与え、無菌飲料水を提供します。 実験前に5日間、すべてのマウスを環境に順応させる。 2. 動物のグループ化 ランダムに30匹のSAMP8マウスを3つのグループ(n=10/グループ):AD群、手動鍼治療(MA)群、および医学(M)群に分ける。 通常対照(N)群6として10匹のSAMR1マウスを使用する。 3. 塩酸ドネペジル錠剤の投与 ドネペジル塩酸塩錠剤(5mg/タブレット)を粉砕し、蒸留水の50 mLに溶解します。 MA治療およびMWM検査が行われる日を含む実験全体の間に1日1回経口切外行為を使用してマウスに1mg/kgの用量でステップ3.1で調製した薬を送出する。 4. 手動鍼治療の管理 MA群のマウスをマウスバッグに固定する。 使い捨ての無菌鍼針(0.25mm x 13mm)を使用し、20分間、バイホイ(GV20)とインタン(GV29)5にMAの平らないばらの方法を適用します。 MA治療とMWM試験が行われる日を含め、実験全体の間に約15分間、約180r/minの速度で90°以内に操作を双方向に旋回します。 5. MWMテスト 注:15日間連続治療後24時間で、4群のマウスをMWM試験に供する。目に見えるプラットフォームのトライアル、隠れたプラットフォームのトライアル、プローブトライアル、逆転トライアルを順番に実施します。 MWM テストの準備をします。 MWM装置と信号集録処理システムを、遮音性を維持するように設計された実験室に配置する。 MWM装置の中央に不透明な布で囲まれた円形の白いタンク(直径= 90cm、高さ=50cm)を置きます。 ビデオカメラをMWMデバイスの天井に固定し、自動追跡システムを備えたビデオレコーダーに接続してデータを収集します。 水迷路タンクを、北(N)、南(S)、東(E)、西(W)というラベルの付いた2本の相互垂直線を使用して、4つの等しい領域に均等に分割します。プール領域を概念的に同じサイズ (NE、NW、SW、および SE) の 4 つの象限に分割します。 マウスの見えない場所で、各象限の壁に異なる図形の視覚的な手掛かりを視覚的な参照として配置します (正方形、三角形、円など)。注:遠位キューは、プラットフォームを見つけるための動物のナビゲーション基準点です。したがって、テスト中に移動しないでください。研究者の位置は、潜在的な遠位の手掛かりであり、MWMに影響を与えることができます.したがって、研究者は、動物がテストを実行するのを待っている間、マウスの視界から離れるべきです。 円形タンクに水を30cmまで充填し、電気ヒーターで22±2°Cに保ちます。 約150gの粉ミルクで水を不透明にします。 可視プラットフォームのトライアルを実行します。 プラスチック製の円形プラットフォーム(直径= 9.5 cm、高さ28cm)を水面より1cm上の任意の象限にランダムに配置します。 プラットフォームに黒いフラグを付けます。 タンクの壁に面した4つの開始位置のいずれかから、水位で各マウスを穏やかに放します。マウスを水に落とさないで下します。 マウスが水中に放されるとすぐにコンピュータ追跡プログラムを有効にします。 プラットフォームを検索するために、各マウス60 sを与えます。各トライアルの最後に、各マウスをプラットフォームに置き、10~30個の場所に置きます。 コンピュータ上のマウスの水泳軌道を観察し、マウスがプラットフォームを見つけるのにかかった時間をエスケープ遅延として記録し、泳ぐ速度を分析します。 各マウスをタオルで乾かし、電気ヒーターで温めます。動物が過熱するのを防ぐために、適切な熱源を使用してください。注: 4 回の試行で 4 つの異なる開始作業領域のそれぞれで各マウスをプールに配置し、その後の試行ごとにプラットフォームを別の場所に移動します。各マウスを使用した 2 つの試行の間隔は 15 ~ 20 分です。 隠しプラットフォームのトライアル/プレース ナビゲーション テストを実行します。 SE 作業領域にフラグを付けずに同じプラットフォームを配置します。 4 つの作業領域 (NE、NW、SW、N) のそれぞれからランダムにマウスをプールに配置し、4 回の試行を行います。2 回の試行の間に 15 ~ 20 分の時間間隔を使用します。 隠されたプラットフォームを検索するために、各マウス60 sを与えます。 マウスがプラットフォームに上がった後の各試行のエスケープ遅延を記録して、後続の分析を行います。 各マウスをタオルで乾かし、電気ヒーターで温めます。注: 2~6 日から隠しプラットフォームのトライアルを実施します。マウスが 60 s でプラットフォームを見つけられない場合は、マウスを動かしてプラットフォームに上がり、各トライアルの最後に 10 ~ 30 s の時間を許可します。プラットフォームと視覚的な手掛かりを一定の位置に配置して、マウスごとに 4 回の試行/日を 5 日間連続して実行します。 プローブトライアルを実行します。注: プール内の各マウスを新しい開始位置で見つけて、マウスの空間探索能力を観察します。 プラットフォームを削除します。 プール内のタンク壁に面した各マウスを 60 s に対して 1 回見つけます。 迷路の水泳距離、水泳速度、プラットフォームのクロスオーバー番号を記録します。 各マウスをタオルで乾燥させ、試用後に暖かさを提供します。 取消トライアルを実行します。注: 8 ~11 日から取消トライアルを実行します。 プラットフォームを NW 象限の中央に配置します (SE 作業領域の代わりに)。 隠しプラットフォームの試用版のセクションで説明されているように、手順 5.3.2 −5.3.5 に従います。 6. 統計分析 統計ソフトウェア(SPSS 20.0など)を使用して統計分析を実行します。