从人类和小鼠心肌标本中分离巨噬细胞子集和细胞位细胞

巨噬细胞是心脏中最丰富的免疫细胞类型，在心脏损伤^{1、2、3、4}后产生强健的炎症和复原反应方面起着重要作用。此前，我们小组确定了从不同发育起源^5、6的鼠心中产生的两个主要巨噬细胞子集。从广义上讲，根据CCR2（C-C型化学受体2）的细胞表面表达，可以识别组织驻留心脏巨噬细胞子集的不同群体。CCR2^–巨噬细胞（细胞表面表达：CCR2^–MHCII^低和CCR2^–MHCII^高）是胚胎起源（原始和红霉素血统），能够自我更新，并代表在静息条件下占主导地位的种群。居民CCR2^–巨噬细胞具有明确的造血原源，通过从循环单核细胞招募来维持，并在静息条件下代表一个未成年人群。功能上，CCR2^–巨噬细胞产生最小的炎症，对冠状动脉发育新生儿心脏再生^5，7至关重要。相反，CCR2^–巨噬细胞在心脏侮辱后启动强健的炎症反应，并造成辅助性心肌细胞损伤、左心室的不良重塑和心力衰竭进展^8、9。

最近，我们已经表明，人类心肌还包含两个不同的巨噬细胞子集，被类似地识别为^CCR2-或CCR2=^8。基因表达和功能分析表明，人类CCR2^–和CCR2⁺巨噬细胞代表功能不同的子集，在功能上类似于CCR2^–和CCR2^–在小鼠心脏中发现的巨噬细胞。人类CCR2^–巨噬细胞表达生长因子的稳健水平，包括IGF1、PDGF、Cyr61和HB-EGF。CCR2^–巨噬细胞在促进炎症的化学素和细胞因子中富集，如IL-1b、IL-6、CCL-2、CCL-7和TNF-a。刺激的CCR2^–巨噬细胞分泌明显升高的炎症细胞因子白细胞因子-1+（IL-1+）在培养中。这些子集如何差异地促进组织修复和左心室 （LV） 在心脏损伤背景下的重塑仍然是一个积极研究的领域。

基于流细胞学对小鼠和人心脏的巨噬细胞异质性的分析需要消化心脏组织并产生单个细胞悬浮液，然后进行流式细胞测量分析或细胞分拣，以便进一步进行下游过程，如散装RNA测序/单细胞RNA测序或培养细胞进行功能化检测。纳伦多夫等人2007年¹⁰日首次报道了从鼠心中分离单个细胞悬浮的最初协议。我们的实验室已经调整和修改了协议，从人类心肌中提取巨噬细胞。使用相同的协议，但在染色和门控方案略有修改，CD45^–从人类心肌的基质细胞也可以收获。这里介绍，在文本和视频中，是一个协议，这是例行执行从人类心肌提取巨噬细胞或基质。

心脏组织标本从成人患者扩张性心肌病（DCM：特发性或家族性）或缺血性心肌病（ICM）接受左心室辅助装置（LVAD）植入或心脏移植。在开始消化程序之前，被切除的心脏或LVAD核心在血管内注入冷盐水。需要注意的是，根据疤痕或脂肪组织渗透程度确定的组织标本的”质量”可以极大地影响巨噬细胞的产量。大面积疤痕的心脏标本的细胞产量会低得多，当所需的下游分析方法需要体外细胞培养时，可能会造成严重的技术限制。