É apresentado aqui um protocolo usando um estágio temperatura-controlado do microscópio que permita que um recipiente da amostra seja montado em um microscópio vertical.
As amostras são coloc geralmente em um estágio horizontal do microscópio para a observação microscópica. No entanto, para observar a influência da gravidade em uma amostra ou no comportamento do estudo à tona, é necessário fazer o estágio do microscópio vertical. Para fazer isso, um microscópio invertido lateralmente inclinado por 90 ° foi planejado. Para observar amostras com este microscópio, os recipientes da amostra tais como placas de Petri ou as corrediças de vidro devem ser fixados ao estágio verticalmente. Um dispositivo que possa fixar recipientes da amostra no lugar em um estágio vertical do microscópio foi desenvolvido e é descrito aqui. O acessório deste dispositivo ao estágio permite a observação da dinâmica da amostra no plano vertical. A capacidade de regular a temperatura usando um aquecedor de borracha de silicone também permite a observação de comportamentos de amostra dependentes da temperatura. Além disso, os dados de temperatura são transferidos para um servidor de Internet. As configurações de temperatura e o monitoramento de logs podem ser controlados remotamente a partir de um PC ou smartphone.
A microscopia óptica é uma técnica empregada para aumentar os detalhes observáveis através da ampliação de uma amostra com lentes e luz visível. Na microscopia óptica, a luz é direcionada para uma amostra, então transmitida, refletida, ou a luz fluorescente é capturada por lentes de ampliação para observação. Vários tipos de microscópio estão disponíveis que diferem no projeto para acomodar diferentes usos e métodos de observação. Os projetos diferentes incluem um microscópio ereto, que seja estruturado para iluminar uma amostra de abaixo para a observação de acima, e um microscópio invertido, que ilumine a amostra de acima para a observação de abaixo. Os microscópios eretos são o projeto o mais comum e o mais amplamente utilizado. Microscópios invertidos são freqüentemente usados para observar as amostras que não podem permitir uma lente perto da distância de cima, tais como células cultivadas aderente à parte inferior de um recipiente. Muitos grupos de pesquisa relataram observações em uma ampla gama de campos usando microscópios invertidos1,2,3,4,5,6,7. Muitos dispositivos adicionais também foram desenvolvidos que aproveitam as características dos microscópios invertidos8,9,10,11,12,13 .
Atualmente, em todos os projetos convencionais do microscópio, o estágio do microscópio é horizontal e é conseqüentemente inadequado para a observação das amostras produzindo o movimento no plano vertical, (devido à gravidade, à flutuabilidade, ao movimento, etc.). Para fazer estas observações possíveis, o estágio do microscópio e o trajeto claro devem ser girados para vertical. O estágio vertical é exigido para montar verticalmente corrediças de vidro ou recipientes da amostra tais como pratos de Petri ao estágio. Para abordar isso, um microscópio invertido lateralmente inclinado por 90 ° já foi planejado. No entanto, a fixação de amostras com fita adesiva ou outros adesivos não produz a imobilidade de longo prazo necessária. Descrito aqui é um dispositivo que pode alcançar a estabilidade necessária. Este dispositivo permite a observação sobre o tempo do movimento da amostra no plano vertical. A montagem de um calefator de borracha do silicone igualmente fêz possível observar a influência da variação da temperatura no comportamento da amostra. Os dados de temperatura são transferidos para um servidor de Internet por Wi-Fi, e as configurações de temperatura e monitoramento de log podem ser controlados remotamente a partir de um PC ou smartphone. A nosso conhecimento, o estágio Unido a um microscópio inclinado lateralmente inclinado por 90 ° não foi relatado ainda em estudos precedentes.
O estágio do microscópio é compor de três placas de alumínio. A placa de alumínio médio é montada à placa de alumínio mais baixa que atribui ao estágio. A borracha de silicone que contem o sensor de temperatura é unida entre as placas de alumínio médias e superiores. As bandas de borracha são usadas para afixar a amostra. As garras são anexadas na esquerda e direita quatro pontos da placa de alumínio superior para fixar as bandas de borracha. O circuito de controle do regulador de temperatura recebe um sinal do sensor de temperatura incorporado na borracha de silicone e modula a energia elétrica pelo método da modulação da largura de pulso (PWM). A temperatura pode gradualmente ser aumentada a 50 ° c em incrementos de 1 ° c. Este dispositivo é útil para as aplicações em que os movimentos verticais da amostra podem ser temperatura-dependentes.
Este relatório fornece exemplos de efeitos de temperatura sobre o fenômeno flutuante de diatomáceas. Como exemplos de estudos de observação de diatomáceas, medidas de velocidade de sedimentação de aglomerados celulares, análises de movimento, estudos de estrutura Ultrafina, etc. foram relatados14,15,16,17 , 18 anos de , 19 anos de , 20 anos de , 21 anos de , 22 anos de , a gravidade 23. The específica dos diatomáceas que flutuam na água com organismos fotossintética é ligeiramente mais elevada do que aquela da água, assim que tendem a afundar-se; Entretanto, levantarão se mesmo a convecção ligeira está ocorrendo. Para estudar este fenômeno, uma corrediça de vidro é afixada verticalmente a um estágio do microscópio, e os efeitos da temperatura crescente no movimento vertical do diatomáceas são observados.
A análise da trajetória de células de diatomáceas móveis é uma abordagem útil para avaliar a motilidade da diatomácea. Entretanto, quando um microscópio invertido normal observar amostras horizontalmente, não é apropriado para observações da influência da gravidade ou do movimento de flutuação na direção vertical. Desenvolvido e descrito aqui é um estágio de microscópio vertical com controle de temperatura e anexado a um microscópio invertido, que foi girado por 90 °. Este estágio do microscópio …
The authors have nothing to disclose.
Os autores não têm agradecimentos.
AC adapter 12V2A | Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd. | AD-D120P200 | Tokyo, Japan |
ADS1015 Substrate | Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd. | adafruit PRODUCT ID: 1083 | Tokyo, Japan |
Alminium Plate (Back Side Plate) | Inoval Co., Ltd. | W 150mm×L 200㎜×T 1.5mm | Gifu, Japan |
Alminium Plate (Forefront Plate) | Inoval Co., Ltd. | W 150mm×L 200㎜×T 2mm | Gifu, Japan |
Alminium Plate (Middle Lower Plate) | Inoval Co., Ltd. | W 150mm×L 200㎜×T 4mm | Gifu, Japan |
Alminium Plate (Middle Upper Plate) | Inoval Co., Ltd. | W 150mm×L 200㎜×T 5mm | Gifu, Japan |
Aluminum Pedestal (Lower Plate) | Inoval Co., Ltd. | D 100mm×T 3mm (30Φ) | Gifu, Japan |
Aluminum Pedestal (Upper Plate) | Inoval Co., Ltd. | D 100mm×T 3mm (30Φ) | Gifu, Japan |
Bold Modified Basal Freshwater Nutrient Solution | Sigma-Aldrich Co. LLC | B5282-500ML | St. Louis, USA |
Controller Case | Marutsu Elec Co., Ltd. | pff-13-3-9 | Tokyo, Japan |
CPU | Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd. | ESP-WROOM-02D | Tokyo, Japan |
Inverted microscope | Olympus Corporation | CKX 53 | Tokyo, Japan |
Low temperature hardening epoxy resin adhesive | ThreeBond Co., Ltd. | TB2086M | Tokyo, Japan |
Multi-turn semi-fixed volume Vertical type 500 Ω | Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd. | 3296W-1-501LF | Tokyo, Japan |
OLED module | Akihabara Inc. | M096P4W | Tokyo, Japan |
Pressed Cork (For supporting electrode ) | Tera Co., Ltd. | W 42mm×L 30㎜ | Ishikawa, Japan |
Pressed Cork (Lower Disk) | Tera Co., Ltd. | D 100mm×T 0.5mm (20Φ) | Ishikawa, Japan |
Pressed Cork (Upper Disk) | Tera Co., Ltd. | D 100mm×T 2.5mm (20Φ) | Ishikawa, Japan |
Rotary encoder with switch with 2 color LED | Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd. | P-05772 | Tokyo, Japan |
Silicone rubber heater | Three High Co., Ltd. | D 100mm×T 2.5mm (20Φ) | Kanagawa, Japan |
Substrate | Seeed Technology Co., Ltd. | mh5.0 | Shenzhen, China |
Temperature sensor | Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd. | NXFT15XH103FA2B050 | Tokyo, Japan |
Three-terminal DC / DC regulator 3.3 V | Marutsu Elec Co., Ltd. | BR301 | Tokyo, Japan |
Universal Flexible Arm | Banggood Technology Co., Ltd. | YP-003-2 | Hong Kong, China |
USB cable USB-A – MicroUSB | Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd. | USB CABLE A-MICROB | Tokyo, Japan |
Video Canera | Sony Corporation | HDR-CX590 | Tokyo, Japan |