Summary

باستخدام المحفزات البصرية تلوح في الأفق لتقييم الماوس الرؤية

Published: June 13, 2019
doi:

Summary

لفحص الرؤية الماوس ، أجرينا اختبار تلوح في الأفق. وضعت الفئران في ساحة كبيره مع شاشه علي السقف. المحفز البصري الذي يلوح في الأفق اثار باستمرار التجميد أو ردود الفعل الطيران في الفئران.

Abstract

النظام البصري في الجهاز العصبي المركزي يعالج الإشارات البصرية المختلفة. علي الرغم من ان الهيكل العام قد تميزت من شبكيه العين من خلال نواه ركبي الجانبية إلى القشرة البصرية ، والنظام هو معقد. وأجريت دراسات خلوية وجزيئيه لتوضيح أليات التي تقوم عليها المعالجة البصرية ، التالي ، أليات الامراض. وقد تسهم هذه الدراسات في تطوير النظم البصرية الاصطناعية. للتحقق من صحة نتائج هذه الدراسات ، من الضروري اختبار الرؤية السلوكية. هنا ، ونحن نظهر ان تجربه التحفيز تلوح في الأفق هو اختبار الرؤية الماوس يمكن الاعتماد عليها التي تتطلب الاعداد بسيطه نسبيا. وقد أجريت التجربة التي تلوح في الأفق في الضميمه كبيره مع ملجا في زاوية واحده وشاشه الكمبيوتر الموجودة علي السقف. كاميرا CCD المتمركزة بجانب شاشه الكمبيوتر خدمت لمراقبه سلوك الماوس. تم وضع الماوس في الضميمه لمده 10 دقائق ويسمح للتكيف مع واستكشاف المناطق المحيطة بها. وبعد ذلك ، توقعت الشاشة حافزا يلوح في الأفق للبرنامج 10 مرات. استجاب الفاره إلى المحفزات اما عن طريق التجميد أو عن طريق الفرار إلى مكان الاختباء. تم تسجيل سلوك الماوس قبل وبعد المحفزات تلوح في الأفق ، وتم تحليل الفيديو باستخدام برنامج تتبع الحركة. تغيرت سرعه حركه الماوس بشكل كبير بعد المحفزات تلوح في الأفق. وعلي النقيض من ذلك ، لم يلاحظ اي رد فعل في الفئران العمياء. تظهر نتائجنا ان التجربة البسيطة التي تلوح في الأفق هي اختبار موثوق به لرؤية الماوس.

Introduction

يبدا النظام البصري في شبكيه العين ، حيث يتم التقاط الإشارات المرئية بواسطة المستقبلات الضوئية ، وتوجيهها إلى الخلايا ثنائيه القطب (2 العصبية النظامالثاني) ، وأخيرا تمريرها إلى الخلايا العقديه (3 الخلية العصبية من النظام الثالث). الشبكية 2nd-و 3 الخلايا العصبية الترتيب الثالث ويعتقد ان تشكل مسارات العصبية المتعددة التي تنقل جوانب معينه من الإشارات البصرية مثل اللون, حركه, أو شكل. يتم نقل هذه الميزات البصرية المتنوعة إلى نواه ركبي الجانبية والقشرة البصرية. وعلي النقيض من ذلك ، ترسل الإشارات البصرية المؤدية إلى حركه العين إلى الكلية العليا. علي الطراز الكلاسيكي ، تم التعرف علي مسارين من الطرق القشرية: المسارات الاحاديه الخلية والخلوية. هذه المسارات ترميز الأجسام المتحركة والثابتة ، علي التوالي ، ووجودها يجسد المفهوم الأساسي للمعالجة المتوازية1،2،3،4،5، 6– في الاونه الاخيره ، أكثر من 15 نوعا من الخلايا ثنائيه القطب7 ،8،9،10،11 والخلايا عقده12،13،14 ،تم الإبلاغ عن15،16 في شبكيه العين من العديد من الأنواع ، بما في ذلك شبكيه العين الرئيسية. وتتميز هذه الخلايا ليس فقط من الجوانب المورفولوجية ، ولكن أيضا عن طريق التعبير عن علامات مميزه والجينات8،10،17،18، مما يوحي بان ميزات مختلفه من تتم معالجه الإشارات المرئية بالتوازي ، وهي أكثر تعقيدا مما كان متوقعا في الأصل.

وقد ساهمت التقنيات الخلوية والجزيئية في فهمنا للمعالجة البصرية واليات الامراض المحتملة التي قد تنشا عن المعالجة البصرية الشاذة. وقد يسهم هذا الفهم في تنميه العينين الاصطناعيتين. علي الرغم من ان الفحوصات والتحاليل الخلوية توفر معرفه متعمقة علي المستوي الخلوي ، فان الجمع بين التجارب السلوكية والتجارب الخلوية سيزيد من فهمنا الحالي للعمليات البصرية الدقيقة. علي سبيل المثال ، وجدت يوشيدا وآخرون19 ان الخلايا العصبية النشوية هي الخلية الرئيسية للكشف عن الحركة في شبكيه العين الماوس. بعد التجارب الخلوية ، قاموا بالتجربة السلوكية لإظهار ان الفئران المتحولة التي كانت الخلايا العصبية التي كانت مختلة لم تستجب للكائنات المتحركة ، التالي تاكيد الخلوية التحقيقات. الاضافه إلى ذلك ، أجريت بيرسون وآخرون20 زرع المستقبلات الضوئية في شبكيه العين الماوس لاستعاده الرؤية في الفئران المريضة. انها أجريت ليس فقط التجارب الخلوية ، ولكن أيضا قياس سلوك الماوس من خلال استخدام التسجيلات استجابه بصريات والمهام المياه المتاهة التالي السماح بيرسون وآخرون للتحقق من ان المستقبلات الضوئية المزروعة الرؤية المستعادة في المكفوفين سابقا الفئران. معا ، والتجارب السلوكية هي أدوات قويه لتقييم الرؤية الماوس.

تتوفر طرق متعددة لقياس رؤية الماوس. هذه الأساليب لها مزايا وقيود. في الجسم المجري يقدم المعلومات حول ما إذا كانت شبكيه العين الماوس ، وخاصه المستقبلات الضوئية وعلي الخلايا ثنائيه القطب ، تستجيب بشكل مناسب للمؤثرات الخفيفة. ويمكن اختبارها اما تحت الاسكتلندي أو ظروف التصوير الضوئي21,22. ومع ذلك ، العرق يتطلب التخدير ، والتي قد تؤثر علي قياس المخرجات23. رد الفعل المنعكس (OKR) أو الاستجابة البصرية (OMR) هو طريقه قويه لتقييم حساسية التباين والدقة المكانية ، سواء المكونات الوظيفية لرؤية الماوس. ومع ذلك ، OKR يتطلب عمليه جراحيه لإرفاق جهاز تثبيت إلى الجمجمة الماوس24. يتطلب ريال عماني لا الجراحة ولا الماوس التدريب. ومع ذلك ، فانه يتطلب التدريب للسماح لمجرب بشكل ذاتي الكشف عن حركات راس الماوس خفيه استجابه لصريف المتحركة في طبل البصرية 25،26. تلميذ يقيس ضوء منعكس انقباض التلميذ استجابه للمؤثرات الخفيفة ، والتي لا تتطلب التخدير والمعارض الموضوعية والردود القوية 19. علي الرغم من ان منعكس التلميذ يحاكي استجابه ضوء الشبكية في الجسم المجري ، يتم التوسط في المنعكس بشكل أساسي من قبل خلايا العقدة الشبكية الحساسة للضوء (ipRGCs) 27. لان iprgcs تمثل اقليه صغيره من rgcs ولا تعمل كخلايا العصابات التقليدية التي تشكل الصورة ، وهذا القياس لا يوفر المعلومات المتعلقة بغالبيه الخلايا عقده.

تجربه الضوء التي تلوح في الأفق لم تكن تعتبر في السابق اختبارا رئيسيا لقياس رؤية الماوس. ومع ذلك ، بل هو أيضا اختبار رؤية قويه وموثوق بها عبر الأنواع المختلفة ، مثل الماوس28،29، الزرد30، الجراد31،32، والإنسان33،34، 35والاهم من ذلك ، فان التجربة التي تلوح في الأفق هي واحده فقط من عدد قليل من الطرق لاختبار مسار تشكيل الصورة-انها ليست مسارا منعكسا-نظرا لان البصرية والنظم الرشيقة في الجهاز العصبي المركزي تشارك في هذه الدائرة36، 37,38. انشانا نظام التحفيز البصري تلوح في الأفق ، وأظهرت قدرته علي استخلاص كشف الحركة في الماوس ، والتي نستخدمها كوكيل لتقييم الذكاء من النظام البصري الماوس.

Protocol

وأجريت جميع التجارب والرعاية الحيوانية وفقا للبروتوكول الذي وافقت عليه اللجان المؤسسية للعناية بالماشية واستخدامها في جامعه وأين ستيت (البروتوكول رقم 17-11-0399). 1-التحضير للتجربة بناء الضميمه مفتوحة مستطيله الغطاء لمنزل الماوس اثناء عرض المحفزات البصرية تلوح في الأفق. …

Representative Results

تم وضع الماوس مع عيون صحية في الضميمه ويسمح للتاقلم لمده 10 دقيقه. تم الحفاظ علي الساحة مع جهاز العرض علي السقف تحت ظروف ضوء قصر النظر (7 × 105 الفوتونات/μm2/s). خلال فتره التاقلم ، استكشف الفار الفضاء ووجد القبه المعتمة كملجا. عندما انتقل الماوس بعيدا عن الملجا ، بدا التقاط الفيديو ، ?…

Discussion

مع نظام المحفزات البصرية تلوح في الأفق ، والاغلبيه (97 ٪) من الفئران العين صحية أظهرت استجابه الطيران. ولم يظهر أحد الفئران ال 29 استجابه واضحة للرحلة. ومع ذلك ، مشي الماوس نحو القبه وبقيت بالقرب منه حتى تلوح في الأفق اختفت ، مشيرا إلى ان الماوس كان علي الأقل حذرا عندما وقعت المحفزات تلوح في ال…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

وقد تم دعم هذا العمل من قبل المعاهد القومية للصحة R01 EY028915 (TI) ومنح RPB.

Materials

10.1" monitor (2° display) Elecrow Elecrow 10.1 Inch Raspberry Pi 1920x1080p Resolution Display
14" Business Class Laptop 5490 Dell 84 / rcrc961481-4860836
20" x 50" Absorbant Liners Fisher Scientific AL2050 works well to protect floor of arena, could use any type of liner
21.5" monitor (1° display) Acer Acer R221Q bid 21.5-inch IPS Full HD Display
CCD Camera Lumenera Corporation Infiniyy3S-1UR excellent for behavioral studies due to high fps rate (60 fps)
Enclosure (alminum frames and PVC panels) 80/20 Inc. 4x cat.#9010, 4x cat.#9005, 1x cat.#9000, 5x cat.#65-2616 excellent, used quick build tab to find PVC, joints, and frame
Ethanol Fisher Scientific 22-032-601
Excel Spreadsheet Software Microsoft Office user friendly and widespread knowledge of Microsoft Office software
Freearm Amazon used to mount camera to the table, could use any mountable extendable arm
ImagePro Premiere 3D Media Cybernetics version 9.3 good program, could use some updating with the automated tracking feature
Matlab software (Psychotoolbox 3) MathWorks Matlab R2018b 64-bit (9.5.0.944444) excellent software to generate pattern stimuli of any conditions
SteamPix sorftware Norpix StreamPix 7 64-bit Single Camera works well, a few problems with frame dropping but good customer service
WD My Book External Hard Drive Western Digital WDBBGB0080HBK hard drive 8 TB USB 3.0 necessary if using .avi files with no compression codec due to large size of files
Wide angle lens Navitar NMV-5M23 excellent and necessary to capture entire arena

References

  1. Enroth-Cugell, C., Robson, J. G. The contrast sensitivity of retinal ganglion cells of the cat. The Journal of Physiology. 187 (3), 517-552 (1966).
  2. Boycott, B. B., Wässle, H. The morphological types of ganglion cells of the domestic cat’s retina. The Journal of Physiology. 240 (2), 397-419 (1974).
  3. Livingstone, M. S., Hubel, D. H. Segregation of form, color, movement, and depth: anatomy, physiology, and perception. Science. 240 (4853), 740-749 (1988).
  4. Livingstone, M. S., Hubel, D. H. Psychophysical evidence for separate channels for the perception of form, color, movement, and depth. The Journal of Neuroscience. 7 (11), 3416-3468 (1987).
  5. Wässle, H. Parallel processing in the mammalian retina. Nature Reviews Neuroscience. 5 (10), 747-757 (2004).
  6. Awatramani, G. B., Slaughter, M. M. Origin of transient and sustained responses in ganglion cells of the retina. The Journal of Neuroscience. 20 (18), 7087-7095 (2000).
  7. Ghosh, K. K., Bujan, S., Haverkamp, S., Feigenspan, A., Wässle, H. Types of bipolar cells in the mouse retina. The Journal of Comparative Neuroscience. 469 (1), 70-82 (2004).
  8. Wässle, H., Puller, C., Muller, F., Haverkamp, S. Cone contacts, mosaics, and territories of bipolar cells in the mouse retina. The Journal of Neuroscience. 29 (1), 106-117 (2009).
  9. Helmstaedter, M., et al. Connectomic reconstruction of the inner plexiform layer in the mouse retina. Nature. 500 (7461), 168-174 (2013).
  10. Shekhar, K., et al. Comprehensive Classification of Retinal Bipolar Neurons by Single-Cell Transcriptomics. Cell. 166 (5), 1308-1323 (2016).
  11. Wu, S. M., Gao, F., Maple, B. R. Functional architecture of synapses in the inner retina: segregation of visual signals by stratification of bipolar cell axon terminals. The Journal of Neuroscience. 20 (12), 4462-4470 (2000).
  12. Sun, W., Li, N., He, S. Large-scale morphological survey of mouse retinal ganglion cells. The Journal of Comparative Neuroscience. 451 (2), 115-126 (2002).
  13. Volgyi, B., Chheda, S., Bloomfield, S. A. Tracer coupling patterns of the ganglion cell subtypes in the mouse retina. The Journal of Comparative Neuroscience. 512 (5), 664-687 (2009).
  14. Kong, J. H., Fish, D. R., Rockhill, R. L., Masland, R. H. Diversity of ganglion cells in the mouse retina: Unsupervised morphological classification and its limits. The Journal of Comparative Neuroscience. 489 (3), 293-310 (2005).
  15. Sumbul, U., et al. A genetic and computational approach to structurally classify neuronal types. Nature Communications. 5, 3512 (2014).
  16. Baden, T., et al. The functional diversity of retinal ganglion cells in the mouse. Nature. 529 (7586), 345-350 (2016).
  17. Lindstrom, S. H., Ryan, D. G., Shi, J., DeVries, S. H. Kainate receptor subunit diversity underlying response diversity in retinal Off bipolar cells. The Journal of Physiology. 592, 1457-1477 (2014).
  18. Euler, T., Haverkamp, S., Schubert, T., Baden, T. Retinal bipolar cells: elementary building blocks of vision. Nature Reviews Neuroscience. 15 (8), 507-519 (2014).
  19. Yoshida, K., et al. A key role of starburst amacrine cells in originating retinal directional selectivity and optokinetic eye movement. Neuron. 30 (3), 771-780 (2001).
  20. Pearson, R. A., et al. Restoration of vision after transplantation of photoreceptors. Nature. 485 (7396), 99-103 (2012).
  21. Saszik, S. M., Robson, J. G., Frishman, L. J. The scotopic threshold response of the dark-adapted electroretinogram of the mouse. The Journal of Physiology. 543, 899-916 (2002).
  22. Reuter, J. H., Sanyal, S. Development and degeneration of retina in rds mutant mice: the electroretinogram. Neuroscience Letters. 48 (2), 231-237 (1984).
  23. Woodward, W. R., et al. Isoflurane is an effective alternative to ketamine/xylazine/acepromazine as an anesthetic agent for the mouse electroretinogram. Documenta Ophthalmologica. 115 (3), 187-201 (2007).
  24. Cahill, H., Nathans, J. The optokinetic reflex as a tool for quantitative analyses of nervous system function in mice: application to genetic and drug-induced variation. PLoS One. 3 (4), 2055 (2008).
  25. Prusky, G. T., Alam, N. M., Beekman, S., Douglas, R. M. Rapid quantification of adult and developing mouse spatial vision using a virtual optomotor system. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 45 (12), 4611-4616 (2004).
  26. Lu, Q., Ganjawala, T. H., Hattar, S., Abrams, G. W., Pan, Z. H. A Robust Optomotor Assay for Assessing the Efficacy of Optogenetic Tools for Vision Restoration. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 59 (3), 1288-1294 (2018).
  27. Xue, T., et al. Melanopsin signalling in mammalian iris and retina. Nature. 479 (7371), 67-73 (2011).
  28. Yilmaz, M., Meister, M. Rapid innate defensive responses of mice to looming visual stimuli. Current Biology. 23 (20), 2011-2015 (2013).
  29. De Franceschi, G., Vivattanasarn, T., Saleem, A. B., Solomon, S. G. Vision Guides Selection of Freeze or Flight Defense Strategies in Mice. Current Biology. 26 (16), 2150-2154 (2016).
  30. Temizer, I., Donovan, J. C., Baier, H., Semmelhack, J. L. A Visual Pathway for Looming-Evoked Escape in Larval Zebrafish. Current Biology. 25 (14), 1823-1834 (2015).
  31. Guest, B. B., Gray, J. R. Responses of a looming-sensitive neuron to compound and paired object approaches. Journal of Neurophysiology. 95 (3), 1428-1441 (2006).
  32. McMillan, G. A., Gray, J. R. A looming-sensitive pathway responds to changes in the trajectory of object motion. Journal of Neurophysiology. 108 (4), 1052-1068 (2012).
  33. Vagnoni, E., Lourenco, S. F., Longo, M. R. Threat modulates neural responses to looming visual stimuli. Eur The Journal of Neuroscience. 42 (5), 2190-2202 (2015).
  34. Coker-Appiah, D. S., et al. Looming animate and inanimate threats: the response of the amygdala and periaqueductal gray. Social Neuroscience. 8 (6), 621-630 (2013).
  35. Tyll, S., et al. Neural basis of multisensory looming signals. Neuroimage. 65, 13-22 (2013).
  36. Wei, P., et al. Processing of visually evoked innate fear by a non-canonical thalamic pathway. Nature Communications. 6, 6756 (2015).
  37. Shang, C., et al. Divergent midbrain circuits orchestrate escape and freezing responses to looming stimuli in mice. Nature Communications. 9 (1), 1232 (2018).
  38. Salay, L. D., Ishiko, N., Huberman, A. D. A midline thalamic circuit determines reactions to visual threat. Nature. 557 (7704), 183-189 (2018).
  39. Vale, R., Evans, D., Branco, T. A Behavioral Assay for Investigating the Role of Spatial Memory During Instinctive Defense in Mice. Journal of Visualized Experiments. (137), 56988 (2018).
  40. Tungtur, S. K., Nishimune, N., Radel, J., Nishimune, H. Mouse Behavior Tracker: An economical method for tracking behavior in home cages. Biotechniques. 63 (5), 215-220 (2017).

Play Video

Cite This Article
Koehler, C. C., Hall, L. M., Hellmer, C. B., Ichinose, T. Using Looming Visual Stimuli to Evaluate Mouse Vision. J. Vis. Exp. (148), e59766, doi:10.3791/59766 (2019).

View Video