Использование мыши молочных опухолевых клеток в in vitro Вторжение анализа в качестве меры онкогенной клеточной поведения

Анализ вторжения in vitro может быть полезным инструментом при измерении способности клетки мигрировать через мембрану с покрытием белка, по аналогии с первыми шагами в метастазах. Ключевой особенностью злокачественных раковых клеток является их способность мигрировать через и вторгаться в близлежащие ткани. Рак, который распространился или метастазы создает больше проблем лечения и имеет более низкие показатели долгосрочного выживания, в то время как локализованные опухоли легче поддаются лечению и имеют более высокие показатели долгосрочного выживания. Для метастазирования, раковые клетки должны покинуть первичную опухоль и мигрировать в кровеносную или лимфатическую систему, процесс, который требует прохождения через внеклеточной матрицы и подвальной мембраны¹. В процессе, называемом эпителиальным мезенхимальным переходом (ЭМТ), опухолевые клетки должны разорвать контакты клеток клеток, мигрировать на правую сторону и вторгаться в близлежащие кровеносные или лимфатические сосуды. Первые шаги этого метастазов каскада представляют большой интерес, поскольку эти шаги, что может сделать рак смертоноснее. Генетические и эпигенетические факторы, участвующие в ранних этапах метастазов, находятся в центре внимания большого количества исследований, но точные и надежные экспериментальные инструменты необходимы для проверки этих ранних шагов как in vivo, так и in vitro.

Инструменты для измерения изменений в миграции клеток, такие как заживление ран (царапина) анализы или рост в 3D средах, таких как мягкие анализы агара может частично решить необходимость экспериментальных методов измерения ранних шагов метастазов, но анализ для измерения вторжения более сложным, поскольку процесс происходит в организме в сложной микросреде опухоли. Для целей скрининга наркотиков или изменения генов для определения важных факторов вторжения и метастазов, система, которая может быть использована в пробирке с культивированными клетками и имитировать проблемы, с которыми сталкиваются метастатические клетки in vivo является вторжение анализ^{2, 3}. Рак молочной железы является наиболее часто диагностируется тип рака у женщин и второй ведущей причиной смерти от рака у женщин, поэтому понимание генов, ответственных за вторжение раковых клеток молочной железы и метастаз я критически важно для общественного здравоохранения. Кроме того, мышиные клетки являются полезной моделью системы для изучения рака молочной железы и его прогрессирования.

In vitro вторжения анализ основан на Бойден палаты ассамблеи, где две камеры роста средств массовой информации разделены пористой мембраны³. Для имитации микросреды опухоли, богатый белком гель также включен в отдельные клетки в одной камере от химиоаттрактора в другой и выступать в качестве мембранного барьера подвала. Для того, чтобы мигрировать к химиоаттрактору, клетки должны сначала пройти через богатый белком барьер, а затем пройти через пористую мембрану – процесс, аналогичный тому, как метастатические клетки мигрируют через стромы. Богатый белком гель может быть изменен в зависимости от потребностей эксперимента, но обычно состоит из коллагена, или экстракта мембраны в подвале (например, Matrigel)⁴. Это сложная смесь белков, протеогликанов и факторов роста, но в основном состоит из ламининов и коллагена IV ^4,5. Клетки должны затем пройти через пористую мембрану, как правило, из поликарбоната, полиэстера или политетрафтотрилена (ПТФЕ). Мембраны могут быть приобретены на коммерческой приобрести с или без белка гель (как правило, коллагенов), или гель может быть приобретен отдельно и добавлены. Размер поры можно регулировать в зависимости от размера ячейки. В то время как размеры пор доступны от 0,4 до 8,0 мкм, только поры от 3,0 – 8,0 мкм достаточно велики для миграции клеток. Вторжение ассси был использован для определения эффективности ингибиторов на способность клеток мигрировать и вторгаться. Хотя не хватает точной микросреды опухоли, которая присутствует в vivo, in vitro вторжения анализ является полезным при скрининге многих условиях в течение короткого времени, сводя к минимуму потребность в животных моделей. Целью этих экспериментов является сравнение экспрессии генов подозреваемых онкогенов и определить влияние на поведение раковых клеток и агрессивность болезни с помощью анализа вторжения in vitro и других тестов. В целом, анализ вторжения обеспечивает последовательные, количественные и быстрые результаты для определения метастатического потенциала, а также является относительно недорогим, простым и адаптируемым методом.