Шутвард движение CFDA трассировщика загружается в нижней раковина ткани арабидопсис

Многие флуоресцентные индикаторы с диапазоном спектральных свойств, таких как 5 (6)-carboxyfluorescein (CF)¹, 8-гидроксипирен-1, 3, 6-трисульфонная кислота², ЛЮЦИФЕР желтый CH (lych)³, esculin и cter⁴, были разработаны и применяется в растениях для контроля за симпластическим движением и активностью флоема. Как правило, симпластмассовый краситель загружается в разрез в целевой ткани и последовательное рассеивание репортера в другие части растения продемонстрирует межклеточные связи. Хотя механизм поглощения красителя до конца не изучен, широко признается принцип, лежащий в основе движения CF внутри живых клеток. Эстер форме CF (CF диацетат, CFDA) не флуоресцентные, но мембраны проницаемой. Это свойство позволяет быстрое распространение мембраны красителя в клетки. Оказавшись внутри живые клетки, внутриклеточные эстеразы удалить ацетат групп на 3 ‘ и 6 ‘ положение CFDA, выпуская флуоресцентные и мембранно-непроницаемой CF (рис. 1, в качестве альтернативы относятся Райт et al.²); CF может после этого двинуть через плазмодесмами к другим частям заводов.

Хорошо налаженная процедура с CFDA является то, что он может быть загружен в исходный лист и используется для мониторинга флоэмы потокового и флоэмы разгрузки в тканях раковины многих видов, например, как разгрузка CF в корень арабидопсис ⁵, флоэмы разгрузки во время картофельной бугорка⁶, флоэмы разгрузки в никотиана раковина листья⁷, и так далее. Подобными погрузочные подходы, другие исследования приняли этот краситель, чтобы продемонстрировать симпластическую связь между хозяином и паразитами^8,9, или выявить симбиотические отношения^10,11.

Еще один способ сделать использование этого красителя является загрузка его в конкретных ячеек или одной ячейки путем микроинъекции, чтобы определить его структуру распределения. Такие сложные методы значительно облегчили наше более глубокое понимание плазмодесмами-опосредованной межклеточной коммуникации, особенно в развитии концепции симпластикового домена^12,13. Например, Микроинъекция КФДА в котиледонские клетки арабидопсис привела к появлению красителя-сцепления в гипокотилном эпидермисе, но неувязке в базовых клетках или в корневых эпидермисе, поэтому гипокотиловый эпидермис образует симпластический домен¹⁴. Похожие домены, такие как устьиные клетки охраны¹⁵, сито элемент-компаньон клетки¹⁶, корень волосяных клеток¹⁴ и корень крышка^17,18 были определены методом микроинъекций. Самое удивительное, некоторые домены позволяют трассирующими молекулам двигаться в определенном направлении. Возьмите трихоме домена, например, микроинъекции флуоресцентного зонда в поддерживающей эпидермального ячейки приводит к потоку трассирующими в домен трихома, однако, обратная инъекция не держит true¹⁹. В недавнем отчете также обнаружены аналогичные ситуации в симпластичных доменам²⁰– и эмбрионов седума. Таким образом, все вышеперечисленные случаи подразумевают, что замена загрузочных участков может привести к новым озарению в симпластическую коммуникацию. Наш предыдущий эксперимент, направленный на рассечения маршрута от корня до стрелять мобильных глушителей определили Роман симпластический домен, или HEJ (гипокотиля-эпиотилового соединения) зона, которая была дополнительно проверена через корневой нагрузки (неканонической мойки нагрузки) CFDA эксперимент²¹. Здесь, мы далее разрабатывать корень-к-стрелять CF движение с помощью простого метода и восстановить потенциальную симпластмассовый домен путем переноса загрузки сайтов. Кроме того, эта процедура может быть адаптирована для различения генетических фонов, которые изменили корень-к-стрелять междугородной.