تقييم الاستجابة المناعية الخلوية ذبابة الفاكهة، melanogaster المورفولوجية، استخدام "في فيفو البلعمه بالانزيم"
Summary
ويصف هذا البروتوكول مقايسة المجراة في البلعمه في الكبار melanogaster المورفولوجية التحديد الكمي للاعتراف بلعمية وتخليصها من العدوى الميكروبية.
Abstract
ويوفر الحصانة الفطرية في جميع الحيوانات، دفاع فورية وقوية ضد طائفة واسعة من العوامل الممرضة. الاستجابات المناعية خلطيه وخلوية الفروع الرئيسية للحصانة الفطرية، والعديد من العوامل التي تنظم هذه الاستجابات هي تقحم المصانة بين اللافقاريات والثدييات. البلعمه، عنصرا رئيسيا من الحصانة الفطرية الخلوية، قام بها خلايا الدم متخصصة في الجهاز المناعي. ذبابة الفاكهة، melanogaster المورفولوجية، برز كنموذج وراثية قوية للتحقيق في الآليات الجزيئية والتأثيرات الفسيولوجية البلعمه في الحيوانات كلها. هنا علينا أن نظهر مقايسة المستندة إلى حقن المجراة في البلعمه قياس امتصاص الجسيمات وتدمير خلايا الدم المورفولوجية ، هيموسيتيس. الإجراء الذي يسمح للباحثين التحكم بدقة في تركيز الجسيمات والجرعة، مما يجعل من الممكن الحصول على نتائج عالية استنساخه في فترة قصيرة من الزمن. التجربة الكمية، من السهل القيام به، ويمكن تطبيقها على الشاشة لعوامل المضيف هذا التأثير الممرض الاعتراف وامتصاص وإزالة الألغام.
Introduction
دفاعات المناعة الفطرية تشكل الخط الأول للدفاع ضد الجراثيم المسببة للأمراض. يمكن تقسيم هذه الردود وظيفيا إلى الحصانة الفطرية خلطيه وخلوية، وكلاهما وساطة من مستقبلات الاعتراف بنمط ترميز الخط (برس) أن الشعور بأنماط الجزيئية المرتبطة بالعوامل الممرضة (بامبس)1. هي حفظت العديد من مسارات الإشارات والآليات المستجيب للحصانة الفطرية في الثدييات واللافقريات، مثل ديدان أسطوانية، ايليجانس كاينورهابديتيس، وذبابة الفاكهة، المورفولوجية ميلانوجاستير2. ذبابة الفاكهة برز كنظام قوي لدراسة الدفاع المضيف ضد الكائنات الدقيقة المعدية3. المورفولوجية وراثيا أصعب، بسهولة وبتكلفة زهيدة تربيتها في المختبرات، وله وقت قصير جيل. وعلاوة على ذلك، يسلك ذبابة الفاكهة ذات كفاءة عالية الدفاعات ضد مجموعة ميكروبات، مما يتيح النظر في الحصانة المضيف ضد مسببات الأمراض الفيروسية والبكتيرية والفطرية، أو الطفيلية.
تاريخيا استخدمت للذيفان المورفولوجية شاشات الجينية إلى الأمام، على نطاق الجينوم الحمض النووي الريبي بوساطة التدخل ([رني]) فحص خطوط الخلية الحشرات، والقائمة من قبل سلالات ذبابة متحولة دراسة الحصانة الفطرية – مما يؤدي إلى تحديد وتوصيف لعدة مسارات مأمن خلطيه تقحم المصانة4،5،6،،من78. الاستجابة المناعية الفطرية خلطيه، يمكن القول، الأفضل وصف الدفاع المناعي في ذباب الفاكهة. في أعقاب الإصابة، يقود استجابة خلطيه لإنتاج وإطلاق النظمية للميكروبات الببتيد جزيئات (أمبير) في hemolymph، الدم يعادل في الحشرات. الامبير تنتجها حصيلة عالية المصانة و Imd إشارات المسارات. المسار حصيلة مثلى للثدييات TLR/إيل-1R مستقبلات الإشارات، ومسار Imd مثلى لإشارات الثدييات عامل نخر الورم-ألفا. في حصيلة المورفولوجية، مما يشير إلى فعل إيجابية البكتيريا والفطريات فيرو “س المورفولوجية”s6،،من910 وإشارات Imd هو الناجم عن بكتيريا سلبية الغرام11 ،12.
الحصانة الخلوية، تتألف من التغليف، وشكل الميلانين والبلعمه من مسببات الأمراض الغازية، التي تقوم بها خلايا الدم متخصصة تسمى هيموسيتيس13. وهناك ثلاث فئات من هيموسيتيس في ذبابة الفاكهة: كريستال الخلايا ولاميلوسيتيس وبلاسماتوسيتيس13. كريستال الخلايا، التي تشكل 5% هيموسيتيس المتداولة في يرقات، الإفراج عن الإنزيمات بروفينولوكسيداسي (قتراح) مما يؤدي إلى شكل الميلانين المسببة للأمراض والأنسجة المضيف في مواقع الجرح. لاميلوسيتيس، التي لا توجد عادة في أجنة صحية أو يرقات، هي ملتصقة الخلايا التي تغلف الكائنات الخارجية. فعل هذه الخلايا عند بوبارييشن، أو عندما يتم إيداع باراسيتيزينج دبور البيض في اليرقات. بلاسماتوسيتيس متجولة، التي تشكل 95% من تعميم هيموسيتيس في اليرقات وجميع هيموسيتيس المتبقية في البالغين، تلعب دوراً في الأنسجة يعيد البناء خلال التنمية، ولا سيما، بمثابة الخلية الرئيسية المستجيب المورفولوجية الخلوية الحصانة.
البلعمه خط فورية وحاسمة للدفاع المناعة الفطرية؛ الميكروبات التي خرق الحاجز الظهارية المضيفة هي غارقة بسرعة والقضاء على خلايا الدم متجولة (لإجراء استعراض شامل لبيولوجيا الخلايا البلعمه راجع مرجع 14). تبدأ هذه العملية عند التعرف على نمط germline ترميز مستقبلات (PRRs) على هيموسيتيس الاعتراف بالعوامل الممرضة المرتبطة أنماط الجزيئية (بامبس) للميكروبات. مرة ملتزمة بأهدافها، بدء برس الشلالات مما يشير إلى أن يؤدي إلى تشكيل بسيودوبودس من خلال إعادة عرض cytoskeleton أكتين. بسيودوبودس تحيط الميكروبات، والتي اجتاحت في وقت لاحق واستيعابه في عضية وليدة، يبلوع. وتدمر الميكروبات كما يبلوع يخضع لعملية نضج يبلوع عند يبلوع يتم الاتجار بهن نحو الداخلية من هيموسيتي وأسيديفيس من خلال سلسلة من التفاعلات مع ليسوسوميس. في المختبر والخلية كانت دراسات علم الأحياء في خلايا الثدييات الأولية دور فعال في تحديد ووصف العوامل التي تنظم البلعمه، مثل مستقبلات Fc-غاما الثدييات ومستقبلات C3b15،16. ومع ذلك، محدودة القدرة على تنفيذ الدراسات المجراة في الشاشات على نطاق واسع أو في نظم الثدييات.
نقدم هنا مقايسة المجراة في البلعمه في ذباب الفاكهة الكبار، الذي يرتكز على إجراء لأول مرة بمختبر ديفيد شنايدر في 200017. مختبر شنايدر أظهرت أن phagocytose لاطئة هيموسيتيس متفاوت المسافات على طول السفينة الظهرية البطن سهولة الخرز البوليسترين والبكتيريا. تصور البلعمه، يتم حقن الذباب بالجسيمات المسمى فلوريسسينتلي (مثل كولاي المسمى مع fluorescein isothiocyanate (كولاي-فيتك))، المحتضنة لمدة 30 دقيقة لإتاحة الوقت هيموسيتيس بابتلاع الجزيئات، ومن ثم حقن تريبان الأزرق، الذي يروي fluorescence الجسيمات لا فاجوسيتوسيد أثناء فترة الحضانة. يتم تصوير الأوعية الظهرية يطير ثم استخدام مجهر فلوري مقلوب. استخدام تجربة بسيطة نسبيا، أثبتت أن هيموسيتيس phagocytose البكتيريا ويمكن أن تحول دون مطاط الخرز، أن البلعمه البكتيريا بالحقن قبل الذباب هذه الورقة المنوي، مع الخرز مطاط، وأن الذباب دون الخلوية وخلطيه الاستجابات المناعية عرضه حتى كولاي. ويستند التحليل الوارد في هذا التقرير عمل المختبر شنايدر كمياً المجراة في البلعمه بقياس كثافة الجسيمات التي عصفت بالسفينة الظهرية المرتبطة هيموسيتيس الأسفار.
على غرار النهج المتبع في أنظمة الثدييات، الصفات المورفولوجية المستخدمة في البداية على نطاق الجينوم شاشات [رني] في المختبر لتحديد الجينات المطلوبة للاستجابة المناعية الخلوية18،19،20 ،21،،من2223. بيد أن وضع مقايسة البلعمه المجراة في الكبار مكن تجارب متابعة سيضطلع سهولة في الحيوانات كلها، مما يسمح للباحثين للتحقق من البيولوجية دور العوامل التي تم تحديدها في الدراسات في المختبر. وهذا هو الحال مع مستقبلات transmembrane أكلي لحوم البشر، التي حددت لأول مرة كمستقبل بكتيرية في شاشة [رني] استخدام S2 الخلايا24 وثم بعد ذلك سيظهر للتوسط في الإشريكيّة القولونية (كولاي)، البرازية فايكاليس، و المكوّرات العنقودية الذهبية (S. aureus) البلعمه في البالغين25.
لدينا مختبر يعمل الإنزيم البلعمه في المجراة في الشاشات الوراثية إلى الأمام والدراسات على نطاق الجينوم الرابطة (باستخدام لوحة إشارة المورفولوجية الوراثية (دجرب)) لتحديد الجينات الجديدة التي تنظم البلعمه في هيموسيتيس الكبار. أدت هذه الدراسات إلى الوصف مستقبلات بجرب-SC1A وبجرب-سا26، حويصلة داخل الخلايا الاتجار بالبروتين Rab1427غلوتامات الناقل بوليفيموس28، والجيش الملكي النيبالي ملزمة البروتين فوكس-129.
ونحن نتوقع أن الشاشات المستقبلية تتضمن البلعمه المجراة في يمكن أن يؤدي إلى تحديد الجينات الإضافية التي تعتبر مهمة للاستجابة المناعية الخلوية في المورفولوجية. شاشات باستخدام خطوط فطري متسلسلة تماما، مثل دجرب أو المورفولوجية الاصطناعية السكان الموارد (دسبر)، يمكن تحديد المتغيرات الطبيعية التي تؤثر على التنمية البلعمه أو هيموسيتي. وعلاوة على ذلك، يمكن اعتماد في الأنواع الأخرى من المورفولوجية التقنية أو المستخدمة في الشاشة الجديدة موارد المجتمع، مثل جمع 250 الأنواع المورفولوجية الاحتفاظ بالأنواع المورفولوجية الوطنية مخزون مركز (ندسك ) في كورنيل. هذه التجارب يمكن القيام بها باستخدام المسمى فلوريسسينتلي البكتيرية أو الفطرية الجدار بيوبارتيكليس متوفرة تجارياً أو يمكن أن يؤديها باستخدام أي عدد من الأنواع البكتيرية أو الفطرية – المقدمة أن الميكروب تعرب عن علامات نيون .
Protocol
Representative Results
Discussion
تستخدم الجسيمات المتاحة تجارياً، والمسمى فلوريسسينتلي لتقييم البلعمه في العام (0.2 ميكرون تعديل كاربوكسيلات الجزئي المجالات الخرز الصغير) أو البلعمه للميكروبات (المسمى فلوريسسينتلي الحرارة-أو كيميائيا قتل البكتيريا أو الخميرة). تقييم نضج يبلوع، حدد الباحثون الجسيمات المسمى بصبغة…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
يشكر المؤلفون غونزاليس بيت الدكتور والدكتور أبراجيتا جارج للدعم في إجراء التجارب المجراة في البلعمه. منحة البذور NSF الخفة مقدما والخفة المعاهد الوطنية للصحة T32 التدريب المنح والخلية و “البيولوجيا الجزيئية” (CMB) والتفاعلات المضيف الممرض (HPI)، بتمويل هذا العمل.
Materials
| 0.2μm Red Fluorescent Carboxylate Modified FluoSpheres | Invitrogen | F8810 | Fluorescently-labeled latex beads to test general phagocytic capacity of phagocytes. (~580/~605 nm) Inject a 1:20 dilution in PBS with 5% dye. |
| 5430-10 PicoNozzle Kit | World Precision Instruments | 5430-10 | Holder for 1.0mm pipette |
| E. coli (K-12 Strain) BioParticles, Alexa Fluor 488 conjugate | Invitrogen | E13231 | Killed E. coli labeled with Alexa Fluor 488. Use to test phagocyte recogntion and uptake of gram-negative bacteria. (~495/~519 nm) |
| E. coli (K-12 Strain) BioParticles, Alexa Fluor 594 conjugate | Invitrogen | E23370 | Killed E. coli labeled with Alexa Fluor 594. Use to test phagocyte recogntion and uptake of gram-negative bacteria. (~590/~617 nm) |
| E. coli (K-12 Strain) BioParticles, Fluorescein conjugate | Invitrogen | E2861 | Killed E. coli labeled with FITC (Fluorescein). Use to test phagocyte recogntion and uptake of gram-negative bacteria. (~494/~518 nm) |
| E. coli (K-12 Strain) BioParticles, Texas Red conjugate | Invitrogen | E2863 | Killed E. coli labeled with Texas Red. Use to test phagocyte recogntion and uptake of gram-negative bacteria. (~595/~615 nm) |
| E. coli (K-12 Strain) BioParticles, Texas Red conjugate | Invitrogen | E2863 | Killed E. coli labeled with Texas Red. Use to test phagocyte recogntion and uptake of gram-negative bacteria. (~595/~615 nm) |
| Needle Pipette Puller | David Kopf Instruments | Model 725 | |
| pHrodo Red E. coli BioParticles Conjugate for Phagocytosis | Invitrogen | P35361 | Killed E. coli labeled with pHrodo Red. Use to test phagocyte reconition, uptake, and phagosome maturation of gram-negative bacteria. (~560/~585 nm). No need to quench with Trypan Blue. |
| pHrodo Red S. aureus BioParticles Conjugate for Phagocytosis | Invitrogen | A10010 | Killed S. aureus labeled with pHrodo Red. Use to test phagocyte reconition, uptake, and phagosome maturation of gram-positve bacteria. (~560/~585 nm). No need to quench with Trypan Blue. |
| Pneumatic PicoPump PV820 | World Precision Instruments | SYS-PV820 | The World Precision Instruments Pneumatic PicoPump PV820 uses differential pressures to hold liquid in the glass needle between injections. The user manually controls short bursts of gas pressure to expel the liquid – allowing delivery of sub-nanoliter volumes. The amount of liquid delivered depends on two main variables – the size of the glass needle opening and the amount of time injection pressure is applied. set the instrument to 100 ms “TIMED” mode. |
| S. aureus (Wood Strain without protein A) BioParticles, Alexa Fluor 488 conjugate | Invitrogen | S23371 | Killed S. aureus labeled with Alexa Fluor 488. Use to test phagocyte recogntion and uptake of gram-positive bacteria. (~495/~519 nm) |
| S. aureus (Wood Strain without protein A) BioParticles, Alexa Fluor 594 conjugate | Invitrogen | S23372 | Killed S. aureus labeled with Alexa Fluor 594. Use to test phagocyte recogntion and uptake of gram-positive bacteria. (~590/~617 nm) |
| S. aureus (Wood Strain without protein A) BioParticles, Fluorescein conjugate | Invitrogen | E2851 | Killed S. aureus labeled with FITC (Fluorescein). Use to test phagocyte recogntion and uptake of gram-positive bacteria. (~494/~518 nm) |
| Thin Wall Glass Capillaries | World Precision Instruments | TW100F-3 | Needles for injection. OD = 1.0 mm |
| Trypan Blue Solution (0.4%) | Sigma | T8154 | Used to quench extracellular fluorescence of Fluorescein, Alexa Fluor, or Texas Red labeled particles. |
| ZEISS SteREO Microscope (Discovery.V8) | Zeiss | SteREO Discovery.V8 | Inverted fluorescence microscope for imaging flies. Use a digital camera (example: AxioCam HC camera) and the accompanying software (example: AxioVision 4.7 software) to take pictures. |
| Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) BioParticles, Alexa Fluor 488 conjugate | Invitrogen | Z23373 | Killed labeled with Alexa Fluor 488. Use to test phagocyte recogntion and uptake of yeast. (~495/~519 nm) |
| Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) BioParticles, Alexa Fluor 594 conjugate | Invitrogen | Z23374 | Killed labeled with Alexa Fluor 594. Use to test phagocyte recogntion and uptake of yeast. (~590/~617 nm) |
| Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) BioParticles, Fluorescein conjugate | Invitrogen | Z2841 | Killed labeled with FITC (Fluorescein). Use to test phagocyte recogntion and uptake of yeast. (~494/~518 nm) |
| Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) BioParticles, Texas Red | Invitrogen | Z2843 | Killed labeled with Texas Red. Use to test phagocyte recogntion and uptake of yeast. (~595/~615 nm) |
References
- Akira, S., Uematsu, S., Takeuchi, O. Pathogen recognition and innate immunity. Cell. 124 (4), 783-801 (2006).
- Kim, D. Studying host-pathogen interactions and innate immunity in Caenorhabditis elegans. Disease Models & Mechanisms. 1 (4-5), 205-208 (2008).
- Lemaitre, B., Hoffmann, J. The host defense of Drosophila melanogaster. Annual Review Immunology. 25, 697-743 (2007).
- Wu, L. P., Choe, K. M., Lu, Y., Anderson, K. V. Drosophila Immunity: Genes on the Third Chromosome Required for the Response to Bacterial Infection. Genetics. 159 (1), 189-199 (2001).
- De Gregorio, E., Spellman, P. T., Tzou, P., Rubin, G. M., Lemaitre, B. The Toll and Imd pathways are the major regulators of the immune response in Drosophila. EMBO Journal. 21 (11), 2568-2579 (2002).
- Michel, T., Reichhart, J. M., Hoffmann, J. A., Royet, J. Drosophila Toll is activated by Gram-positive bacteria through a circulating peptidoglycan recognition protein. Nature. 414 (6865), 756-759 (2001).
- Choe, K. M., Werner, T., Stoven, S., Hultmark, D., Anderson, K. V. Requirement for a peptidoglycan recognition protein (PGRP) in Relish activation and antibacterial immune responses in Drosophila. Science. 296 (5566), 359-362 (2002).
- Wu, J., Randle, K. E., Wu, L. P. ird1 is a Vps15 homologue important for antibacterial immune responses in Drosophila. Cellular Microbiology. 9 (4), 1073-1085 (2007).
- Lemaitre, B., Nicolas, E., Michaut, L., Reichhart, J. M., Hoffmann, J. A. The dorsoventral regulatory gene cassette spatzle/Toll/cactus controls the potent antifungal response in Drosophila adults. Cell. 86 (6), 973-983 (1996).
- Zambon, R. A., Nandakumar, M., Vakharia, V. N., Wu, L. P. The Toll pathway is important for an antiviral response in Drosophila. Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 102 (20), 7257-7262 (2005).
- Lemaitre, B., et al. A recessive mutation, immune deficiency (imd), defines two distinct control pathways in the Drosophila host defense. Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 92 (21), 9465-9469 (1995).
- Leulier, F., Rodriguez, A., Khush, R. S., Abrams, J. M., Lemaitre, B. The Drosophila caspase Dredd is required to resist gram-negative bacterial infection. EMBO Reports. 1 (4), 353-358 (2000).
- Meister, M., Lagueux, M. Drosophilablood cells. Cellular Microbiology. 5 (9), 573-580 (2003).
- Flannagan, R. S., Jaumouille, V., Grinstein, S. The cell biology of phagocytosis. Annual Review Pathology. 7, 61-98 (2012).
- Anderson, R. A., Sando, G. N. Cloning and expression of cDNA encoding human lysosomal acid lipase/cholesteryl ester hydrolase. Similarities to gastric and lingual lipases. Journal of Biological Chemistry. 266 (33), 22479-22484 (1991).
- Ross, G. D., Reed, W., Dalzell, J. G., Becker, S. E., Hogg, N. Macrophage cytoskeleton association with CR3 and CR4 regulates receptor mobility and phagocytosis of iC3b-opsonized erythrocytes. Journal of Leukocyte Biology. 51 (2), 109-117 (1992).
- Elrod-Erickson, M., Mishra, S., Schneider, D. S. Interactions between the cellular and humoral immune responses in Drosophila. Current Biology. 10, 781-784 (2000).
- Ramet, M., Pearson, A. M., Manfruelli, P., Li, X., Koziel, H., Gobel, V. Drosophila Scavenger Receptor CI Is a Pattern Recognition Receptor for Bacteria. Immunity. 15 (6), 1027-1038 (2001).
- Ramet, M., Manfruelli, P., Pearson, A. M., Mathey-Prevot, B., Ezekowitz, R. A. Functional genomic analysis of phagocytosis and identification of a Drosophila receptor for E. coli. Nature. 416 (6881), 644-648 (2002).
- Philips, J. A., Rubin, E. J., Perrimon, N. Drosophila RNAi screen reveals CD36 family member required for mycobacterial infection. Science. 309, 1251-1253 (2005).
- Agaisse, H., Burrack, L. S., Philips, J. A., Rubin, E. J., Perrimon, N., Higgins, D. E. Genome-wide RNAi screen for host factors required for intracellular bacterial infection. Science. 309 (5738), 1248-1251 (2005).
- Stuart, L. M., et al. Response to Staphylococcus aureus requires CD36-mediated phagocytosis triggered by the COOH-terminal cytoplasmic domain. Journal of Cell Biology. 170 (3), 477-485 (2005).
- Stroschein-Stevenson, S. L., Foley, E., O’Farrell, P. H., Johnson, A. D. Identification of Drosophila gene products required for phagocytosis of Candida albicans. PLoS Biology. 4 (1), e4 (2006).
- Kocks, C., et al. Eater, a transmembrane protein mediating phagocytosis of bacterial pathogens in Drosophila. Cell. 123 (2), 335-346 (2005).
- Nehme, N. T., et al. Relative roles of the cellular and humoral responses in the Drosophila host defense against three gram-positive bacterial infections. PLoS One. 6 (3), e14743 (2011).
- Garver, L. S., Wu, J., Wu, L. P. The peptidoglycan recognition protein PGRP-SC1a is essential for Toll signaling and phagocytosis of Staphylococcus aureus in Drosophila. Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 103 (3), 660-665 (2006).
- Garg, A., Wu, L. P. Drosophila Rab14 mediates phagocytosis in the immune response to Staphylococcus aureus. Cellular Microbiology. 16 (2), 296-310 (2014).
- Gonzalez, E. A., Garg, A., Tang, J., Nazario-Toole, A. E., Wu, L. P. A glutamate-dependent redox system in blood cells is integral for phagocytosis in Drosophila melanogaster. Current Biology. 23 (22), 2319-2324 (2013).
- Nazario-Toole, A. E., Robalino, J., Okrah, K., Corrada-Bravo, H., Mount, S. M., Wu, L. P. The Splicing Factor RNA-Binding Fox Protein 1 Mediates the Cellular Immune Response in Drosophila melanogaster. Journal of Immunology (Baltimore, Md: 1950). 201 (4), 1154-1164 (2018).
- Guille, M. . Molecular Methods in Developmental Biology: Xenopus and Zebrafish. , (1999).
- Koundakjian, E. J., Cowan, D. M., Hardy, R. W., Becker, A. H. The Zuker collection: a resource for the analysis of autosomal gene function in Drosophila melanogaster. Genetics. 167 (1), 203-206 (2004).
- Horn, L., Leips, J., Starz-Gaiano, M. Phagocytic ability declines with age in adult Drosophila hemocytes. Aging Cell. 13 (4), 719-728 (2014).
- Brennan, C. A., Delaney, J. R., Schneider, D. S., Anderson, K. V. Psidin is required in Drosophila blood cells for both phagocytic degradation and immune activation of the fat body. Current Biology. 17 (1), 67-72 (2007).
- Akbar, M. A., Tracy, C., Kahr, W. H., Kramer, H. The full-of-bacteria gene is required for phagosome maturation during immune defense in Drosophila. Journal of Cell Biology. 192 (3), 383-390 (2011).
