الطيفية الامتصاص الذري لقياس برك الزنك داخل خلايا الثدييات
Summary
ويشيع استخدام خطوط الخلايا الاساسيه أو القائمة المستزرعة لمعالجه المسائل البيولوجية والميكانيكية الاساسيه كنهج اولي قبل استخدام النماذج الحيوانية. يصف هذا البروتوكول كيفيه اعداد مقتطفات الخلايا الكاملة والكسور تحت الخلوية لدراسات الزنك (Zn) والعناصر النزره الأخرى مع الطيفية الامتصاص الذري.
Abstract
المعادن الانتقالية هي المغذيات الصغرى الاساسيه للكائنات الحية ولكن يمكن ان تكون سامه للخلايا بتركيزات عاليه من خلال التنافس مع المعادن الفسيولوجية في البروتينات وتوليد إجهاد الاكسده. الحالات المرضية التي تؤدي إلى استنزاف المعادن أو تراكم هي العوامل السببية لمختلف الامراض البشرية. وتشمل بعض الامثله فقر الدم ، والتهاب الجلدي المعوي ، وامراض ويلسون والمنكز. ولذلك من المهم ان تكون قادره علي قياس مستويات ونقل المعادن الانتقالية في العينات البيولوجية مع حساسية عاليه ودقه من أجل تسهيل البحوث استكشاف كيفيه مساهمه هذه العناصر في الوظائف الفسيولوجية العادية السميه. الزنك (Zn) ، علي سبيل المثال ، هو عامل مساعد في العديد من البروتينات الثدييات ، ويشارك في الاحداث الإشارات ، وهو رسول الثانوية في الخلايا. في الزائدة ، الزنك السامة ويمكن ان تمنع امتصاص المعادن الأخرى ، في حين ان في العجز ، فانه يمكن ان يؤدي إلى مجموعه متنوعة من الظروف المميتة المحتملة.
الجرافيت فرن الامتصاص الذري الطيفي (GF-العاص) يوفر طريقه حساسة للغاية وفعاله لتحديد الزنك وغيرها من تركيزات المعادن الانتقالية في العينات البيولوجية المختلفة. الانحلال الكهربي عن طريق GF-العاص ثبت قيمه المعادن عن طريق تفتيت كميات صغيره من العينات لتحليل الامتصاص الانتقائي اللاحق باستخدام الطول الموجي لأثاره عنصر الفائدة. في حدود الخطية من قانون البيره لامبرت ، وامتصاص الضوء من قبل المعدن يتناسب مباشره مع تركيز التحاليل. بالمقارنة مع الطرق الأخرى لتحديد محتوي الزنك ، GF-العاص يكتشف كل من الزنك الحرة والمعقدة في البروتينات وربما في جزيئات صغيره داخل الخلايا مع حساسية عاليه في وحدات التخزين عينه صغيره. وعلاوة علي ذلك ، فان GF-العاص هو أيضا أكثر سهوله في الوصول اليه من قياس الطيف الكتلي المقترن بشكل محفز أو الاشعه السينية المستندة إلى synchrotron. في هذا الأسلوب ، يتم وصف اعداد عينه منتظمة من مختلف خطوط الخلايا المستزرعة للتحليلات في GF-العاص. تمت مقارنه الاختلافات في هذا العنصر النزره في كل من الخلايا الكاملة والكسور تحت الخلوية من تكاثر والخلايا المتمايزة كدليل علي المبدا.
Introduction
يتم العثور علي الانتقال والمعادن الثقيلة ، مثل الزنك والنحاس والمنغنيز والحديد ، بشكل طبيعي في البيئة في كل من المواد الغذائية والملوثات. وتتطلب جميع الكائنات الحية كميات مختلفه من هذه المغذيات الصغرى ؛ ومع ذلك ، فان التعرض للمستويات العالية يضر بالكائنات الحية. الحصول علي المعادن هو أساسا من خلال النظام الغذائي ، ولكن يمكن أيضا استنشاق المعادن أو امتصاصها من خلال الجلد1،2،3،4،5. ومن المهم ملاحظه ان وجود الفلزات في جزيئات الغلاف الجوي أخذ في الازدياد وارتبط إلى حد كبير بالمخاطر الصحية. وبسبب الانشطه البشرية المنشا ، تم اكتشاف مستويات متزايدة من الفلزات الثقيلة مثل Ag ، مثل الاقراص المدمجة ، والكروم ، والزئبق ، والنيكل ، والحديد ، والرصاص في الجسيمات الجوية ، ومياه الامطار ، والتربة6،7. هذه المعادن لديها القدرة علي المنافسة مع العناصر النزره الفسيولوجية الاساسيه ، وخاصه الزنك والحديد ، وانها تحفز الآثار السامة عن طريق تنشيط الانزيمات الاساسيه للعمليات البيولوجية.
الزنك عنصر التتبع هو الاكسده محايده ويتصرف كحمض لويس في التفاعلات البيولوجية ، مما يجعلها عاملا أساسيا اللازمة للطي البروتين والنشاط الحفاز في أكثر من 10 ٪ من البروتينات الثدييات8،9، 10؛ التالي ، فمن الضروري لمختلف الوظائف الفسيولوجية8،11. ومع ذلك ، مثل العديد من العناصر النزره ، هناك توازن دقيق بين هذه المعادن التي تسهل الوظيفة الفسيولوجية الطبيعية وتسبب سميه. في الثدييات, نقص الزنك يؤدي إلى فقر الدم, تاخر النمو, قصور الغدد التناسلية, تشوات الجلد, الإسهال, ثعلبه, اضطرابات الذوق, التهاب مزمن, وضعف وظائف المناعة والجهاز العصبي11,12, 13،14،15،16،17،18. في الزائدة ، والزنك هو السامة للخلايا ويضعف امتصاص المعادن الاساسيه الأخرى مثل النحاس19،20،21.
بالاضافه إلى ذلك ، بعض المعادن مثل Cu و Fe لديها القدرة علي المشاركة في ردود الفعل الضارة. إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) عن طريق فنتر الكيمياء يمكن ان تتداخل مع الجمعية من الحديد الكبريت البروتينات العنقودية وتغيير استقلاب الدهون22،23،24. لمنع هذا الضرر ، تستخدم الخلايا محرمين ملزمه المعادن والناقلين لمنع الآثار السامة. مما لا شك فيه ، يجب ان يكون التوازن المعدني التحكم باحكام للتاكد من ان أنواع الخلايا المحددة الحفاظ علي مستويات مناسبه من المعادن. ولهذا السبب ، هناك حاجه كبيره إلى النهوض بتقنيات القياس الدقيق للمعادن النزره في العينات البيولوجية. في الكائنات الحية النامية والناضجة هناك حاجه البيولوجية التفاضلية للعناصر النزره علي المستوي الخلوي ، في مراحل النمو المختلفة ، وفي الظروف العادية والمرضية. لذلك ، من الضروري تحديد دقيق لمستويات الانسجه والمعادن الجهازية لفهم التوازن المعدني أسطح.
الجرافيت فرن الامتصاص الذري الطيف (GF-العاص) هو تقنيه حساسة للغاية تستخدم لحجم العينات الصغيرة ، مما يجعلها مثاليه لقياس الانتقال والمعادن الثقيلة الموجودة في العينات البيولوجية والبيئية25،26 , 27 , 28. وعلاوة علي ذلك ، نظرا لحساسية عاليه من هذه التقنية ، وقد ثبت ان تكون مناسبه لدراسة خصائصالنقل الدقيقة من Na +/k +-atpase والمعدة H +/k +-atpase باستخدام xenopus البويضات كنظام نموذجي29. في GF-العاص ، تمتص العناصر المفتتة داخل العينة طولا موجيا من الإشعاع المنبعث من مصدر ضوئي يحتوي علي معدن الفائدة ، مع الإشعاع الممتص المتناسب مع تركيز العنصر. يتم الاثاره الكترونيه العنصرية عند امتصاص الاشعه فوق البنفسجية أو المرئية في عمليه كميه فريدة لكل عنصر كيميائي. وفي عمليه الكترون واحده ، ينطوي امتصاص الفوتون علي الكترون ينتقل من مستوي طاقة اقل إلى مستوي اعلي داخل الذرة ويحدد GF-العاص كميه الفوتونات التي تمتصها العينة ، والتي تتناسب مع عدد امتصاص الإشعاع العناصر صغار في أنبوب الجرافيت.
وتعتمد الانتقائية في هذه التقنية علي البنية الكترونيه للذرات التي يكون فيها لكل عنصر خط طيفي محدد للامتصاص/الانبعاث. في حاله الزنك ، والطول الموجي الامتصاص هو 213.9 نانومتر ويمكن تمييزها بدقه من المعادن الأخرى. عموما ، يمكن استخدام GF-العاص لقياس الزنك مع حدود كافيه من الكشف (اللد) وحساسية عاليه والانتقائية25. تتكامل التغيرات في الطول الموجي الممتص وتقدم كقمم لامتصاص الطاقة عند أطوال موجية محدده ومعزولة. وعاده ما يتم احتساب تركيز الزنك في عينه معينه من منحني قياسي من التركيزات المعروفة وفقا لقانون البيره لامبرت ، الذي الامتصاص يتناسب مباشره مع تركيز الزنك في العينة. ومع ذلك ، فان تطبيق معادله بير لامبرت علي تحليلات GF-العاص يعرض أيضا بعض التعقيدات. فعلي سبيل المثال ، يمكن ان تؤثر التغيرات في الانحلال و/أو التركيزات غير المتجانسة للعينات علي القياسات المعدنية.
الانحلال المعدنية المطلوبة لتحليل عنصري التتبع GF يتكون من ثلاث خطوات أساسيه. الخطوة الاولي هي ديسولفيشن ، حيث تبخرت المذيبات السائلة. ترك المركبات الجافة بعد الفرن يصل إلى درجه حرارة حوالي 100 درجه مئوية. ثم ، يتم تبخير المركبات عن طريق تسخينها من 800 إلى 1,400 درجه مئوية (اعتمادا علي العنصر الذي سيتم تحليله) وتصبح غازا. وأخيرا ، يتم صغار المركبات في الدولة الغازية مع درجات الحرارة التي تتراوح من 1,500 إلى 2,500 درجه مئوية. وكما سبقت مناقشته أعلاه ، فان زيادة تركيزات معدن الفائدة ستجعل الزيادات النسبية في الامتصاص التي يكتشفها الفرنك الغين-العاص ، ومع ذلك فان الفرن يقلل من النطاق الديناميكي للتحليل ، الذي هو نطاق العمل من التركيزات التي يمكن ان تكون يحددها الصك. التالي ، فان هذه التقنية تتطلب تركيزات منخفضه وتحديد دقيق للنطاق الديناميكي للأسلوب عن طريق تحديد اللد والحد من الخطية (LOL) من قانون بير لامبرت. ال اللد هو الحد الأدنى من الكمية المطلوبة ليتم الكشف عن ماده ، وتعريف ثلاثه اضعاف الانحراف المعياري لل Zn في المصفوفة. لول هو الحد الأقصى للتركيز التي يمكن الكشف عنها باستخدام القانون بير لامبرت.
في هذا العمل ، ونحن وصف طريقه قياسيه لتحليل مستويات الزنك في مقتطفات الخلية بأكملها ، سيتوبلازمي والكسور النووية ، وفي تكاثر والتفريق بين الخلايا المستزرعة (الشكل 1). قمنا بتكييف العزلة السريعة لبروتوكول النوى للانظمه الخلوية المختلفة لمنع فقدان المعادن اثناء اعداد العينة. وكانت النماذج الخلوية المستخدمة الاساسيه التي تستمد من الخلايا الأقمار الصناعية الماوس ، وخلايا الورم الاروميه العصبية murine (N2A أو Neuro2A) ، murine 3T3 L1 شحميه ، وهو الإنسان غير tumoriغينيك الثدي خط خليه الظهاريه (MCF10A) ، والكلي البوليسية. MDCK) الخلايا. وقد أنشئت هذه الخلايا من السلالات المختلفة وهي نماذج جيده للتحقيق في النسب اختلافات محدده من مستويات المعادن في المختبر.
وتشكل الأقاليم الاساسيه المشتقة من خلايا الفئران الفضائية نموذجا مناسبا في المختبر للتحقيق في تمايز العضلات الهيكلية. انتشار هذه الخلايا سريع عندما مثقف تحت ظروف المصل عاليه. ثم يتم الحث علي التمايز في السلالة العضلية بسبب انخفاض حالات المصل30. الورم الارومي العصبي murine (N2A) أنشئت خط الخلية المستمدة من قمة الماوس العصبية. هذه الخلايا الحالية العصبية والأميبا الخلايا الجذعية المورفولوجية. علي التحفيز التمايز ، والخلايا N2A تقديم العديد من الخصائص للخلايا العصبية ، مثل الشعيرات العصبية. وتستخدم خلايا N2A للتحقيق في مرض الزهايمر ، ونمو العصب العصبي ، والسمية العصبية31،32،33. و 3T3-L1 murine ما قبل الخلايا الشحمية التي أنشئت خط الخلية يستخدم عاده للتحقيق في التغيرات الايضيه والفسيولوجية المرتبطة اديبوجينيسيس. هذه الخلايا تقديم الليفية مثل المورفولوجية, ولكن مره واحده حفزت للتمييز, انها تقدم التنشيط الانزيميه المرتبطة تخليق الدهون وتراكم الدهون الثلاثية. ويمكن ملاحظه ذلك كتغييرات مورفولوجية لإنتاج قطرات الدهون السيتوبلازمية34،35. MCF10A هو خط الخلايا الظهاريه غير الورم الثديية المستمدة من أمراه قبل سن إلياس مع مرض فيبروكيستيك الثدي36. وقد استخدم علي نطاق واسع للدراسات البيوكيميائية والجزيئية والخلوية المتعلقة بالسرطانات الثديية مثل الانتشار ، وهجره الخلايا ، والغزو. وقد تم استخدام خط الخلايا الظهاريه الكلي البوليسية Madin-داربي (MDCK) علي نطاق واسع للتحقيق في الخصائص والاحداث الجزيئية المرتبطة بإنشاء النمط الظاهري الظهاريه. عند الوصول إلى التقاء ، تصبح هذه الخلايا المستقطبة وإنشاء التصاقات خليه خلوية ، وخصائص الانسجه الظهاريه الثدييات37.
لاختبار قدره العاص لقياس مستويات الزنك في خلايا الثدييات ، حللنا الكسور الكاملة وشبه الخلوية (cytosol والنواة) من هذه الخطوط الخلوية الخمسة. وأظهرت قياسات العاص تركيزات مختلفه من الزنك في هذه الأنواع من الخلايا. وكانت التركيزات اقل في التكاثر والتفريق بين الأقاليم الاوليه (4 إلى 7 nmol/mg من البروتين) واعلي في أربعه خطوط الخلايا الراسخة (تتراوح بين 20 إلى 40 nmol/ملغ من البروتين). تم الكشف عن زيادة صغيره غير هامه في مستويات الزنك في التفريق بين الكريات الاوليه وخلايا الورم الارومي العصبي بالمقارنة مع تكاثر الخلايا. تم الكشف عن التاثير المعاكس في الخلايا الشحمية المتمايزة. ومع ذلك ، فان تكاثر خلايا 3T3-L1 اظهر تركيزات اعلي من المعدن مقارنه بالخلايا المتمايزة. الأهم من ذلك ، في هذه الخطوط الخلوية الثلاثة ، أظهرت التجزئة تحت الخلوية ان الزنك موزع بشكل مختلف في السيتوسيول والنواة وفقا لحاله الأيض لهذه الخلايا. علي سبيل المثال ، في تكاثر المقاطع العضلية ، وخلايا N2A ، و 3T3-L1 قبل الخلايا الشحمية ، يتم ترجمه غالبيه المعدن إلى النواة. عند استقراء التمايز باستخدام العلاجات الخلوية المحددة ، الزنك مترجمه إلى عصارة في هذه الأنواع الثلاثة من الخلايا. ومن المثير للاهتمام ، أظهرت كل من خطوط الخلايا الظهاريه مستويات اعلي من الزنك اثناء الانتشار مقارنه مع عند التوصل إلى التقاء ، والتي شكلت أحاديه الطبقة الضيقة المميزة. في تكاثر الخلايا الظهاريه ، كان خط الخلية الثديية MCF10A توزيع الزنك علي قدم المساواة بين عصارة ونواه ، بينما في خط الخلايا المشتقة من الكلي ، وكان معظم المعدن الموجود في النواة. في هذين النوعين من الخلايا ، عندما وصلت الخلايا إلى التقاء ، كان الزنك في الغالب التي تقع علي cytosol. وتبين هذه النتائج ان GF-العاص هو تقنيه حساسة للغاية ودقيقه لاجراء تحليل عنصري في عينات منخفضه الغلة. GF-العاص إلى جانب تجزئه تحت الخلوية ويمكن تكييفها للتحقيق في مستويات العناصر المعدنية النزره في خطوط الخلايا المختلفة والانسجه.
Protocol
Representative Results
Discussion
القياس الطيفي لامتصاص الذرية هو طريقه حساسة للغاية لتحديد كميه الزنك في العينات البيولوجية الصغيرة الحجم/الكتلة. الأمثل الموصوفة من قياس الزنك يجعل تطبيق هذه الطريقة بسيطه ويضمن الظروف التحليلية المثالية. هنا ، باستخدام GF-العاص ، حددنا تركيز الزنك في خلايا كامله ، وفي الكسور الخلوية وال?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وكان هذا العمل مدعوما بجائزه علماء التنوع في الكلية من كليه الطب بجامعه ماساتشوستس إلى T.P.. N.N.. ويدعم من قبل SEP-CONACYT ، منحه 279879. وتدعم المؤسسة الوطنية للعلوم منحه DBI 0959476. ويعرب أصحاب البلاغ عن امتنانهم للدكتور داريل ا. بوسكو لتزويده بخط الخلية N2A ولدانييل تسوسسو لدعمها التقني.
Materials
| 3-isobutyl-1-methylxanthine | Sigma Aldrich | I5879 | |
| Acetic Acid | Sigma Aldrich | 1005706 | |
| Anti Brg1-antibody (G7) | Santa Cruz biotechnologies | sc-17796 | |
| Anti b-tubulin-antibody (BT7R) | Thermo Scientific | MA5-16308 | |
| Bradford | Biorad | 5000205 | |
| Dexamethasone | Sigma Aldrich | D4902 | |
| Dulbecco's Modified Eagle's Media (DMEM) | ThermoFischer-Gibco | 11965092 | |
| Dulbecco's Modified Eagle's Media/Nutrient Mix (DMEM/F12) | ThermoFischer-Gibco | 11320033 | |
| Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS) | ThermoFischer-Gibco | 14190144 | |
| Epidemal Growth Factor (EGF) | Sigma Aldrich | E9644 | |
| Fetal Bovine Serum (FBS) | ThermoFischer-Gibco | 16000044 | |
| Fibroblastic Growth Factor-Basic (FGF) (AA 10-155) | ThermoFischer-Gibco | PHG0024 | |
| Horse serum | ThermoFischer-Gibco | 16050122 | |
| Hydrocortisone | Sigma Aldrich | H0888 | |
| Hydrogen Peroxide (H2O2) | Sigma Aldrich | 95321 | |
| Insulin | Sigma Aldrich | 91077C | |
| Insulin-Transferrin-Selenium-A | ThermoFischer | 51300044 | |
| Nitric Acid (HNO3) | Sigma Aldrich | 438073 | |
| Nonidet P-40 (NP-40) | Thermo Scientific | 85125 | |
| OptiMEM (Reduced Serum Media) | ThermoFischer-Gibco | 31985070 | |
| Penicillin-Streptomycin | ThermoFischer-Gibco | 15140148 | |
| PureCol (Collagen) | Advanced BioMatrix | 5005 | |
| Retionic Acid | Sigma Aldrich | PHR1187 | |
| Troglitazone | Sigma Aldrich | 648469-M | |
| Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red | ThermoFischer-Gibco | 25200056 | |
| Zinc (Zn) Pure Single-Element Standard, 1,000 µg/mL, 2% HNO3 | Perkin Elmer | N9300168 | |
| Established Cell Lines | |||
| 3T3-L1 | American Type Culture Collection | CL-173 | |
| MCDK | American Type Culture Collection | CCL-34 | |
| MCF10A | American Type Culture Collection | CRL-10317 | |
| N2A | American Type Culture Collection | CCL-131 | |
| Equipment | |||
| Atomic Absortion spectrophotometer | PerkinElmer | Aanalyst 800 | |
| Bioruptor | Diagnode | UCD-200 |
References
- Sharma, B., Singh, S., Siddiqi, N. J. Biomedical implications of heavy metals induced imbalances in redox systems. Biomed Research International. 640754, (2014).
- Jaishankar, M., Tseten, T., Anbalagan, N., Mathew, B. B., Beeregowda, K. N. Toxicity, mechanism and health effects of some heavy metals. Interdisciplinary Toxicology. 7 (2), 60-72 (2014).
- Jan, A. T., et al. Heavy Metals and Human Health: Mechanistic Insight into Toxicity and Counter Defense System of Antioxidants. International Journal of Molecular Science. 16 (12), 29592-29630 (2015).
- Manutsewee, N., Aeungmaitrepirom, W., Varanusupakul, P., Imyim, A. Determination of Cd, Cu, and Zn in fish and mussel by AAS after ultrasound-assisted acid leaching extraction. Food Chemistry. 101 (2), 817-824 (2007).
- Pereira, C. C., de Souza, A. O., Oreste, E. Q., Vieira, M. A., Ribeiro, A. S. Evaluation of the use of a reflux system for sample preparation of processed fruit juices and subsequent determination of Cr, Cu, K, Mg, Na, Pb, and Zn by atomic spectrometry techniques. Food Chemistry. 240, 959-964 (2018).
- McComb, J. Q., Rogers, C., Han, F. X., Tchounwou, P. B. Rapid screening of heavy metals and trace elements in environmental samples using portable X-ray fluorescence spectrometer, A comparative study. Water, Air, & Soil Pollution. 225 (12), (2014).
- Borgatta, J. P., Paskavitz, A., Kim, D., Navea, J. G. Comparative evaluation of iron leach from different sources of fly ash under atmospherically relevant conditions. Environmental Chemistry. 13, 902-912 (2016).
- Dufner-Beattie, J., Langmade, S. J., Wang, F., Eide, D., Andrews, G. K. Structure, function, and regulation of a subfamily of mouse zinc transporter genes. Journal of Biological Chemistry. 278 (50), 50142-50150 (2003).
- Sekler, I., Sensi, S. L., Hershfinkel, M., Silverman, W. F. Mechanism and regulation of cellular zinc transport. Molecular Medicine. 13 (7-8), 337-343 (2007).
- Berg, J. M., Shi, Y. The galvanization of biology: a growing appreciation for the roles of zinc. Science. 271 (5252), 1081-1085 (1996).
- Kambe, T., Tsuji, T., Hashimoto, A., Itsumura, N. The Physiological, Biochemical, and Molecular Roles of Zinc Transporters in Zinc Homeostasis and Metabolism. Physiology Reviews. 95 (3), 749-784 (2015).
- Fukada, T., Kambe, T. Molecular and genetic features of zinc transporters in physiology and pathogenesis. Metallomics. 3 (7), 662-674 (2011).
- Prasad, A. S., Halsted, J. A., Nadimi, M. Syndrome of iron deficiency anemia, hepatosplenomegaly, hypogonadism, dwarfism and geophagia. American Journal of Medicine. 31, 532-546 (1961).
- Jinno, N., Nagata, M., Takahashi, T. Marginal zinc deficiency negatively affects recovery from muscle injury in mice. Biological Trace Element Research. 158 (1), 65-72 (2014).
- Gaither, L. A., Eide, D. J. Eukaryotic zinc transporters and their regulation. Biometals. 14 (3-4), 251-270 (2001).
- Fukada, T., Yamasaki, S., Nishida, K., Murakami, M., Hirano, T. Zinc homeostasis and signaling in health and diseases: Zinc signaling. Journal of Biological Inorganic Chemistry. 16 (7), 1123-1134 (2011).
- Kambe, T., Hashimoto, A., Fujimoto, S. Current understanding of ZIP and ZnT zinc transporters in human health and diseases. Cellular and Molecular Life Sciences. 71 (17), 3281-3295 (2014).
- Plum, L. M., Rink, L., Haase, H. The essential toxin: impact of zinc on human health. International Journal of Environmental Research and Public Health. 7 (4), 1342-1365 (2010).
- Broun, E. R., Greist, A., Tricot, G., Hoffman, R. Excessive zinc ingestion. A reversible cause of sideroblastic anemia and bone marrow depression. Journal of the American Medical Association. 264 (11), 1441-1443 (1990).
- Fischer, P. W., Giroux, A., L’Abbe, M. R. The effect of dietary zinc on intestinal copper absorption. American Journal of Clinical Nutrition. 34 (9), 1670-1675 (1981).
- Ogiso, T., Ogawa, N., Miura, T. Inhibitory effect of high dietary zinc on copper absorption in rats. II. Binding of copper and zinc to cytosol proteins. in the intestinal mucosa. Chemical and Pharmaceutical Bulletin (Tokyo. 27 (2), 515-521 (1979).
- Gaetke, L. M., Chow, C. K. Copper toxicity, oxidative stress, and antioxidant nutrients. Toxicology. 189 (1-2), 147-163 (2003).
- Macomber, L., Imlay, J. A. The iron-sulfur clusters of dehydratases are primary intracellular targets of copper toxicity. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (20), 8344-8349 (2009).
- Robotham, J. L., Lietman, P. S. Acute iron poisoning. A review. American Journal of Diseases of Children. 134 (9), 875-879 (1980).
- Yang, W., Ni, Z., Guang, P., Xue, Y., Guang, P., Fen, X. . Recent advances in absolute analysis by graphite furnace atomic absorption spectrometry. 17 (2), 104-110 (1997).
- Gomez-Nieto, B., Gismera, M. J., Sevilla, M. T., Satrustegui, J., Procopio, J. R. Micro-sampling method based on high-resolution continuum source graphite furnace atomic absorption spectrometry for calcium determination in blood and mitochondrial suspensions. Talanta. 170, 15-21 (2017).
- Shaw, J. C., Bury, A. J., Barber, A., Mann, L., Taylor, A. A micromethod for the analysis of zinc in plasma or serum by atomic absorption spectrophotometry using graphite furnace. Clin Chim Acta. 118 (2-3), 229-239 (1982).
- Stevens, B. J., Hare, D. J., Volitakis, I., Cherny, R. A., Roberts, B. R. Direct determination of zinc in plasma by graphite furnace atomic absorption spectrometry using palladium/magnesium and EDTA matrix modification with high temperature pyrolysis. Journal of Analytical Atomic Spectrometry. 32 (4), 843-847 (2017).
- Durr, K. L., Tavraz, N. N., Spiller, S., Friedrich, T. Measuring cation transport by Na,K- and H,K-ATPase in Xenopus oocytes by atomic absorption spectrophotometry: an alternative to radioisotope assays. Journal of Visualized Experiments. (72), e50201 (2013).
- Conejo, R., Valverde, A. M., Benito, M., Lorenzo, M. Insulin produces myogenesis in C2C12 myoblasts by induction of NF-kappaB and downregulation of AP-1 activities. Journal of Cellular Physiology. 186 (1), 82-94 (2001).
- Salto, R., et al. beta-Hydroxy-beta-Methylbutyrate (HMB) Promotes Neurite Outgrowth in Neuro2a Cells. PLoS One. 10 (8), e0135614 (2015).
- LePage, K. T., Dickey, R. W., Gerwick, W. H., Jester, E. L., Murray, T. F. On the use of neuro-2a neuroblastoma cells versus intact neurons in primary culture for neurotoxicity studies. Critical Reviews in Neurobiology. 17 (1), 27-50 (2005).
- Provost, P. Interpretation and applicability of microRNA data to the context of Alzheimer’s and age-related diseases. Aging (Albany NY). 2 (3), 166-169 (2010).
- Green, H., Kehinde, O. An established preadipose cell line and its differentiation in culture. II. Factors affecting the adipose conversion. Cell. 5 (1), 19-27 (1975).
- Padilla-Benavides, T., Velez-delValle, C., Marsch-Moreno, M., Castro-Munozledo, F., Kuri-Harcuch, W. Lipogenic Enzymes Complexes and Cytoplasmic Lipid Droplet Formation During Adipogenesis. Journal of Cellular Biochemistry. 117 (10), 2315-2326 (2016).
- Soule, H. D., et al. Isolation and characterization of a spontaneously immortalized human breast epithelial cell line, MCF-10. Cancer Research. 50 (18), 6075-6086 (1990).
- Leighton, J., Estes, L. W., Mansukhani, S., Brada, Z. A cell line derived from normal dog kidney (MDCK) exhibiting qualities of papillary adenocarcinoma and of renal tubular epithelium. Cancer. 26 (5), 1022-1028 (1970).
- Cote, R. J. Aseptic technique for cell culture. Current Protocols in Cell Biology. , (2001).
- Suzuki, K., Bose, P., Leong-Quong, R. Y., Fujita, D. J., Riabowol, K. R. E. A. P. A two minute cell fractionation method. BMC Research Notes. 3, 294 (2010).
- Nabbi, A., Riabowol, K. Rapid Isolation of Nuclei from Cells In Vitro. Cold Spring Harbor Protocols. 2015 (8), 769-772 (2015).
- Bradford, M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry. 72, 248-254 (1976).
- Carpenter, M. C., Lo, M. N., Palmer, A. E. Techniques for measuring cellular zinc. Archive of Biochemistry and Biophysics. 611, 20-29 (2016).
- Paskavitz, A. L., et al. Differential expression of zinc transporters accompanies the differentiation of C2C12 myoblasts. Journal of Trace Elements in Medical Biology. 49, 27-34 (2018).
- Chandler, P., et al. Subtype-specific accumulation of intracellular zinc pools is associated with the malignant phenotype in breast cancer. Molecular Cancer. 15 (2), (2016).
- Gordon, S. J. V., Fenker, D. E., Vest, K. E., Padilla-Benavides, T. Manganese influx and expression of ZIP8 is essential in primary myoblasts and contributes to activation of SOD2. bioRxiv. , 494542 (2018).
- Jansen, S., Arning, J., Beyersmann, D. Zinc homeostasis in C6 glioma cells: phospholipase C activity regulates cellular zinc export. Biological Trace Element Research. 108 (1-3), 87-104 (2005).
- Fahrni, C. J. Biological applications of X-ray fluorescence microscopy: exploring the subcellular topography and speciation of transition metals. Current Opinion in Chemical Biology. 11 (2), 121-127 (2007).
- Huang, Z., Lippard, S. J. Illuminating mobile zinc with fluorescence from cuvettes to live cells and tissues. Methods in Enzymology. 505, 445-468 (2012).
- Qiao, W., Mooney, M., Bird, A. J., Winge, D. R., Eide, D. J. Zinc binding to a regulatory zinc-sensing domain monitored in vivo by using FRET. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (23), 8674-8679 (2006).
- Tomat, E., Lippard, S. J. Imaging mobile zinc in biology. Current Opinion in Chemical Biology. 14 (2), 225-230 (2010).
- Jajda, H. M., et al. Comparative efficacy of two standard methods for determination of iron and zinc in fruits, pulses and cereals. Journal of Food Science and Technology. 52 (2), 1096-1102 (2015).
- Padilla-Benavides, T., Long, J. E., Raimunda, D., Sassetti, C. M., Argüello, J. M. A novel P1B-type Mn2+-transporting ATPase is required for secreted protein metallation in mycobacteria. Journal of Biological Chemistry. 288 (16), 11334-11347 (2013).
