Мы описываем подробный протокол для оценки токсикологических профилей наночастиц оксида цинка (NO NPs), в частности, тип клеточной смерти в человеческих фибробластах легких MRC5 и образование ROS в плодовой мухе Drosophila.
Наночастицы оксида цинка (NO NPs) имеют широкий спектр применений, но количество сообщений о токсичности, связанной с NP-ассоциированной деятельностью, в последние годы быстро растет. Тем не менее, исследования, которые разъясняют основные механизмы для NO NP-индуцированной токсичности скудны. Мы определили профили токсичности NP с использованием как in vitro, так и in vivo экспериментальных моделей. Значительное снижение жизнеспособности клеток наблюдалось в фибробластах легких MRC5, показывающих, что НП Зно оказывают цитотоксическое действие. Аналогичным образом, интересно, кишечник подвергается NO NPs выставлены резкое увеличение уровня реактивных видов кислорода (ROS) в плодовой мухи Drosophila. Необходимы более углубленные исследования для проведения оценки рисков для более широкого использования NP-нпо в н.п. потребителями.
Нанотехнология относится к применению наноразмерных материалов, которые используются во всех научных областях, включая медицину, материаловедение и биохимию. Например, NO NPs, которые известны своими ультрафиолетовыми рассеяниями, химическим зондированием и антимикробными свойствами, а также высокой электрической проводимостью, используются в производстве различных потребительских товаров, таких как пищевая упаковка, косметика, текстиль, каучуки, аккумуляторы, катализатор для обработки автомобильным хвостом газа, и биомедицинскихприложений,связанных с 1,2,3.
Вместе с тем растущее применение продуктов на основе НП «Нена», что приводит к увеличению воздействия на людей НП Зно, вызывает обеспокоенность по поводу их потенциального неблагоприятного воздействия на здоровье человека. Ряд исследований в пробирке показали, что Нп., зно-О НП, могут вызывать окислительный стресс, аутофагию, цитотоксичность, воспаление и генотоксичность4,5,6,7,8 . Примечательно, что токсичность NO NPs, как предполагается, вызвана растворением ионов n, чтобы освободить ионы n2, а также поверхностной реактивностью «nO», что приводит к клеточной ионной и метаболическим дисбалансам, которые связаны с нарушением ионного гомеостаза и ингибирование ионного транспорта4,7,9,10. Важно отметить, что исследования показали, что генерация реактивных видов кислорода (ROS) является одним из основных механизмов, лежащих в основе NO NPs-ассоциированной токсичности. Недостаточная антиоксидативная активность после оскорбления ROS была доказана, чтобы нести ответственность за вырастая цитотоксичность и повреждение ДНК9. Токсическое воздействие NO NPs также были зарегистрированы в животных моделях, в том числе грызунов1, зебрафиш11,12, а также беспозвоночных Drosophila13.
Дрозофила служит в качестве устоявшейся альтернативной модели животных для скрининга токсичности химических веществ и наноматериалов (НМ)14,15. Важно отметить, что существует высокий уровень генетического и физиологического сходства между человеком и дрозофилой, что оправдывает использование дрозофилы в качестве модели in vivo для оценки биологических реакций на экологические загрязнители, такие как НМ 16. Кроме того, Есть много преимуществ использования Drosophila из-за его небольшой размер, короткий срок службы, генетические удобства, и легкои и экономически эффективное обслуживание. Кроме того, Drosophila была широко принята для изучения генетики, молекулярной и биологии развития, с тех пор его полный геном был полностью секвенирован лет назад в 2000 году, что делает его пригодным для различных высокой пропускной скрининг и для решения нерешенных биологических вопросов17,18,19,20,21. В последние годы, ряд исследований, связанных с иммунотоксичностью с использованием различных типов NPs в Drosophila были зарегистрированы15,22,23,24. Это фундаментальное новое знание, полученное в ходе исследований с использованием дрозофилы, помогло дать больше информации о нашем понимании нанотоксикологии.
ROS является известным виновником цитотоксичности и генотоксичности, вызванных НП, в частности, на основе металла NPs25. ROS являются кислородосодержащими химическими видами с более высокими реактивными свойствами, чем молекулярный кислород. Свободные радикалы, такие как супероксид радикальных (O2–) и даже, нерадикальные молекулы, такие как перекись водорода (H2O2) может выступать в качестве ROS. При нормальном физиологическом состоянии, они необходимы для поддержания клеточного гомеостаза26, однако, чрезмерное ROS из-за перепроизводства или дисрегуляции антиоксидантной системы защиты может вызвать окислительный стресс, что приводит к повреждению белков, липиды и дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК)27. Например, по мере повышения уровня ROS и снижения уровня глутатиона (ГСГ) одновременно происходит нарушение синтеза аденозинтрифосфата (АТФ), а уровень лактата дегидрогеназы (ЛПГ) повышается в среде, что приводит к гибели клеток27.
Здесь мы предоставляем протоколы для выполнения клеточного и генетического анализа с использованием культивированных клеток млекопитающих и дрозофилы для определения потенциальных побочных эффектов NO NPs. Обзор метода, используемого для исследования токсичности NPs, показан на рисунке 1.
Для того, чтобы оценить, если NO NP может вызвать апоптоз в фибробластах MRC5, мы используем цитометрию потока, чтобы отличить клетки от некротической или апоптотической смерти клеток. В нормальных живых клетках фосфатидилсерин (PS) локализован в клеточной мембране. При возникновении апопто…
The authors have nothing to disclose.
Исследование было поддержано номером гранта R706-000-043-490. Исследование не отражает мнение спонсора гранта.
15% Methyl 4-Hydroxybenzoate | Sigma Aldrich | ||
4% Paraformaldehyde | Sigma Aldrich | P6148 | |
Bacto Agar | BD biosciences | ||
cncCK6/TM3, Sb | a gift from Dr. Kerppola T | ||
cornmeal, glucose, yeast brewer | Sigma Aldrich | ||
CyAn ADP with Summit Software | DAKO | https://flow.usc.edu/files/2014/07/BC-Cyan-ADP-User-Guide-2016.pdf | |
Dihydroethidium (Hydroethidine) | Thermo Fisher Scientific | D11347 | |
FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit I | BD biosciences | 556547 | |
Fluorescent microscope | Olympus | ||
Glucolin | Supermarket | ||
Image J software | NIH | ||
MRC5 human lung fibroblast | ATCC | CCL-171 | |
Schneider’s Drosophila medium | Thermo Fisher Scientific | 21720-024 | |
vectashield antifade mounting medium with DAPI | Vector Laboratories | H-1200 | |
wild- type Canton-S; Sod2N308/CyO | NIG-FLY | ||
Zinc Oxide Nanoparticles | Sigma Aldrich | 721077 | Refer Sheet 2 |