Summary

Bewerten den Einfluss der Persönlichkeit auf Empfindlichkeit gegenüber Magnetfeldern im Zebrafisch

Published: March 18, 2019
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Summary

Wir beschreiben ein behavioral Protokoll entwickelt, um zu beurteilen wie der Zebrafisch Persönlichkeiten ihre Reaktion auf Wasser Ströme und schwache Magnetfelder beeinflussen. Fische mit den gleichen Persönlichkeiten werden basierend auf ihren explorativen Verhalten getrennt. Dann wird ihre rheotactic Orientierungsverhalten in einem Swimming-Tunnel mit einer low-Flow-Rate und unterschiedlichen magnetischen Bedingungen beobachtet.

Abstract

Um sich in ihrer Umwelt zu orientieren, Tiere eine Vielzahl von externen Cues, die Interaktion mit mehreren internen Faktoren wie Persönlichkeit zu integrieren. Hier beschreiben wir eine Verhaltens Protokoll für die Untersuchung des Einflusses der Zebrafisch Persönlichkeit auf ihre Ausrichtung als Reaktion auf mehrere externe ökologische Hinweise, insbesondere Wasserströme und Magnetfelder. Dieses Protokoll soll zu verstehen, ob aktiv oder reaktiv Zebrafisch anzeigen verschiedene rheotactic Schwellenwerte (d. h. die Fließgeschwindigkeit, bei dem die Fische beginnen stromaufwärts) als das umgebende Magnetfeld ändert seine Richtung. Um Zebrafisch mit der gleichen Persönlichkeit zu identifizieren, sind Fische im Dunkeln eingesetzt die Hälfte eines Panzers mit einer schmalen Öffnung zu einem hellen Hälfte verbunden. Nur aktive Fische erkunden, Roman, helle Umgebung. Reaktive Fisch beenden nicht die dunkle Hälfte des Tanks. Ein Schwimmen-Tunnel mit geringen Durchflussmengen dient zur Bestimmung der rheotactic Schwellenwerts. Wir beschreiben zwei Setups um das magnetische Feld im Tunnel, im Bereich der Erde magnetische Feldstärke zu steuern: eine, die steuert das Magnetfeld entlang der Fließrichtung (eindimensional) und eine drei-axial Kontrolle des magnetischen Feldes ermöglicht. Fische werden gefilmt, und erleben Sie eine schrittweise Erhöhung der Strömungsgeschwindigkeit im Tunnel unter verschiedenen Magnetfelder. Daten über das Orientierungsverhalten sind durch eine Video-Tracking-Verfahren gesammelt und für ein logistisches Modell erlauben die Bestimmung der rheotactic Schwelle. Wir berichten über repräsentative Ergebnisse aus shoaling Zebrafisch gesammelt. Insbesondere zeigen diese, dass nur reaktiv, vorsichtige Fische Variationen der rheotactic Schwelle, zeigen wenn das magnetische Feld in seine Richtung variiert, während proaktive Fisch nicht zu Magnetfeld-Veränderungen zu reagieren. Diese Methode kann auf die Untersuchung der magnetischen Empfindlichkeit und rheotactic Verhalten von vielen aquatischen Arten, sowohl einzeln anzeigen oder shoaling schwimmen Strategien angewendet werden.

Introduction

In der vorliegenden Studie beschreiben wir ein Labor-basiertes Verhaltens Protokoll hat den Umfang der Untersuchung der Rolle von Fisch Persönlichkeit zur Reaktion Orientierung der shoaling Fische, externe Orientierung Hinweise, wie Wasserströme und Magnetfelder.

Die orientierenden Entscheidungen der Tiere ergeben sich aus mit einem Gewicht von verschiedenen sensorischen Informationen. Der Entscheidungsprozess ist beeinflusst durch die Möglichkeit des Tieres zu navigieren (z. B. die Fähigkeit, wählen und halten eine Richtung), seinen internen Status (z. B. Fütterung oder reproduktiven Bedürfnisse), seine Fähigkeit zu bewegen (z. B. Fortbewegung Biomechanik), und einige zusätzliche externe Faktoren (z. B. Uhrzeit, Interaktion mit Artgenossen)1.

Die Rolle des internen Zustand oder tierischen Persönlichkeit in das Orientierungsverhalten oft unverstanden oder2nicht erforscht. In der Studie von der Orientierung des sozialen aquatische Arten, die oft ausführen koordiniert und polarisiert Gruppe Bewegung Verhalten3ergeben sich zusätzliche Herausforderungen.

Wasserströmungen spielen eine Schlüsselrolle bei der Ausrichtung der Fische. Fisch Wasser Ströme durch eine Unconditioned Antwort genannt Rheotaxis4, deren Wert positiv sein können (d.h., stromaufwärts orientiert) oder negativ (d. h. flussabwärts orientiert) orientieren und wird verwendet für verschiedene Aktivitäten, angefangen bei Nahrungssuche auf die Minimierung der energetische Ausgaben5,6. Darüber hinaus berichtet eine wachsende Zahl von Literatur, dass viele Fischarten für Orientierung und Navigation7,8,9das geomagnetische Feld verwenden.

Die Untersuchung über die Rheotaxis und schwimmen die Fische erfolgt in der Regel in Fluss Kammern (Wildwasserbahn), wo Fische die schrittweise Erhöhung der Strömungsgeschwindigkeit von niedrigen bis hohen Geschwindigkeiten oft bis zu Erschöpfung (so genannte kritische Drehzahl)10ausgesetzt sind, 11. Auf der anderen Seite, untersuchten frühere Studien die Rolle des magnetischen Feldes in der Orientierung durch die Beobachtung des Verhaltens Schwimmen der Tiere in den Arenen mit stillem Wasser12,13. Hier beschreiben wir eine Labortechnik, die Forscher zur Untersuchung des Verhaltens von Fischen während der Manipulation die Wasserströmungen und das magnetische Feld können. Diese Methode wurde zum ersten Mal auf shoaling Zebrafisch (Danio Rerio) genutzt, in unserer vorherigen Studie, was zu dem Schluss, dem die Manipulation des umgebenden Magnetfeldes bestimmt, die rheotactic Schwelle (d. h. minimal Geschwindigkeit durch das Wasser an die shoaling Fische stromaufwärts Orient)14. Diese Methode basiert auf der Verwendung einer Wildwasserbahn Kammer mit langsamen Bewegungen kombiniert mit einer Einrichtung zur Kontrolle der des Magnetfeldes in der Klamm, im Bereich der Erde magnetische Feldstärke.

Der Swimming-Tunnel genutzt, um das Verhalten der Zebrafisch zu beobachten ist in Abbildung 1dargestellt. Der Tunnel (gemacht von einem Nonreflecting Acryl Zylinder mit einem Durchmesser von 7 cm und 15 cm lang) ist eine Einrichtung für die Kontrolle der Flow Rate14verbunden. Mit diesem Setup variiert das Spektrum der Durchflussmengen im Tunnel zwischen 0 und 9 cm/s.

Wenn das Magnetfeld im Schwimmen Tunnel bearbeiten möchten, verwenden wir zwei methodische Ansätze: die erste ist eindimensional und die zweite ist dreidimensional. Für jede Anwendung dieser Methoden zu manipulieren das geomagnetische Feld, um bestimmten magnetischen Bedingungen in einem definierten Volumen des Wassers zu erhalten – also alle Werte der magnetischen Feldstärke in dieser Studie berichtet das geomagnetische Feld enthalten.

Bezüglich der eindimensionalen Ansatz15, das magnetische Feld wird manipuliert, entlang der Fließrichtung Wasser (definiert als die x-Achse) über ein Magnetventil eingewickelt um den Swimming-Tunnel. Dies an ein Netzteil angeschlossen ist, und es erzeugt gleichmäßige statische Magnetfelder (Abbildung 2A). In ähnlicher Weise bei der dreidimensionalen Ansatz ist das geomagnetische Feld in das Volume mit dem Swimming-Tunnel mit Spulen von elektrischen Leitungen geändert. Allerdings haben die Spulen um das magnetische Feld in drei Dimensionen zu kontrollieren, das Design der drei orthogonalen Helmholtz-Paare (Abb. 2 b). Jedes Helmholtz-paar besteht aus zwei kreisförmigen Windungen entlang den drei orthogonalen Raumrichtungen (X, yund Z) und ausgestattet mit einem drei-axial Magnetometer unter geschlossenen Bedingungen arbeiten. Das Magnetometer arbeitet mit Feld Intensitäten vergleichbar mit natürlichen Feld der Erde, und es liegt in der Nähe der geometrischen Mitte des eingestellten Spulen (wo sich der Schwimmen Tunnel befindet).

Wir implementieren die Hypothese, dass die Persönlichkeitsmerkmale der Komposition ein Schwarm Fische beeinflussen die Art und Weise, die Sie auf Magnetfelder16 reagieren,die oben beschriebenen Techniken. Wir testen die Hypothese, dass Personen mit proaktiven und reaktiven Persönlichkeit17,18 unterschiedlich reagieren, wenn Wasser fließt und Magnetfeldern ausgesetzt. Um dies zu testen, sortieren wir zuerst Zebrafisch mit einer etablierten Methode zuweisen und Gruppe Einzelpersonen, die proaktive und reaktive17,19,20,21. Dann bewerten wir das rheotactic Verhalten der Zebrafisch schwimmen in Schwärmen bestehend aus nur reaktiv Einzelpersonen oder bestehend aus nur proaktive Individuen in den magnetischen Flume-Tank, die wir als Sample-Daten darstellen.

Die Sortiermethode basiert auf die verschiedenen Tendenz der proaktiven und reaktiven Individuen, neue Umgebungen21zu erkunden. Insbesondere nutzen wir einen Panzer in eine helle und eine dunkle Seite17,19,20,21 (Abbildung 3) unterteilt. Tiere sind auf die dunkle Seite gewöhnt. Beim Zugriff auf die helle Seite offen, proaktive ist tendenziell Menschen schnell beenden die dunkle Hälfte des Tanks, um die neue Umgebung zu erkunden, während die reaktive Fische nicht die dunklen Tank lassen.

Protocol

Das folgende Protokoll wurde von der institutionellen Animal Care und Verwendung von der Universität von Neapel Federico II, Neapel, Italien (2015) genehmigt. 1. Tier Wartung Verwenden Sie Panzer von mindestens 200 L zu einem Schwarm von mindestens 50 Personen beider Geschlechter in jedem Tank host.Hinweis: Die Dichte der Fische in den Tank muss ein Tier pro 2 L oder niedriger sein. Unter diesen Bedingungen zeigt Zebrafisch shoaling Normalverhalten. Di…

Representative Results

Als Beispieldaten präsentieren wir Ergebnisse, die das Magnetfeld entlang der Fließrichtung Wasser auf proaktive und reaktive shoaling Zebrafisch16 mit dem Setup, dargestellt in Abbildung 2A (siehe Abschnitt 3 des Protokolls) zu kontrollieren. Diese Ergebnisse zeigen, wie das beschriebene Protokoll Unterschiede in den Reaktionen auf das magnetische Feld in Fischen mit unterschiedlichen Persönlichkeiten hervorheben kann. Das Gesamtko…

Discussion

In dieser Studie beschriebene Protokoll ermöglicht es Wissenschaftlern, komplexe Orientierung Antworten von aquatischen Arten, die aus der Integration zwischen zwei externen Cues (Wasser aktuelle und geomagnetische Feld) und einem internen Faktor des Tieres, wie z. B. zu quantifizieren Persönlichkeit. Das Gesamtkonzept ist ein experimentelles Design erstellen, das können Wissenschaftler zu trennen Personen unterschiedlicher Persönlichkeit und deren Orientierungsverhalten während Steuerung separat oder gleichzeitig d…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Die Studie wurde unterstützt durch die grundlegende Forschung Gründung des Fachbereichs Physik und die Biologie-Abteilung der Universität Federico II Neapel. Die Autoren danken Dr. Claudia Angelini (Institut für angewandte Kalkül, Consiglio Nazionale Delle Ricerche [CNR], Italien) für die statistische Unterstützung. Die Autoren danken Martina Scanu und Silvia Frassinet für ihre technische Unterstützung bei Erhebung der Daten und die Abteilungs-Techniker F. Cassese, G. Spazierweg und R. Rocco für ihre geschickte Unterstützung bei der Gestaltung und Realisierung des experimentellen Aufbaus. Wir danken für die Unterstützung der Durchführung des Experiments während der Videoaufnahme Laura Gentile. Wir bedanken uns bei Diana Rose Udel von der University of Miami für die Interview-Aussagen von Alessandro Cresci schießen.

Materials

9500 G meter FWBell N/A Gaussmeter, DC-10 kHz; probe resolution:  0.01 μT 
AD5755-1 Analog Devices EVAL-AD5755SDZ Quad Channel, 16-bit, Digital to Analog Converter
ALR3003D ELC 3760244880031 DC Double Regulated power supply
BeagleBone Black Beagleboard.org N/A Single Board Computer
Coil driver Home made N/A Amplifier based on commercial OP (OPA544 by TI)
Helmholtz pairs Home made N/A Coils made with standard AWG-14 wire
HMC588L Honeywell 900405 Rev E Digital three-axis magnetometer
MO99-2506 FWBell 129966 Single axis magnetic probe
Swimming apparatus M2M Engineering Custom Scientific Equipment N/A Swimming apparatus composed by peristaltic pump and SMC Flow switch flowmeter with digital feedback
TECO 278 TECO N/A Thermo-cryostat 

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Cite This Article
Cresci, A., De Rosa, R., Agnisola, C. Assessing the Influence of Personality on Sensitivity to Magnetic Fields in Zebrafish. J. Vis. Exp. (145), e59229, doi:10.3791/59229 (2019).

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