Summary

Использование Flight Mills для измерения склонности к полетам и производительности западного корня Rootworm, Diabrotica virgifera virgifera (LeConte)

Published: October 29, 2019
doi:

Summary

Летные мельницы являются важными инструментами для сравнения того, как возраст,пол, состояние спаривания, температура или различные другие факторы могут влиять на поведение насекомого. Здесь мы описываем протоколы, чтобы привязывать и измерять склонность к полету и производительность западного кукурузного корневого червя при различных методах лечения.

Abstract

Западный корневой червь кукурузы, Diabrotica virgifera virgifera (LeConte) (Coleoptera: Chrysomelidae), является экономически важным вредителем кукурузы в северной части Соединенных Штатов. Некоторые популяции разработали устойчивость к стратегиям управления, включая трансгенную кукурузу, которая производит инсектицидные токсины, полученные из бактерии Bacillus thuringiensis (Bt). Знание западного рассеивания корневого червя кукурузы имеет решающее значение для моделей эволюции устойчивости, распространения и смягчения последствий. Поведение насекомого, особенно на большом расстоянии, по своей сути трудно наблюдать и охарактеризовать. Летные мельницы предоставляют средства для непосредственного тестирования развития и физиологических воздействий и последствий полета в лаборатории, которые не могут быть получены в полевых исследованиях. В этом исследовании летные мельницы использовались для измерения времени полетной активности, общего числа полетов, а также расстояния, продолжительности и скорости полетов, выполняемых женскими корневыми червями в течение 22-h испытательного периода. Шестнадцать летных мельниц были размещены в экологической камере с программируемым освещением, температурой и контролем влажности. Описанная летная мельница имеет типичную конструкцию, где рука полета свободно поворачивает сяротку около центрального опоры. Вращение происходит от полета насекомого, привязанного к одному концу летной руки, и каждое вращение записывается датчиком с отметкой времени. Необработанные данные компилируются с помощью программного обеспечения, которое впоследствии обрабатывается для предоставления сводной статистики по параметрам полетов, представляющим интерес. Самой трудной задачей для любого исследования летной мельницы является присоединение троса к насекомому с клеем, и используемый метод должен быть адаптирован к каждому виду. Крепление должно быть достаточно сильным, чтобы держать насекомое в жесткой ориентации и предотвратить отслоение во время движения, не мешая при этом естественному движению крыла во время полета. Процесс вложения требует ловкости, утонченности и скорости, делая видеоматериалы процесса для корневых червей стоимости.

Introduction

Западный корневой червь кукурузы, Diabrotica virgifera virgifera LeConte (Coleoptera: Chrysomelidae), был определен как вредитель культивируемой кукурузы в 19091. Сегодня, это самый важный вредитель кукурузы(Зея может Л.) в США кукурузный пояс, с личинки кормления на корни кукурузы вызывает большую часть потери урожайности, связанные с этим вредителем. Ежегодные расходы на управление и потери производства кукурузы из-за кукурузы корневой червь, по оценкам, превышает $ 1 млрд2. Западный корневой червь кукурузы очень адаптируется, и популяции развили устойчивость к нескольким стратегиям управления, включая инсектициды, севооборот, и трансгенные bt кукурузы3. Определение пространственных измерений, над которыми должна применяться тактика для смягчения локального развития сопротивления, или точки доступа сопротивления, зависит от лучшего понимания разгона4. Меры по смягчению последствий не будут успешными, если они будут ограничены слишком малым пространственного масштаба вокруг точки доступа сопротивления, потому что устойчивые взрослые будут рассеиваться за пределы зоны смягчения5. Понимание поведения полета западной кукурузы корневой червь имеет важное значение для создания эффективных планов управления устойчивостью для этого вредителя.

Разгон по летом играет важную роль во взрослой западной кукурузы корневого червя истории жизни и экологии6, и поведение полета этого вредителя могут быть изучены в лаборатории. Для измерения поведения полета в лаборатории может использоваться несколько методов. Актограф, ограничивающий полет в вертикальной плоскости, может измерять количество времени, в течение которого насекомое участвует в полете. Актографы были использованы для сравнения продолжительности полета и периодичности моделей западной кукурузы корневого червя мужчин и женщин в разном возрасте, размеры тела, температуры, инсектицидной восприимчивости, и воздействие инсектицидов7,8, 9. Полет туннели, которые состоят из камеры слежения и направленного воздушного потока, особенно полезны для изучения поведения полета насекомых при следовании шлейф запаха, таких как кандидат феромонов компонентов10 или растений летучих11. Летные мельницы, пожалуй, наиболее распространенный метод для лабораторных исследований поведения насекомых полета и может охарактеризовать несколько аспектов летной склонности и производительности. Лабораторные летные мельницы были использованы в исследованиях западного кукурузного корневого червя, чтобы охарактеризовать склонность совершать короткие и устойчивые полеты, а также гормональный контроль устойчивого полета12,13.

Летные мельницы обеспечивают относительно простой способ изучения поведения насекомых в лабораторных условиях, позволяя исследователям измерять различные параметры полета, включая периодичность, скорость, расстояние и продолжительность. Многие из летных мельниц, используемых сегодня, являются производными от кольцевых разбое14 и Крога и Вайс-Фога15. Летные мельницы могут быть разными по форме и размеру, но основной принцип остается прежним. Насекомое привязали и смонтировали на радиальной горизонтальной руке, которая свободно вращается, с минимальным трением, о вертикальном валу. Как насекомое летит вперед, его путь ограничивается кружили в горизонтальной плоскости, с расстоянием, пройденное за вращение продиктовано длина руки. Датчик обычно используется для обнаружения каждого вращения руки, вызванного летной активностью насекомого. Сырые данные включают вращения на единицу времени, и время полета дня произошло. Данные подаются в компьютер для записи. Данные с нескольких летных мельниц часто регистрируются параллельно, по существу одновременно, при этом банки 16 и 32 летных мельниц являются общими. Необработанные данные дополнительно обрабатываются пользовательским программным обеспечением для обеспечения значений для таких переменных, как скорость полета, общее количество отдельных рейсов, расстояние и продолжительность полета и так далее.

Каждый вид насекомых отличается, когда дело доходит до наилучшего метода для привязывания из-за морфологических переменных, таких как общий размер, размер и форма целевой области для крепления троса, мягкость, и гибкость насекомого, необходимость и метод для анестезии, потенциал для загрязнения крыльев и / или головы с неуместным или переполнения клея, и многие, многие другие детали. В случаях визуализированного привязывания plataspid ошибка16 и амброзия жук17, соответствующие целевые области для крепления троса являются относительно большими и прощает неточное размещение клея, потому что голова и крылья несколько хорошо отделены от сайта вложений. Это не преуменьшать сложность привязывая этих насекомых, который требует для любого вида. Но западный кукурузный корневой червь является особенно сложным насекомым, чтобы привязывать: пронотам узкий и короткий, что делает очень точное вложение с минимальным количеством клея (зубной воск в этом случае), необходимых для предотвращения вмешательства в открытие elytra для полета и с головой, где контакт с глазами или антеннами может повлиять на поведение. В то же время, трос аттера должны быть твердо прикреплены, чтобы избежать выбивки этой сильной листовки. Демонстрация привязывания корневого червя взрослых является наиболее важным предложением в этой работе. Это должно быть полезным для тех, кто работает с этим или аналогичными насекомыми, где метод визуализированы здесь может быть полезным вариантом.

В этой статье описаны методы, используемые для эффективного привязки и характеризуют летную активность западных взрослых кукурузных корневого червя, которые были воспитаны при различных личинках плотности. Летные мельницы и программное обеспечение, используемое в этом исследовании(Рисунок 1) были получены из проектов, размещенных в Интернете Джонс и др.18 Привязывая методы были изменены из описания в Stebbing и др.9 Массив 16 летных мельниц был размещены в экологической камере, предназначенной для контроля освещения, влажности и температуры(рисунок 2). Использование этой или аналогичной установки наряду со следующими методами позволяет для тестирования факторов, которые могут повлиять на склонность к полету и производительность западного кукурузного корневого червя, в том числе возраст, пол, температура, фотопериод, и многие другие.

Protocol

1. Задний западный корневой червь кукурузы для летных испытаний ПРИМЕЧАНИЕ: Если возраст взрослого человека должен быть под контролем или известно, взрослые должны быть собраны в поле, а затем воспитание их потомство во взрослую жизнь для тестирования. Если возраст жука и?…

Representative Results

На рисунке 4 показаны репрезентативные примеры результатов, ожидаемых после летных испытаний. Данные о полетах были получены в ходе экспериментальных работ, проведенных на кафедре энтомологии Университета штата Айова. Шестидневный, спаренный женский западный корень к…

Discussion

Характеристика западного поведения полета корневого червя кукурузы имеет важное значение для разработки эффективных планов управления сопротивлением. Поведение этого вредителя изучалось в лаборатории с использованием различных методов, включая актографы, летные туннели и летные м?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Ассистента выпускника E.Y.Y. была поддержана Национальным научным фондом I/UCRC, Центром технологий управления артроподами под управлением Гранта No. IIP-1338775 и отраслевые партнеры.

Materials

Butane multi-purpose lighter BIC UXMPFD2DC To soften wax when tethering
Clear polystyrene plastic vial (45-ml) Freund Container and Supply AS112 To hold beetle while anesthetizing
Dehydrated culture media, agar powder Fisher Scientific S14153 To make agar for holding moisture for adults
Delrin rod (1" diameter, 3.75" long) Many suppliers: can use cheapest on the internet. For post of flight mill
Dental wax DenTek 47701000335 Adheres wire tether to prothorax
Ferrite ring magnets (OD: 0.69”, ID: 0.29”, Thickness: 0.118”; 7oz pull) Magnet Shop 63B06929118 Opposing – to generate the float.
Hall effect sensor Optikinc OHN3120U Look under magnetic sensors on the left side of the Optekinc website then look for the part number. A link is given for current suppliers.
Hypodermic tubing (22 gauge; 0.0358” OD x 0.01975” ID x 0.004” wall) Small Parts, Inc. HTX-22T-12 Used for flight mill arms and main axis rod.
Incubator (104.1 x 85.4 x 196.1 cm) Percival Scientific I-41VL
LabVIEW Full Development System software, system-design platform National Instruments (See http://www.ni.com/en-us/shop/labview/select-edition.html) LabVIEW 2018 (Full Edition)  Provides environment needed to run flight mill files (.vi extensions) available for download from Jones et al.18 at http://entomology.tfrec.wsu.edu/VPJ_Lab/Flight-Mill.  LabVIEW 2018 Full is compatible with Win/Mac/Linux operating systems.
Mesh cage (18 x 18 x 18 cm) MegaView Science Co. Ltd. BugDorm-4M1515 mesh size = 44 x 32, 650 µm aperture
Needle tool BLICK 34920-1063 For scoring soil surface for egg laying in laboratory
Nickel ring magnets (3/16” OD x 1/16” ID x: 1/16” thick) K&J Magnetics R311 Used to trigger the digital hall effect sensor.
Petri dish (100 mm x 15 mm) Fisher Scientific S33580A
Plastic container (44-ml) Dart 150PC For initial rearing of young larvae
Plastic container (473-ml) Placon 22885 For rearing of older larvae
Round brush (size 2) Simply Simmons 10472906 For transferring freshly hatched neonates to surface of roots
Sieve (250-µm) Fisher Scientific 08-418-05 To separate eggs from soil
Steel wire (28-gauge) The Hillman Group 38902350282
Teflon rod (3/8" diameter, 3/4" length) United States Plastic Corporation 47503 To accept the rotating arm.
Vacuum  Gast Manufacturing, Inc. 1531-107B-G288X For aspirating adults in laboratory
White poly chiffon fabric Hobby Lobby 194811 To prevent escape of larvae from rearing container

References

  1. Gillette, C. P. Diabrotica virgifera Lec. as a corn root-worm. Journal of Economic Entomology. 5 (4), 364-366 (1912).
  2. Rice, M. E. Transgenic rootworm corn: assessing potential agronomic, economic, and environmental benefits. Plant Management Network. , (2004).
  3. Gray, M. E., Sappington, T. W., Miller, N. J., Moeser, J., Bohn, M. O. Adaptation and invasiveness of western corn rootworm: Intensifying research on a worsening pest. Annual Review of Entomology. 54 (1), 303-321 (2009).
  4. Martinez, J. C., Caprio, M. A. IPM use with the deployment of a nonhigh dose Bt pyramid and mitigation of resistance for western corn rootworm (Diabrotica virgifera virgifera). Environmental Entomology. 45 (3), 747-761 (2016).
  5. Miller, N. J., Sappington, T. W. Role of dispersal in resistance evolution and spread. Current Opinion in Insect Science. 21, 68-74 (2017).
  6. Spencer, J. L., Hibbard, B. E., Moeser, J., Onstad, D. W. Behaviour and ecology of the western corn rootworm (Diabrotica virgifera virgifera LeConte). Agricultural and Forest Entomology. 11, 9-27 (2009).
  7. VanWoerkom, G. J., Turpin, F. T., Barret, J. R. Influence of constant and changing temperatures on locomotor activity of adult western corn rootworms (Diabrotica virgifera) in the laboratory. Environmental Entomology. 9 (1), 32-34 (1980).
  8. Naranjo, S. E. Comparative flight behavior of Diabrotica virgifera virgifera and Diabrotica barberi in the laboratory. Entomologia Experimentalis et Applicata. 55 (1), 79-90 (1990).
  9. Stebbing, J. A., et al. Flight behavior of methyl-parathion-resistant and -susceptible western corn rootworm (Coleoptera: Chrysomelidae) populations from Nebraska. Journal of Economic Entomology. 98 (4), 1294-1304 (2005).
  10. Dobson, I. D., Teal, P. E. A. Analysis of long-range reproductive behavior of male Diabrotica virgifera virgifera LeConte and D. barberi Smith and Lawrence to stereoisomers of 8-methyl-2decyl propanoate under laboratory conditions. Journal of Chemical Ecology. 13 (6), 1331-1341 (1987).
  11. Spencer, J. L., Isard, S. A., Levine, E. Free flight of western corn rootworm (Coleoptera: Chrysomelidae) to corn and soybean plants in a walk-in wind tunnel. Journal of Economic Entomology. 92 (1), 146-155 (1999).
  12. Coats, S. A., Tollefson, J. J., Mutchmor, J. A. Study of migratory flight in the western corn rootworm (Coleoptera: Chrysomelidae). Environmental Entomology. 15 (3), 620-625 (1986).
  13. Coats, S. A., Mutchmor, J. A., Tollefson, J. J. Regulation of migratory flight by juvenile hormone mimic and inhibitor in the western corn rootworm (Coleoptera: Chrysomelidae). Annals of the Entomological Society of America. 80 (5), 697-708 (1987).
  14. Kennedy, J. S., Ainsworth, M., Toms, B. A. Laboratory studies on the spraying of locusts at rest and in flight. Anti-Locust Bull. L. 2, 64 (1948).
  15. Krogh, A., Weis-Fogh, T. A Roundabout for studying sustained flight of Locusts. Journal of Experimental Biology. 29, 211-219 (1952).
  16. Attisano, A., Murphy, J. T., Vickers, A., Moore, P. J. A simple flight mill for the study of tethered flight in insects. Journal of Visualized Experiments. (106), e53377 (2015).
  17. Okada, R., Pham, D. L., Ito, Y., Yamasaki, M., Ikeno, H. Measuring the flight ability of the ambrosia beetle, Platypus quercivorus (Murayama), using a low-cost, small, and easily constructed flight mill. Journal of Visualized Experiments. (138), e57468 (2018).
  18. Jones, V. P., Naranjo, S. E., Smith, T. J. . Insect ecology and behavior: laboratory flight mill studies. , (2010).
  19. Abendroth, L. J., Elmore, R. W., Boyer, M. J., Marlay, S. K. . Corn Growth and Development. , (2011).
  20. Meinke, L. J., Sappington, T. W., Onstad, D. W., Guillemaud, T., Miller, N. J., Komáromi, J., Levay, N., Furlan, L., Kiss, J., Toth, F. Western corn rootworm (Diabrotica virgifera virgifera LeConte) population dynamics. Agricultural and Forest Entomology. 11, 29-46 (2009).
  21. Hammack, L., French, B. W. Sexual dimorphism of basitarsi in pest species of Diabrotica and Cerotoma (Coleoptera: Chrysomelidae). Annals of the Entomological Society of America. 100 (1), 59-63 (2007).
  22. Guss, P. L. The sex pheromone of the western corn rootworm (Diabrotica virgifera). Environmental Entomology. 5 (2), 219-223 (1976).
  23. Hammack, L. Calling behavior in female western corn rootworm beetles (Coleoptera: Chrysomelidae). Annals of the Entomological Society of America. 88 (4), 562-569 (1995).
  24. Minter, M., Pearson, A., Lim, K. S., Wilson, K., Chapman, J. W., Jones, C. M. The tethered flight technique as a tool for studying life-history strategies associated with migration in insects. Ecological Entomology. 43, 397-411 (2018).
  25. Ribak, G., Barkan, S., Soroker, V. The aerodynamics of flight in an insect flight-mill. PLoS One. 12 (11), e0186441 (2017).
  26. Riley, J. R., Downham, M. C. A., Cooter, R. J. Comparison of the performance of leafhoppers on flight mills with that to be expected in free flight. Entomologia Experimentalis et Applicata. 83, 317-322 (1997).
  27. Isard, S. A., Spencer, J. L., Mabry, T. R., Levine, E. Influence of atmospheric conditions on high-elevation flight of western corn rootworm (Coleoptera: Chrysomelidae). Environmental Entomology. 33 (3), 650-656 (2004).
  28. Chapman, J. W., Reynolds, D. R., Wilson, K. Long-range seasonal migration in insects: mechanisms, evolutionary drivers and ecological consequences. Ecology Letters. 18, 287-302 (2015).
  29. Spencer, J. L., Mabry, T. R., Vaughn, T. T. Use of transgenic plants to measure insect herbivore movement. Journal of Economic Entomology. 96 (6), 1738-1749 (2003).
  30. Isard, S. A., Spencer, J. L., Nasser, M. A., Levine, E. Aerial movement of western corn rootworm, Diabrotica virgifera virgifera (Coleoptera: Chrysomelidae): diel periodicity of flight activity in soybean fields. Environmental Entomology. 29 (2), 226-234 (2000).
  31. Kim, K. S., Sappington, T. W. Genetic structuring of western corn rootworm (Coleoptera: Chrysomelidae) populations in the U.S. based on microsatellite loci analysis. Environmental Entomology. 34 (2), 494-503 (2005).

Play Video

Cite This Article
Yu, E. Y., Gassmann, A. J., Sappington, T. W. Using Flight Mills to Measure Flight Propensity and Performance of Western Corn Rootworm, Diabrotica virgifera virgifera (LeConte). J. Vis. Exp. (152), e59196, doi:10.3791/59196 (2019).

View Video