Coleta de sangue modificado de veias de cauda de ratos não anestesiados com um sistema de coleta de sangue do vácuo e óculos lupa
Summary
Este estudo relata de amostra de sangue da veia da cauda em ratos, utilizando um sistema de tubo de aspiração com lupa do eyeglass. Nosso método é fácil de praticar e poderia ser usado para amostragem de sangue de repetição em camundongos.
Abstract
Coleta de amostra de sangue é a base da pesquisa experimental animal. É de importância para obter amostras de sangue adequada para diversos fins de pesquisa. As veias de cauda de ratos são pequenas, e às vezes é difícil obter o volume de sangue exigido pelos métodos convencionais de punção. Este estudo investiga a superioridade da coleta de amostra de sangue das veias de cauda de ratos através do uso de um sangue vácuo coleção sistema e óculos lupa (grupo experimental) em comparação com métodos de amostragem de sangue convencional (grupo convencional) , interpretada por iniciantes e especialistas, respectivamente. Com a ajuda de uma lupa de óculos, uma ponta de agulha borboleta é inserida na veia da cauda de cada rato no grupo experimental. Quando a veia é penetrada com sucesso, uma amostra de sangue é coletada no tubo de vácuo coleção pela inserção da extremidade de borracha de uma agulha tipo borboleta no tubo de coleta de sangue do vácuo. O êmbolo é usado para coletar sangue sem a ajuda da lupa do eyeglass no grupo convencional. Taxas de sucesso de coleta de amostra de sangue pelos iniciantes e especialistas foram mostradas para ser 70% vs. 100% (p < 0,01) no grupo experimental e 35% versus 85% (p < 0,01) no grupo convencional. Para novatos e especialistas, punção tempos necessários para a obtenção de amostra de sangue necessária foram significativamente menores no grupo experimental comparado ao grupo convencional (2,40 ± 0,75 vs 2,90 ± 0,31, p < 0,05; 1,15 ± 0,37 vs 1,55 ± 0.76, p < 0,05). Em conclusão, a técnica de amostragem de sangue apresentado é viável e fácil de prática e permite a amostragem frequente dos volumes de sangue adequada dos ratos não anestesiados.
Introduction
Colheita de sangue de animais envolvidos em experiências é uma técnica de pesquisa básica. Existem algumas técnicas disponíveis para coleta de sangue de ratos, incluindo cortes de cauda e perfurando do coração, do plexo retrô-orbital, veia jugular, veia caudal e veia cava. Idealmente, o sangue deve ser colhida de forma minimamente invasiva, com o mínimo de impacto sobre a saúde do animal. No entanto, as técnicas mais comumente usadas frequentemente infligem o stress sobre os animais e podem afetar os resultados de pesquisa1. Coleta de sangue do plexo retrô-orbital pode ser usada para obter volume suficiente sangue de ratos2. No entanto, isso pode resultar em dano tecidual grave e não permite a obtenção de sangue repetidamente em intervalos de tempo curto3.
A veia caudal é uma excelente localização para coleta de sangue, que provoca lesão mínima sobre ratos. No entanto, as veias de cauda de ratos são finas, e às vezes é difícil obter sangue suficiente através da técnica de punção convencional. Em alguns casos, punções repetidas são necessárias para obter o volume de sangue desejada. Anestesia é também comumente recomendada para facilitar a recolha de amostras de sangue das veias cauda dos ratos. Além disso, um bisturi, lâmina de borda reta ou tesoura afiada pode ser necessária para remover as pontas das caudas para obter o sangue necessário amostras4. Informamos anteriormente coleta de sangue bem sucedida das veias cauda dos ratos não anestesiados pelo sistema de coleta de amostra de sangue do vácuo, que reduziu o risco de contaminação do sangue e evitar a necessidade de punções repetidas5. Este estudo relata um método similar de coleta de sangue em ratos não anestesiados.
Protocol
Representative Results
Discussion
O presente estudo descreve um método de coleta de sangue fácil de aprender em ratos que é superior às técnicas convencionais. Primeiro, o método pode ser dominado facilmente com uma elevada taxa de sucesso. Em segundo lugar, é baseado no princípio da pressão negativa do vácuo e permite desenho contínuo de sangue com um risco reduzido de exposição direta de sangue, que também reduz a chance de contaminação e a hemólise9. Em terceiro lugar, esse método é viável para amostragem frequente de sangue com volumes adequados de ratos durante um curto período de tempo para vários fins de pesquisa. Além disso, o procedimento inflige apenas mínima lesão em ratos, e coleta de sangue pode ser realizada sem o uso de anestésicos; assim, a influência da resposta ao estresse e anestésicos em amostras de sangue pode ser evitada.
A veia da cauda é uma excelente localização para amostragem de sangue, de acordo com o protocolo aprovado7. No entanto, não sempre é fácil obter volume suficiente de sangue das veias de cauda fina com fluxos de sangue baixa. Neste caso, a pele é geralmente cortada aberta e veia é penetrada por uma lanceta, ou o fim da cauda é removido rapidamente por uma navalha.
Este protocolo visa melhorar a metodologia de coleta de sangue de ratos utilizando o sistema de coleta de sangue do vácuo, que requer um tubo de coleta de amostra de sangue do vácuo, agulha da borboleta e lupa do eyeglass. Este sistema de recolha de sangue do vácuo é geralmente usado para coletar amostras de sangue dos pacientes em diária prática clínica10. Com a ajuda de uma lupa de óculos, o ponto perfeito de punção de uma veia da cauda é mais fácil de localizar. Quando a ponta de uma agulha é inserida a veia da cauda, sangue fluirá automaticamente dentro do tubo de vácuo devido a pressão negativa. Depois de retirar a agulha da veia da cauda, o sangue é bloqueado o cateter vai fluir no tubo de vácuo de coleta devido o vácuo.
As dicas a seguir são importantes para a aplicação bem sucedida do método. Primeiro, o peso corporal de cada rato deve ser 40 g ou superior para diminuir a dificuldade de punção e obtenção de sangue suficiente. Em segundo lugar, no caso de coleta de sangue falha, experimentadores devem tentar retirar a agulha lentamente até o sangue continua a fluir para fora. Em terceiro lugar, é vital para estender a cauda para evitar qualquer movimento durante a colheita de sangue. Segurando a agulha suavemente pode ajudar a manter a ponta da agulha na veia, como os movimentos de cauda de rato. Em quarto lugar, se o sangue parar de fluir para fora durante a coleta de sangue, o ângulo da agulha deve ser ajustado em tempo hábil. Para evitar a coagulação do sangue na agulha, outra posição de punção deve ser seleccionada se o sangue parar de fluir para fora após 15 s. Finalmente, recomenda-se a cooperação de dois operadores, ao usar esta técnica para coletar sangue de ratos.
Em suma, o método de coleta de sangue do vácuo adotado para uso em camundongos é segura, viável e fácil de prática. Esse método permite a amostragem frequente de sangue com volumes de sangue adequada dos ratos não anestesiados.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado pela concessão natureza Science Foundation da província de Hubei, China [Grant No. 2018CFB761].
Materials
| Double-pointed needle | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 20163151718 | 22G (0.7 mm x 25 mm) |
| Eyeglass magnifier | Vergroberung | 1.5x | |
| Normal salt diet for mice | Mice received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study. | ||
| Plastic holder | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 35-45 g rat hoder | |
| SPSS software for statistical analysis | SPSS Inc, Chicago; USA | Version 17.0. | |
| Syringe | Shandong wego Medical polymer products co. LTD., China | 20160911A | 1 mL (Matching needle size: 0.45×16RW LB) |
| Vacuum blood collection system | Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China | 20171222 | 1 mL (Φ12.4×L75) |
References
- Grouzmann, E., et al. Blood sampling methodology is crucial for precise measurement of plasma catecholamines concentrations in mice. European Journal of Physiology. 447 (2), 254-258 (2003).
- Heimann, M., Roth, D. R., Ledieu, D., Pfister, R., Classen, W. Sublingual and submandibular blood collection in mice: a comparison of effects on body weight, food consumption and tissue damage. Lab Animal. 44 (4), 352-358 (2010).
- Heimann, M., Kasermann, H. P., Pfister, R., Roth, D. R., Burki, K. Blood collection from the sublingual vein in mice and hamsters: a suitable alternative to retrobulbar technique that provides large volumes and minimizes tissue damage. Lab Animal. 43 (3), 255-260 (2009).
- Hoff, J. Methods of blood collection in the mouse. Lab Animal. 29 (10), 47-53 (2000).
- Zou, W., et al. Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System. Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).
- Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).
- Diehl, K. H., et al. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. Journal of Applied Toxicology. 21 (1), 15-23 (2001).
- Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter. Academic Emergency Medicine. 20 (11), 1151-1155 (2013).
- Eder, J. M., Cutter, G. R. A new device for collecting cord blood. Obstetrics and Gynecology. 86 (5), 850-852 (1995).
