Efeito de anticorpo Anti-c-fms Osteoclast formação e proliferação de Osteoclast Precursor In Vitro

Os osteoclastos são células altamente especializadas, e eles diferenciar de células-tronco hematopoiéticas através da fusão de vários precursores do osteoclast. Eles são essenciais para a remodelação óssea saudável e contribuem para a reabsorção óssea patológica associada a doenças inflamatórias osteolíticas, tais como artrite reumatoide e doença periodontal¹.

Função Osteoclastogenesis e osteoclasto são mediadas por dois fatores-chave; macrófago colônia de fator (M-CSF) e do receptor ativador de ligante de fator nuclear kappa-B (RANKL). Tanto M-CSF e RANKL são importantes para osteoclast diferenciação². Outro fator que tem sido mostrado para induzir a formação de osteoclast de macrófagos da medula óssea in vitro é o fator de necrose tumoral alfa (TNF-α)^3,4,5. TNF-α formação mediada osteoclast foi mostrada para ser crítico de osteólise em doenças como artrite reumatoide⁶, doença periodontal⁷e osteoporose pós-menopausa⁸destrutivo.

C-fms é o receptor de membrana do M-CSF e Medeia sua ação. O papel do c-fms é bem documentado na literatura, como foi demonstrado que a administração de um anticorpo contra c-fms (anticorpo anti-c-fms) completamente preso osteoclastogenesis em um modelo de artrite, bem como em TNF-α induzida por erosões ósseas, enquanto osteoclastogenesis distante da articulação inflamada foi ainda robusto⁹. Administração do anticorpo anti-c-fms inibiu a reabsorção de formação e osso osteoclast induzida pelo lipopolissacarídeo (LPS) em rato Calvárias¹⁰ , bem como em periodontite induzida por LPS modelo¹¹. Além disso, anticorpos anti-c-fms inibiam a reabsorção de raiz induzida por estresse mecânico durante de movimento ortodôntico do dente¹², bem como o movimento ortodôntico do dente e reabsorção óssea associada de movimento ortodôntico do dente¹³.

M-CSF foi relatado para ter outras funções que são essenciais para a resposta imune do hospedeiro. A ausência de M-CSF em camundongos op/op com pneumonia bacteriana conduzir ao aumento da carga bacteriana e disseminação bacteriana no fígado com necrose hepática¹⁴. Portanto, M-CSF é importante para a resposta imunológica na proteção de infecção.

Este estudo demonstra o efeito do anticorpo anti-c-fms em M-CSF e RANKL ou TNF-α induzida formação osteoclast in-vitro e M-CSF induzida proliferação de precursores do osteoclast. Este protocolo demonstra o isolamento de células de medula murino de ossos longos e as etapas para gerar os macrófagos da medula óssea (BMM) que são considerados as precursoras do osteoclasto e para induzir a diferenciação de BMM em osteoclastos Relaxometria por dois métodos; RANKL ou TNF-α. O protocolo também compara a prisão de osteoclastogenesis em ambos os métodos usando anticorpo anti-c-fms.

O processo pelo qual medula óssea é extraída e posteriormente usada para gerar precursores osteoclasto é confiável em produzir grandes quantidades de culturas osteoclast puro que podem ser usadas em múltiplas aplicações a jusante, tais como testes de drogas. O uso de RANKL ou TNF-α para induzir osteoclastogenesis neste protocolo distingue osteoclastogenesis como um processo fisiológico (RANKL) de osteoclastogenesis como um processo patológico (TNF-α), que por sua vez, fornece dois procedimentos alternativos para guiar a decisão das quais uma é superior em termos de reagentes a ser usada em aplicações a jusante. Este protocolo também fornece um método pelo qual podemos determinar uma concentração adequada de anticorpo anti-c-fms, que pode ser utilizada para estudos posteriores envolvidos na reabsorção óssea e doenças osteolíticas.