البلعمه البلاعم السنخية وإزالة البكتيريا في الفئران
Summary
هنا نحن تقرير الأساليب الشائعة لتحليل الدالة متجولة مورين البلاعم السنخية وإزالة البكتيريا من الرئة. دراسة هذه الأساليب البلعمه في المختبر من fluorescein isothiocyanate الخرز والمجراه في البلعمه من “بروتين فلوري أخضر” الزائفة الزّنجاريّة . كما يصف لنا طريقة لمسح P. الزّنجاريّة في الفئران.
Abstract
البلاعم السنخية (هيئة علماء المسلمين) حراسة الفضاء التهاب في الرئة. البلعمه بمقياس الدعم الكلي تلعب دوراً حاسما في الدفاع ضد غزو العوامل الممرضة، وإزالة الخلايا الميتة أو الجسيمات الأجنبية، وفي القرار الردود الملتهبة والأنسجة يعيد البناء، العمليات التي هي توسط المستقبلات السطحية المختلفة من هيئة علماء المسلمين. هنا، نحن التقرير أساليب لتحليل الدالة متجولة لمقياس الدعم الكلي باستخدام استراتيجيات تجريبية وفحوصات في المختبر والمجراه في التفريق بين نمط الاعتراف مستقبلات-وتكملة مستقبلات-، ونادي غاما بوساطة مستقبلات البلعمه. وأخيراً، نحن نناقش أسلوب لإنشاء ووصف نموذج P. الزّنجاريّة الالتهاب رئوي في الفئران لإزالة البكتيريا الحية في تقييم. هذه الاختبارات تمثل الأساليب الأكثر شيوعاً لتقييم وظائف صباحا ويمكن استخدامها أيضا لدراسة وظيفة بلعم وإزالة البكتيريا في الأجهزة الأخرى.
Introduction
هيئة علماء المسلمين هي البالعات المقيم الرئيسي في الحويصلات الهوائية في مرحلة استراحة وواحدة من اللاعبين الرئيسيين من الاستجابات المناعية الفطرية من خلال الاعتراف واستيعاب استنشاق الجراثيم والجسيمات الأجنبية1،2. وذكر أن هيئة علماء المسلمين تعتبر أساسية للتخليص السريع من العديد من مسببات الأمراض الرئوية مثل P. الزّنجاريّة و الالتهاب الرئوي الكلبسيله3،4، حيث غالباً ما يؤدي نقص في البلعمه صباحا في الجهاز التنفسي التهابات، مثل الالتهاب الرئوي الحاد، مما يتسبب في ارتفاع معدلات الوفيات والاعتلال.
هيئة علماء المسلمين أيضا بدء الفطرية الردود التهاب في الرئة بإنتاج السيتوكينات والمستقطبات مثل تنف-α وايل-1β، الذي الحديث المتبادل مع الخلايا الأخرى للبيئة السنخية لإنتاج المستقطبات وتجنيد العَدلات التحريضية، وحيدات، و الخلايا المناعية التكيفية في الرئة5. على سبيل المثال، يساعد إيل-1β التي تنتجها هيئة علماء المسلمين رئيس الوزراء إطلاق سراح chemokine العَدلات CXCL8 من الخلايا الظهارية6. وعلاوة على ذلك، تسهم هيئة علماء المسلمين البلعمه من الكريات البيض النوى apoptotic (بمنس)، فشل الأمر الذي يؤدي إلى تسرب المطرد للإنزيمات داخل الخلايا من بمنس إلى الأنسجة المحيطة مما أدى إلى تلف الأنسجة والتهاب المطول 7 , 8 , 9.
هو باعتراف مباشر بأنماط الجزيئية المرتبطة بالعوامل الممرضة في السطح الممرض المستقبلات التعرف على نمط (برس) من هيئة علماء المسلمين أو بواسطة الربط من مسببات الأمراض أوبسونيزيد مع مستقبلات المستجيب محصنة من هيئة علماء المسلمين وساطة البلعمه بهيئة علماء المسلمين 10-لهذا الأخير، مقياس الدعم الكلي يمكن التعرف على الأهداف التي أوبسونيزيد مع الغلوبولين المناعي (IgG) من خلال ما مستقبلات Fcγ (FcγR) أو مسببات الأمراض مغلفة بشظايا مكملاً، C3b و C3bi، من خلال مستقبلات تكمل بهم (CR)11. بين مستقبلات مكملاً، وأعرب عن الجمهورية التشيكية من فوق عائلة الغلوبولين المناعي (كريج) بشكل انتقائي في الأنسجة الضامة12، ونتيجة الأخيرة وأبرزت دور كريج في البلعمه صباحا في سياق P. الزّنجاريّة الالتهاب الرئوي 13.
العديد من الدراسات الأصلية استخدام أساليب تقييم بلعم البلعمه لوصف الآليات الجزيئية بلعم الدالة14،15. ومع ذلك، تتطلب أساليب مثل البلعمه المجراة في إجراء تقييم كمي دقيق البلعمه. وهنا، يمكننا تلخيص منهجية مفصلة البلعمه على حد سواء في المختبر والمجراه في استخدام fluorescein isothiocyanate (فيتك)-الزجاج الخرز والبروتين P. الزّنجاريّة أخضر نيون (التجارة والنقل)، على التوالي. علاوة على ذلك، يشرح لنا الطريقة للتفريق بين بر-والجمهورية التشيكية–و FcγR بوساطة البلعمه. وأخيراً، نحن تقرير طريقة تميز إزالة البكتيرية في الماوس فيما يتعلق بالتهاب رئوي P. الزّنجاريّة .
Protocol
Representative Results
Discussion
بينما تؤدي وظيفة تبادل غازات، يواجه الرئة إصرار الجسيمات الأجنبية ومسببات الأمراض والمواد المسببة للحساسية. مقياس الدعم الكلي توفر الخط الأول للدفاع بحكم وظيفتها الرئيسية، إلا وهي البلعمه. هيئة علماء المسلمين أيضا بتنسيق مع سائر الخلايا المناعية في تدمير مسببات الأمراض، وفي القرار من ا…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ويدعم هذا العمل منحة R01HL116826 إلى X. Zhao.
Materials
| 18-G Needle | Nipro Medical | CI+1832-2C | Molecular Biology grade |
| 2,7-diaminofluorene (DAF) | Sigma-Aldrich | D17106 | Molecular Biology grade |
| 70% Ethanol | Decon Labs Inc. | 18C27B | Analytical grade |
| 96-well plate | Corning | 3603 | Cell Biology grade |
| ACK lysis buffer | Life Technologies | A10492 | Molecular Biology grade |
| Alexa fluor-488 Zymosan-A-bioparticle | Thermofisher Scientific | Z23373 | Molecular Biology grade |
| C5 deficient serum | Sigma-Aldrich | C1163 | Biochemical reagent |
| Centrifuge | Labnet International | C0160-R | |
| Cytospin 4 Cytocentrifuge | Thermofisher Scientific | A78300101 Issue 11 | |
| DMEM Cell Culture Media | Gibco | 11995-065 | Cell Biology grade |
| FBS | Atlanta Biologicals | S11550 | Cell Biology grade |
| Flow Cytometer | BD Biosciences | FACSCalibur | |
| Flow Jo Software | FlowJo, LLC | ||
| Forceps | Dumont | 0508-SS/45-PS-1 | Suitable for laboratory animal dissection |
| FITC-carboxylated latex beads | Sigma-Aldrich | L4530 | Cell Biology grade |
| GFP-P. aeruginosa | ATCC | 101045GFP | Suitable for cell infection assays |
| Glass bottom dish | MatTek Corp. | P35G-0.170-14-C | Cell Biology grade |
| High-Pressure Syringe | Penn-Century | FMJ-250 | Suitable for laboratory animal use |
| Homogenizer | Omni International | TH-01 | |
| Hydrogen peroxide | Sigma-Aldrich | H1009 | Analytical grade |
| Inverted Fluorescence Microscope | Olympus | IX73 | |
| Ketamine Hydrochloride | Hospira | CA-2904 | Pharmaceutical grade |
| Shandon Kwik-Diff Stains | Thermofisher Scientific | 9990700 | Cell Biology grade |
| LB Agar | Fisher Scientific | BP1425 | Molecular Biology grade |
| LB Broth | Fisher Scientific | BP1427 | Molecular Biology grade |
| MicroSprayer Aerosolizer | Penn-Century | IA-1C | Suitable for laboratory animal use |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | Reagent grade |
| PBS | Gibco | 20012-027 | Cell Biology grade |
| rabbit anti-SRBC-IgG | MP Biomedicals | 55806 | Suitable for immuno-assays |
| rabbit anti-SRBC-IgM | Cedarline Laboratories | CL9000-M | Suitable for immuno-assays |
| Scissors | Miltex | 5-2 | Suitable for laboratory animal dissection |
| Small Animal Laryngoscope | Penn-Century | LS-2 | Suitable for laboratory animal use |
| Sodium Dodecyl Sulfate (SDS) | BioRad | 1610301 | Analytical grade |
| Spring Scissors (Med) | Fine Science Tools | 15012-12 | Suitable for laboratory animal dissection |
| Spring Scissors (Small) | Fine Science Tools | 91500-09 | Suitable for laboratory animal dissection |
| sheep red blood cells (SRBCs) | MP Biomedicals | 55876 | Washed, preserved SRBCs |
| Urea | Sigma-Aldrich | U5378 | Molecular Biology grade |
| Xylazine | Akorn Animal Health | 59399-110-20 | Pharmaceutical grade |
References
- Hussell, T., Bell, T. J. Alveolar macrophages: plasticity in a tissue-specific context. Nature Reviews Immunology. 14, 81-93 (2014).
- Belchamber, K. B. R., Donnelly, L. E. Macrophage Dysfunction in Respiratory Disease. Results and Problems in Cell Differentiation. 62, 299-313 (2017).
- Broug-Holub, E., et al. Alveolar macrophages are required for protective pulmonary defenses in murine Klebsiella pneumonia: elimination of alveolar macrophages increases neutrophil recruitment but decreases bacterial clearance and survival. Infection and Immunity. 65, 1139-1146 (1997).
- Knapp, S., et al. Alveolar macrophages have a protective antiinflammatory role during murine pneumococcal pneumonia. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 167, 171-179 (2003).
- Bhatia, M., Zemans, R. L., Jeyaseelan, S. Role of chemokines in the pathogenesis of acute lung injury. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 46, 566-572 (2012).
- Marriott, H. M., et al. Interleukin-1beta regulates CXCL8 release and influences disease outcome in response to Streptococcus pneumoniae, defining intercellular cooperation between pulmonary epithelial cells and macrophages. Infection and Immunity. 80, 1140-1149 (2012).
- Greenlee-Wacker, M. C. Clearance of apoptotic neutrophils and resolution of inflammation. Immunological Reviews. 273, 357-370 (2016).
- Haslett, C. Granulocyte apoptosis and its role in the resolution and control of lung inflammation. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 160, 5-11 (1999).
- Cox, G., Crossley, J., Xing, Z. Macrophage engulfment of apoptotic neutrophils contributes to the resolution of acute pulmonary inflammation in vivo. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 12, 232-237 (1995).
- Groves, E., Dart, A. E., Covarelli, V., Caron, E. Molecular mechanisms of phagocytic uptake in mammalian cells. Cellular and Molecular Life Sciences. 65, 1957-1976 (2008).
- Mosser, D. M., Zhang, X. Measuring Opsonic Phagocytosis via Fcγ Receptors and complement receptors on macrophages. Current Protocols in Immunology. , (2011).
- He, J. Q., Wiesmann, C., van Lookeren Campagne, M. A role of macrophage complement receptor CRIg in immune clearance and inflammation. Molecular Immunology. 45, 4041-4047 (2008).
- Nagre, N., et al. Inhibition of Macrophage Complement Receptor CRIg by TRIM72 Polarizes Innate Immunity of the Lung. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 58 (6), 756-766 (2018).
- Miksa, M., Komura, H., Wu, R., Shah, K. G., Wang, P. A Novel Method to Determine the Engulfment of Apoptotic Cells by Macrophages using pHrodo Succinimidyl Ester. Journal of Immunological Methods. 342 (1-2), 71-77 (2009).
- Su, H., Chen, H., Jen, C. J. Severe exercise enhances phagocytosis by murine bronchoalveolar macrophages. Journal of Leukocyte Biology. 69, 75-80 (2001).
- Amiel, E., Lovewell, R. R., O’Toole, G. A., Hogan, D. A., Berwin, B. Pseudomonas aeruginosa. evasion of phagocytosis is mediated by loss of swimming motility and is independent of flagellum expression. Infection and Immunity. 78, 2937-2945 (2010).
- Giannoni, E., Sawa, T., Allen, L., Wiener-Kronish, J., Hawgood, S. Surfactant Proteins A and D Enhance Pulmonary Clearance of Pseudomonas aeruginosa. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 34, 704-710 (2006).
