Меркель клеток ПОЛИОМАВИРУСОВ инфекции и обнаружения

Меркель клеток ПОЛИОМАВИРУСОВ (MCPyV) является небольшой, двуцепочечной ДНК вируса, которая была связана с редким, но агрессивных кожи рак, Меркель клеток карциномы (MCC)^1,2. MCC, около 33%, показатель смертности превышает меланомы^3,4. MCPyV имеет циркулярный геном ~ 5 КБ^1,5 пополам некодирующих регулирования региона (NCRR) в ранний и поздний кодирования регионах¹. NCRR содержит вирусного происхождения репликации (ОРИ) и двунаправленный промоутеров для вирусных транскрипции^6,7. Начале региона кодирует опухолевого антигена белки, называемые большой T (LT), небольшой T (ул), 57kT, альтернативные ORF LT (альт), а также ауторегуляторных Мирна^1,8,9,10. Конце региона кодирует белки VP1 капсида и VP2^11,12,13. LT и sT являются наиболее изученных MCPyV белков и продемонстрировали для поддержки репликации вирусных ДНК и MCPyV индуцированной tumorigenesis⁵. Клоновых интеграция MCPyV ДНК в геном хост, который наблюдается в до 80% КЦС, скорее всего является причинным фактором для развития вируса позитивные опухоли^14,15.

Распространенность MCC утроилось за последние двадцать лет¹⁶. Бессимптомной инфекции MCPyV также широко распространена в общей численности населения^17,18,19. С увеличением числа диагнозов MCC и высокая распространенность инфекции MCPyV существует необходимость улучшить наше понимание вируса и его онкогенные потенциал. Однако многие аспекты MCPyV биологии и онкогенных механизмы остаются плохо понимали²⁰. Это главным образом потому, что MCPyV реплицирует плохо в установленных клеток линии^{11,12,21,,2223} и, до недавнего времени, поддерживающие MCPyV клеток кожи инфекция не обнаружили²². Механистический исследования полностью расследовать MCPyV и его взаимодействие с клетки хозяина сдерживаются отсутствием системы культуры клеток для размножения вируса⁵.

Мы обнаружили, что первичный фибробластов дермы (HDFs) изолированы от новорожденных человека плоть поддержки надежных MCPyV инфекции как в пробирке и ex vivo²⁴. Из этого исследования мы создали первый модель инфекции культуры клеток для MCPyV²⁴. Опираясь на эту модель системы, мы показали, что индукция матрицы металлопротеиназы (СПП) генов WNT/β-катенина сигнальный путь и другие факторы роста стимулирует MCPyV инфекции. Кроме того мы обнаружили, что FDA утвержденных MEK антагонист trametinib эффективно подавляет MCPyV инфекции^5,25. Из этих исследований мы также создали набор протоколов для изоляции фибробластов дермы^24,25, подготовка MCPyV вирионы^11,12, выполняя MCPyV инфекции на фибробластов дермы ^{24 , 25} и детектирования MCPyV белков, если окрашивание²⁶. Кроме того мы адаптированы на месте ДНК гибридизации цепной реакции (HCR) технология²⁷ для разработки высокочувствительных рыбы техника (HCR-ДНК рыбы) для обнаружения MCPyV ДНК в клетках, инфицированных кожи человека. Эти новые методы будет полезным для изучения инфекционных цикл MCPyV, а также клеточного ответа на инфекцию MCPyV. Клетки водохранилище природного хозяина, которые поддерживают MCPyV инфекции и клетки, которые порождают MCC опухоли остаются неизвестными. Изучить различные типы клеток человека для выявления водохранилище клетки и происхождения опухоли MCC могут применяться методы, которые мы опишем в этой рукописи. Наши установленные методы, такие как HCR-ДНК рыбы, также могут быть использованы в обнаружении других ДНК вирусов опухоли и характеристика принимающей ячейки взаимодействий.