Очистка и аналитика моноклонального антитела от китайских яичников хомяка с помощью автоматизированной системы микробиореактора

1. Очищение антител ПРИМЕЧАНИЕ: Буфер равновесия для внутренних антител составляет 25 мМ Трис, 100 мМ NaCl, рН 7.5. Используемый буфер элюции составляет 0,1 м уксусной кислоты. Буферы и мислины (Белок А) зависят от очищенных антител. Объем колонны эквивалентен высоте кровати министы. Объем используемой мобильной фазы определяется с точки зрения объема столбцов. Инициализация системы очистки Откройте программное обеспечение, подключенное к системе очистки. Используя инструкции ручной работы, уравновешивать столбец с буфером равновесия при скорости потока 2 мл/мин в течение 40 мин. Остановите ручной запуск после равновесия. В сборщике фракций поместите 15 мл конических трубок для сбора очищенных антител и конических труб 50 мл для сбора протекателей во время высокой промывки соли. Убедитесь, что сборщик фракции сбросить в начальное положение, открыв и закрыв фракционный коллектор перед началом запуска. Сборщик фракций поддерживается при 7 градусах Цельсия.ПРИМЕЧАНИЕ: Сборщик фракции может быть сброса вручную под вкладкой Fraction Collector в настройках,как для 15 мл, так и для 50 мл труб. Инъекция образцаПРИМЕЧАНИЕ: Собранная жидкость культуры клеток, используемая в следующих процедурах, была получена изклеток китайского хомяка яичников, культивированных в автоматизированных микро-биореакторах 9. Добавьте 0,22 мкм фильтрованную жидкость культуры клеток урожая к пустому шприцу 12 мл, конец сопла которого ограничен. Держа шприц с насадкой лицом вниз, вставьте шприц поршень до небольшой части поршень дюйма Убедившись, что жидкость не течет, поверните шприц с насадкой вверх и снимите крышку. Тем не менее проведение шприц с соплом вверх, нажмите цилиндр, чтобы рассеять любой воздух, пока жидкость клеточной культуры находится на кончике сопла. Вставьте сопло шприца в порт ручного впрыска на системе очистки и закрутите, чтобы затянуть. Нажмите вниз на поршень, пока весь образец вводится и виден в прилагается 10 мл большой объем образца цикла. Откройте файл сохраненного метода. Сохранить файл результата в требуемом месте и указать имя файла при запросе. Хит запустить после образца был введен в большой цикл образца объема. Запуск метода очистки Выберите сохраненный метод и нажмите на кнопку запуска, когда вызвано инструментом программного обеспечения (шаг 1.2.5).ПРИМЕЧАНИЕ: Система настроена для выполнения следующих шагов. Пользователю не нужно ничего делать во время работы инструмента. Равновесие столбца с тремя громкостями столбцов (CVs) буфера равновесия при скорости потока 2 мл/мин. Как только столбец будет уравновезен, система, используя большой цикл образца объема, введет образец в столбец со скоростью потока 1 мл/мин. Падение УФ-сигнала на 280 нм указывает на то, что образец завершен. Вымойте столбец с буфером равновесия на скорости потока 2 мл/мин, пока уф-сигнал не упадет ниже 25 мАС. Используйте четыре резюме 25 мМ Tris с 1 M NaCl при рН 7,5 для выполнения вторичной высокой промывки соли при скорости потока 2 мл/мин. Коллектор фракции системы соберет любой протеин/ДНК который приходит с колонки во время мытья соли в пробках 50 mL. Нанесите пять резюме буфера elution со скоростью потока 1 мл/мин, чтобы снять антитела с столбца. Соберите eluate в 15 мл труб на основе УФ-сигнала; когда сигнал UV 280 превышает 35 мАС, начинается сбор; сбор заканчивается, когда сигнал опускается ниже 50 мАС; это называется пиковой резки.ПРИМЕЧАНИЕ: Пик резки обеспечивает нормализацию elution профилей и, чтобы избежать elution пик хвост, который может содержать белковые агрегаты24. Вымойте столбец с помощью трех резюме буфера равновесия. Пробег заканчивается после шага стирки. После elution немедленно нейтрализовать очищенный белок, используя 1 M Tris базы до рН в размере 5,5 евро. Измерьте концентрацию белка с помощью микротома УФ-Вис спектрофотометра на 280 нм и 260 нм и храните при 4 градусах Цельсия. Концентрируйте очищенные антитела с помощью центробежных единиц (шаг 2). Затем подвергните очищенное антитело гликан-анализу с помощью LC-MS и после анализа профиля агрегации с помощью SEC-MALS (шаги 3 и 4).ПРИМЕЧАНИЕ: Очищенные антитела не должны быть заморожены без дальнейшего буферного обмена, так как частые циклы замораживания-оттепели могут вызвать агрегацию и осадки. 2. Концентрация очищенных антител ПРИМЕЧАНИЕ: Буфер Tris-ацетата 0.1 M уксусной кислоты нейтрализован с 1 M Tris Base до рН в 5,5 евро. Вставьте 100 kDa фильтры в центрифуговых труб. Вымойте фильтры с 500 л двойной дистиллированной воды. Центрифуга в течение 10 мин при температуре в комнате 14 000 х г (RT). Повторите этот шаг дважды. Откажитесь от фильтрата. Перенесите промытые фильтры в свежие центрифуги и добавьте 500 зл и тока образца к каждому фильтру. Центрифуга в течение 10 мин при 14000 х г. Перевернуть фильтр в свежую спиновой трубку. Центрифуга в течение 2 мин при 1000 х г для сбора концентрированного образца. Определить концентрации образцов с помощью уф-вис-спектрофотометра. Пустой спектрофотометр с помощью раствора буфера Tris-ацетата. Используйте коэффициент вымирания белка 1,37 мл (мгзсм)-1 при 280 Нм для раствора IgG 1% (% м/в). Используйте концентрированный образец для подготовки рабочего раствора 12,5 л 2 мг/мл для гликанового анализа и 30 л рабочего раствора для SEC-MALS.ПРИМЕЧАНИЕ: Протокол можно приложить здесь. Образцы должны быть охлаждены при 4 градусах Цельсия. При концентрации 2 мг/мл эти образцы должны быть стабильными в течение по крайней мере трех месяцев при 4 градусах Цельсия, в то время как более высокие концентрации могут выпасть. 3. Анализ N-гликанов с использованием масс-спектроскопии N-Гликан маркировки и изоляции Начните с концентрации антител 2 мг/мл в соответствующем буфере, таком как нейтральный фосфат натрия, цитрат или буфер HEPES. Подготовьте нетронутый стандарт mAb (например, NIST mAb) на уровне 2 мг/мл для обработки вместе с экспериментальными образцами, чтобы служить положительным контролем.ПРИМЕЧАНИЕ: Антитела должны быть в окончательном буфере, не содержащем SDS и менее 0,1 мМ нуклеофилов (таких как Tris, DTT, глицин или гистидин). SDS в буфере выборки должны быть удалены. Если нуклеофилы находятся в буфере, то разбавьте их вниз или выполнить буферный обмен, так как они будут мешать комплекту. Общий протокол снабжен набором гликанов. Разбавить 7,5 л антител с 15,3 л воды LC-MS-класса в 1 мл труб, обеспеченных комплектом, а затем денатурировать с помощью 6 qL 5% раствора фермент-дружественных и MS-дружественных сурфактант при 90 кв КС в течение 3 мин. Охладите образцы в течение 3 мин до комнатной температуры (RT). Затем добавьте 1,2 злиц PNGase F и инкубировать в течение 5 мин при 50 градусах Цельсия. После охлаждения 3 мин на RT, этикетка расщепляется N-гликанов, добавив 12 л. флуоресцентного пометки реагента, растворенного в ангирусном диметилформамидина (DMF) и ждать 5 мин. Разбавить помечены N-гликан смеси с 358 л ацетонитрила (ACN). Поместите гидрофильные взаимодействия хроматографии (HILIC) пластины в вакууме многообразия с оболями и отходов лоток. Используйте многоканальный пипетку для большого количества образцов. Состояние скважин с 200 л воды, где вакуум регулируется так жидкость будет принимать 15-30 с пройти через hilIC мизины. Равновесие с 200 зл и 85% ACN до загрузки ACN-разбавленной маркировкой гликановой смеси (400 л), применяя вакуум после того, как каждая новая жидкость добавляется в скважины. Вымойте с помощью 600 л л 1% для мковой кислоты (ФА)/90% ACN дважды. Замените лоток для отходов на 600 трубк для сбора. Выделите помеченные N-гликаны с буфером elution SPE (3 elutions по 30 Л каждый) в трубки для сбора. Разбавить объединенные эмулямы с 310 Зл из разбавитель образца DMF/ACN. Pipette образцы в авто пробоотборник флаконы, чтобы быть готовым к флуоресценции (FLR)-MS анализа.ПРИМЕЧАНИЕ: Эти образцы стабильны при хранении при -80 градусов по Цельсию в течение не менее 1 месяца. Храните пластину HILIC в оригинальной упаковке, заклеенный лентой и внутри дезикатора для использования в будущем. LC-MS анализ помеченных N-гликанов Проанализируйте маркированные образцы N-гликановой элуции на системе Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC) в сочетании с детектором флуоресценции и масс-спектротером для четырехборья (З-ТоФ). Используйте столбец, одобренный для хроматографического разделения помеченных гликанов и тепла до 60 градусов по Цельсию во время разделения.ПРИМЕЧАНИЕ: Столбец должен быть промыт с 60% ацетонитрила и 40% H2O перед использованием: 50 резюме до первого использования или 20 резюме, если столбец был использован ранее. Используйте 50 мМ аммония formate (AmF) (сделано с мобильным концентратом фазы) и 100% LC-MS-класса ACN для мобильных фаз. AmF чувствителен к изменениям рН и может быть пригоден к удобоввввв в течение 1 месяца после смешивания. Установите начальную скорость потока до 0,4 мл/мин, при этом градиент LC обеспечивает увеличение AmF во время фазы выдвижения. Установите детектор FLR для измерения на EX 265/EM 425 нм с частотой отбора проб 2 Гц. Установите режим положительной ионной чувствительности MS1, с массой 100-2000 далтонов (Da), время сканирования 0,25 секунды и приобретение данных континуума. Используйте лейцин энкефалин (2 нг/Л в 50% ACN/0.1% FA) для внутренней массовой ссылки, в режиме “Не применяйте коррекцию”.ПРИМЕЧАНИЕ: Внутренняя коррекция ссылки массы будет применена позже при обработке данных. Повторно приостановить dextran лестницы последовательно в 22,5 зл h2O, 25 Зл Л DMF и 52,5 Л ACN. Приготовьте 10 аликвот для хранения при температуре -80 градусов по Цельсию, так как лестница не стабильна более чем на 24 ч при более высоких температурах (комнатная температура, 4 градуса по Цельсию). Dextran лестница деградирует после более чем одного цикла замораживания оттепели. Поместите образцы в авто сэмплер установлен до 10 градусов по Цельсию. Загрузите флакон dextran лестницы вместе с образцами, так как информация о времени хранения лестницы будет использоваться для заданий, в то время как массовая информация, используемая для проверки идентификационных данных. Используйте 10 инъекций для образцов и 7,5 инъекций для лестницы. Инъекционные образцы в тройном. Запустите загруженный метод. N-Гликан идентификации для данных LC-MS Выполняйте обработку данных с помощью программы, оптимизированной для гидрофильной взаимодействия хроматографии флуоресценции масс-спектрометрии (HILIC-FLR-MS) данных. Применить внутренние коррекции ссылки массы в рамках программы. Обозначьте инъекции dextran лестницы как “Стандарт” в примере информации. В методе анализаустановите время удержания соединения разделения на те из соединений лестницы, которые были обнаружены во время бега. Чтобы обеспечить возврат area % для идентифицированных гликанов, измените метод анализа: Под вкладкой Обработка, нажмите Параметры количественной оценки – Калибрит и установите “Тип соответствия кривой калибровки” на “Относительный ответ (%)” 4. Анализ агрегации антител с использованием SEC-MALS Подготовка образцов Перенесите 3,5 мг/мл (шаг 2) разбавленного белка на флакон со стеклянной вставкой 150 л. Используйте гель загрузки наконечник пипетка в нижний колокол вставки, чтобы избежать введения пузырьков. Крышка флакон с септой крышкой и немедленно проанализировать. Храните при 4-c при анализе позже. Конфигурация и уравновесие SEC-MALSПРИМЕЧАНИЕ: Анализ агрегации на SEC-MALS, настроенной с помощью сверхвысокой жидкой хроматографии (UHPLC) с детектором MALS и детектором рефракционных индексов, управляемым программным обеспечением MALS. Настроили файл метода в программном обеспечении UHPLC для управления системой UHPLC, установив скорость потока до 0,4 мл/мин с мобильной фазой 1x фосфатного буферного соления (PBS) (разбавленного от 10x), объем впрыска до 5 л, температура колонки до 25 градусов по Цельсию , и детектор диод Array (DAD) для мониторинга 280 нм. Установите время выполнения до 20 мин. Выравнь систему, по крайней мере 4 ч до любого анализа образца. Интерфейс между UHPLC и multi Angle Light Scattering – Refractive Index (MALS-RI) требует использования аналогового вывода на DAD. Установите затухание DAD до 1000 mAU в файле метода DAD и настройке AU/UV до 1 (УФ-инструмент;Каналы;Канал 1). Включите лампу DAD за 30 минут до начала анализа и установите длину волны до 280 нм. В то же время, очистить Рефракционный индекс (RI) эталонной ячейки в течение 15 минут или до тех пор, пока базовый установится, а затем закрыть справочную ячейку. Настроили последовательность программного обеспечения SEC-MALS, установив время сбора до 12 мин, объем впрыска до 5 л, dn/dc до 0,185 мл/г, коэффициент вымирания A280, если ранее экспериментально определено или до 1,37 мл .)-1, и концентрация Образец. Нажмите Run и ждать “ожидание вводить” диалог появится на экране.ПРИМЕЧАНИЕ: Коэффициент вымирания A280 специфичен для белка, интересуемого, и должен определяться экспериментально. Назначьте список образцов в программном обеспечении UHPLC в том же порядке, что и в программном обеспечении MALS-RI, и отправьте его.ПРИМЕЧАНИЕ: Важно запустить проверку пригодности системы до и после запуска. Бойвин сыворотки альбумин обычно используется для проверки пика расширения, знак того, что колонка SEC, возможно, потребуется очистка или замена. Та же стандартная инъекция BSA может быть использована для определения выравнивания сигналов, расширения пика и нормализации детекторов. Агрегированный анализ с программным обеспечением MALS Нажмите на вкладку отмеченные Процедуры. Указать минимальный уровень требуемого уровня? ни один из них, как правило, является достаточным. Убедитесь, что базовые линии были нарисованы правильно и при необходимости корректируются для КАНАЛов LS1, LS2, LS3, RI и УФ-излучения. Установите пиковую область интереса. Просмотрите распределение молекулярной массы, чтобы подтвердить, что так называемые пики содержат частицы аналогичного размера. 5. Анализ варианта заряда Подготовка и маркировка образцов Начните с 80 л антитела 3,5 мг/мл. Обезсоль образец с помощью 0,5 мл десолютирующей колонны (7k MWCO). Подготовьте колонку, сначала отсвативсив нижнюю пробку, затем ослабив верхнюю пробку и поместив ее в микроцентрифугу мощностью 1,7 мл. Центрифуги опреснительной колонки в течение 1 мин при 1500 х г.ПРИМЕЧАНИЕ: Отметьте внешний вид колонны точкой, чтобы она была помещена в исходную ориентацию для следующих шагов. Перенесите колонку в новую микроцентрифужную трубку. Добавьте 80 л разбавленного белка в верхнюю часть столбца. Выровнять столбец с исходной ориентацией. Центрифуга в течение 2 мин при 1500 х г. Удалите образец из центрифуги, отбросьте опреснительную колонку и хорошо перемешайте образец.ПРИМЕЧАНИЕ: Дезалостирование требуется только в том случае, если матрица образца содержит первичные амины, эксциенты, которые будут возмущать образец электрофорез, или другие несовместимые вещества. Разбавить образец до конечной концентрации 2 мг/мл в объеме 25 л и добавить 5 зл и l буфера маркировки (см. Таблица материалов: Набор реагента chargeVariant) в 96-хорошей пластине. Подготовка маркировки реагента путем разбавления необходимого количества маркировки реагента (см. Таблица материалов: Заряд Вариант реагента Kit) 1:30 в диметилформамид. Инкубировать образец в течение 10 минут при комнатной температуре вдали от света.ПРИМЕЧАНИЕ: Важно, чтобы оттаять, а затем немедленно использовать этот реагент и использовать его в течение 10 минут смешивания с DMF. После инкубации добавьте 60 л реагента и хорошо перемешайте путем трубачания. Накройте тарелку уплотнением и центрифуги яму на 1000 х г в течение 1 мин. Подготовка чипа варианта заряда Подготовьте чип Charge Variant, удалив раствор для хранения и стирку колодцев 1, 3, 4, 7, 8 и 10 с водой. Затем замените воду с pH 7.2 работает буфер (см. Таблица материалов: Заряд Вариант реагента Kit). Добавьте 750 кЛ рН 7.2 бегущего буфера к буферной трубке и поместите буферную трубку в указанное место на верхнем левом углу лотка образца. Теперь снимите уплотнение пластины с 96-хорошей пластины, нажмите Разгрузить плиту на пользовательском интерфейсе инструмента, и вставьте пластину в лоток образца GXII.ПРИМЕЧАНИЕ: для этого анализа использовались буферы pH 7.2. pH 5.6-7.2 буферы могут быть использованы в зависимости от белка pI. При использовании более низких буферов pH может потребоваться большевремени времени выполнения образца. Нажмите кнопку «Разгрузить чип» на пользовательском интерфейсе. Убедитесь, что электроды свободны от каких-либо частиц, а если нет, очистить с ворсом свободной тампоном. При вставке чипа убедитесь, что окно в центре чипа свободно частиц или пятен. При необходимости, очистить с ворсом мягкой тканью.ПРИМЕЧАНИЕ: При работе с капиллярными электрофорасными чипами, удалите буфер вакуумным аспиризацией, а затем немедленное добавление следующего раствора для предотвращения высыхания скважин. Чтобы свести к минимуму введение пузырьков, наниденьте технику обратного трубача. При обработке чипа помните о хрупком капилляре, простирающихся от нижней части чипа, убедившись, что он не высохнет и не прорвется через грубую обработку. Закройте крышку к чип-камере и выберите анализ HT Protein Charge Variant. Нажмите кнопку “Запуск”. Следуйте подсказкам, чтобы выбрать образец скважин, тип пластины, время асссы (68, 90 или 100 с) и имя файла. Нажмите Кнопка Начало в конце запросов. Чип очистки требует промывки каждого колодца 2x с водой, а затем добавление хранения буфера (см. Таблица материалов: Заряд Вариант реагента Kit). Оказавшись в буфере хранения, замените чип в инструменте и, по промединиваемому, выберите анализ заряда белка HT. На главном экране выберите Wash на пользовательском интерфейсе. После завершения, удалить чип, протрите электроды с водой и без ворса тампон, и хранить чип на 4 градусов по Цельсию. Анализ варианта заряда Откройте программное обеспечение для анализа приборов. Импорт перспективе, перейдя к Файла)gt;Импорт данных файл… и нажав на нужный файл .gxd. Только название будет перенесено на программное обеспечение, так что переименование скважин выгодно (Инструменты Выберите файлы, которые будут экспортироваться, удерживая сдвиг при выборе файлов. Нажмите Файл»gt;Экспорт… и выберите поле Raw Data, а затем поле формата A. Откройте вкладку Browse Projects в программном обеспечении для анализа. Нажмите на базу данных и импортные данные… Файлы CDF. После импорта перейдите на вкладку «Инъекции», выберите файлы для анализа, нажмите правой кнопкой мыши и перейдите к Process… В окне, которое всплывает, выберите флажок рядом с process и выберите радиополе “Использование заданного метода обработки” и желаемого метода обработки из выпадающей коробки. В выпадающем поле сразу ниже с надписью “Как:” выберите калибровку и количественный. После обработки перейдите на вкладку «Результаты» и проверьте интеграцию хроматограмм.ПРИМЕЧАНИЕ: Метод обработки должен быть проверен для каждого метода. В качестве отправной точки параметры, используемые для текущего метода обработки, включены в дополнительный файл.ПРИМЕЧАНИЕ: Экспорт данных может осуществляться в форме отчета или экспортироваться только пиковая количественная оценка. Это может быть сделано в то же время, как обработка или из окна результатов. 6. Анализ аминокислот Настройка стандартной кривой для абсолютной количественной оценки аминокислот по LC-MS Подготовка расширенной аминокислоты (EAA) смесь путем растворения 59,45 мг Asn, 59,00 мг Hyp, 65,77 мг Глн, и 91,95 мг Trp в 25 мл 0,1 N HCl. Окончательная концентрация каждой аминокислоты в смеси EAA составляет 18 нмоль/Л. Подготовьте раствор запаса внутреннего стандарта (ISTD), растворив 58,58 мг Нва и 44,54 мг Сар в 50 мл HCl. Подготовка полного аминокислоты стандартов путем объединения аминокислоты бульон решение, содержащее Ала, Asp, Arg, Cys, Glu, Gly, Его, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val на 1 нмоль / Л каждый с EAA смесь для окончательного аминокислоты концентрации 900 , 225, 90, 22,5, и 9 моль / Л. Добавьте подготовленный запас ISTD к аминокислотным стандартам для конечной концентрации либо 90 пмоль/Л, либо 900 моль/Л для создания “низких” и “высоких” внутренних стандартов для использования в качестве позитивного контроля для метода. Поместите концентрации аминокислот в пробных флаконах в автосэмпере UPLC. Создание кривой калибровки (от 9 до 900 моль/Л) в программном обеспечении прибора на основе стандартных концентраций аминокислот с использованием следующих инструкций. Используйте режим ионизации электроспрея (ESI) в режиме положительной чувствительности в сочетании с UPLC для анализа нетронутых аминокислот. Для хроматографического разделения используйте нормальный фазовый столбец, изготовленный для разделения аминокислот. Подготовьте следующие буферы с реагентами класса масс-спектрометрии: ацетонитрил – 0,1% для метакислоты и B – 100 мМ аммония formate. Установите скорость потока LC до 0,6 м/мин, а столбик и температуру колонки – до 40 градусов по Цельсию. Используйте следующие 15-минутные условия градиента для разъединения аминокислот: 14% B (0-3 мин), 14-100% B (3-10 мин), 100% B (10-13 мин), 100-8% B (13-14 мин), 8% B (14-15 мин). Используйте колонки “Тип образца” и “Conc A” в программе приобретения MS для создания кривой калибровки для будущего анализа сырого биореактора в программе количественной оценки. Чтобы эти столбцы отображались в программе приобретения, используйте команду Customize Display при нажатии правого нажима на верхнем меню. Тип образца для стандартов аминокислот будет “Стандартный”, в то время как образцы носителей будут “Аналит”. Заполните столбец “Conc A” с числовыми концентрациями стандартов в требуемых единицах (экс: пмоль/Зл). Выполнить подготовленные аминокислоты стандартных концентраций по крайней мере в два раза. Проверить, что прибор UPLC и масс-спектрометр работают должным образом, проверяя пики ISTD. Для создания метода количественной оценки (файл «Edit Method» — «Метод отодвигать» в приложении к количественной оценке). Определите все аминокислоты, представляющие интерес в применении квантитарии, такие как значение соединения, значение м/з и ожидаемое время удержания. Измените параметры интеграции метода здесь. Используйте созданный метод аминокислот на стандартных образцах для создания кривой калибровки. Эта кривая может быть экспортирована в файл q.cdb для использования в образцах мультимедиа с помощью команды Экспорта и Калибрации… В приложении к количественной оценке сохраните желаемый макет в файле q.qlt, чтобы применить сярпричку к будущим наборам данных с помощью «Сохранить Layout As…». Имя (имя инъекций), область и Conc являются наиболее важными выходными столбиками. Аминокислотный анализ сырого биореакторного носителя от LC-MS Centrifuge сырой биореактор средств на 1,962 х г в течение 5 минут и пройти через 0,22 мкм фильтра. Последующие с перхлорной кислоты очистки для удаления белка и твердых частиц: смешать фильтрованные биореакторы с 0,4 N HClO4 в соотношении 1:1 и центрифуги на 14700 х г в течение 5 минут на RT. Соберите уточненных средств массовой информации в автосэмпемер флаконы.ПРИМЕЧАНИЕ: Отрегулируйте объем инъекций по мере необходимости, чтобы концентрации аминокислот попали в диапазон калибровки. В зависимости от прибора, объем инъекций может быть скорректирован между 0,1 л и 10 Зл. Запуск образцов мультимедиа в трипликате по LC-MS. Используйте “Процесс образцы” в рамках программы количественной оценки вместе с методом (.mdb) и калибровки файла (.cdb). Метод и кривая калибровки будут автоматически применены к пробам сырой мультимедиа в приложении кколичественности после завершения всех инъекций. Для экспорта данных для анализа в другой программе(например, в электронной таблице) используйте команду «Печать» и создайте файл q.xps или q.pdf.