Questo documento utilizza un flusso cytometry-test per librerie di schermo di inibitori chimici per l’identificazione di inibitori e ai loro obiettivi che influenzano la segnalazione del ricevitore della T-cellula. I metodi descritti qui possono essere espanso per high throughput screening.
T-cell receptor (TCR) signaling pathway comprende una moltitudine di mediatori che trasmettono i segnali al momento dell’attivazione del TCR. Diverse strategie sono state proposte e attuate per l’identificazione di nuovi mediatori di segnalazione TCR, che migliorerebbe la comprensione dei processi di T-cellula, compreso l’attivazione e selezione timica. Descriviamo un test di screening che consente l’identificazione di molecole che influenzano TCR di segnalazione basato sull’attivazione di sviluppare timociti. Segnali di forte TCR causa timociti in via di sviluppo attivare il macchinario apoptotico in un processo noto come selezione negativa. Attraverso l’applicazione degli inibitori della chinasi, quelli con gli obiettivi che riguardano la segnalazione TCR sono in grado di ignorare il processo di selezione negativa. Il metodo descritto in questo documento può essere utilizzato per identificare gli inibitori delle chinasi canoniche con ruoli stabiliti nelle vie di segnalazione TCR e anche gli inibitori delle chinasi nuove ancora ad essere istituito nelle vie di segnalazione TCR. La strategia di screening qui può essere applicato agli schermi di un throughput più elevato per l’identificazione di nuovi bersagli nella segnalazione di TCR.
Le cellule T sono un lignaggio dei linfociti che svolgono un ruolo fondamentale nel mantenimento dell’immunità adattativa. Essi esprimono TCR, che permette loro di riconoscere i loro ligandi, costituito da una molecola di complesso maggiore di istocompatibilità (MHC) di complessi con un peptide associato, che si trovano sulle superfici del presentanti l’antigene (APCs) di cellule. L’attivazione del TCR via attraverso l’interazione di TCR/MHC di segnalazione è cruciale per l’attivazione delle cellule T e sviluppo1.
Nello sviluppo delle T-cellule, derivate da midollo osseo di cellule staminali ematopoietiche (HSCs) migrano al timo, dove subiscono differenziazione e passare attraverso le fasi di progressione di T-cellula lineage2. Timociti di doppio-positivi (DP), che esprimono sia il CD4 e CD8 corecettori, impegnano con self-peptide/MHC sulle APCs. Timociti con una moderata affinità per loro ligandi self-peptide/MHC maturo per diventare timociti (SP) CD4 o CD8 singolo-positivi, un processo definito come selezione positiva. Al contrario, timociti che ricevono un’eccessiva stimolazione del TCR attraverso l’auto-peptide/MHCs subiscono apoptosi tramite selezione negativa3,4. Questo processo di apoptosi indotta da stimolazione, caspasi-dipendente può essere imitato in vitro stimolando i timociti, ad esempio con perline rivestite con anticorpo anti-CD3/285. Cellule T mature che passano il processo di selezione vengono attivate da ligandi non-self-peptide/MHC da APC nella periferia. Self-peptide/MHCs sono ancora rilevanti per cellule di T periferiche, nel contesto del tonico di segnalazione per la sopravvivenza e proliferazione omeostatica, la differenziazione dei linfociti T helper e il potenziamento delle risposte delle cellule T per non-self-peptide/MHCs attraverso coagonism6,7,8,9. Associazione di TCR ad alta affinità per il ligando di peptide/MHC attiva diverse vie di segnalazione a valle, che coinvolgono molte molecole di segnalazione che formano un complesso TCR segnalazione rete10. Le vie di segnalazione TCR sono state studiate per diversi decenni, e ancora la scoperta di nuovi mediatori del pathway non mostra alcun segno di cedimento,11,12. La modulazione delle vie di segnalazione di TCR ha rilevanza clinica e può coinvolgere potenzianti risposte a cellula T per applicazioni immunoterapeutiche o l’inibizione di risposte a cellula T per il controllo di autoimmunità13. Strategie per la modulazione delle risposte a cellula T dipendono principalmente la rottura della chinasi o fosfatasi attività14,15,16.
Descriviamo un’applicazione di un test di base di citometria a flusso per lo screening di piccoli composti chimici per la loro capacità di modulare la segnalazione di TCR e di attivazione delle cellule T17. Il dosaggio si basa sul fenomeno dei timociti attivazione della via di apoptosi quando esposti a forti segnali di TCR. Il dosaggio è sufficientemente sensibile per identificare i cambiamenti nella forza di stimolazione; incubando timociti che esprimono TCR transgenici con tetrameri di peptide/MHC con l’aumento di affinità ha provocato un aumento corrispondente di caspase attivazione-usato come misura della risposta apoptotica5. Per lo schermo, abbiamo usato una biblioteca degli inibitori della chinasi e valutare la loro capacità di modulare la risposta di timociti a forti segnali di TCR.
Diverse strategie di flusso cytometry-basato o fluorescenza-reporter sono state descritte per lo screening di alto-rendimento di un assortimento di fenotipi di attivazione periferica in vari sottoinsiemi a cellula T. Tali strategie includono l’uso di reporter genetici fluorescenti per valutare i tempi e la grandezza di cellula T attivazione18, l’uso del degranulation come una lettura di citotossica delle cellule T attività19,20e l’analisi della fosforilazione di varie proteine coinvolte nella segnalazione21cellulare.
Il test di screening qui presentato è in grado di identificare correttamente i composti che inibiscono molecole canoniche del TCR signaling pathway, nonché potenziali, romanzo composti con effetti inibitori su segnalazione TCR. Ad esempio, abbiamo identificato gli inibitori di GSK3β e Hsp90 come nuovi composti che interessano la cellula T risposte17. Il dosaggio è in grado di distinguere gli inibitori che interferiscono con la trasduzione del segnale, a causa di una riduzione nella risposta apoptotica, dagli effetti TCR-indipendente degli inibitori sulla tossicità cellulare. Oltre l’induzione di apoptosi, misuriamo anche upregulation di CD69 e TCR downregulation come marcatori di attivazione. Come TCR segnalazione reti sono complesse, l’utilizzo di più letture possa aumentare le probabilità di scoprire molecole con effetti specifici su un singolo percorso. Qui, presentiamo anche l’uso di un protocollo di centrifugazione-indipendente come alternativa ad alta produttività per il protocollo originale durante la colorazione delle cellule in preparazione per l’analisi cytometric di flusso. L’analisi descritta in questo articolo utilizza una piccola biblioteca composta degli inibitori della chinasi ma, in linea di principio, può essere utilizzato per lo screening di prestazioni superiore. La biblioteca di scelta può anche incorporare una varietà di inibitori o altre molecole.
La strategia di screening proposta qui valuta la capacità di piccole molecole per sopprimere gli effetti apoptotici in timociti dopo stimolazione, oltre alle più convenzionali marcatori di cellula T upregulation di attivazione-CD69 e downregulation TCR . Ulteriori marcatori possono anche essere inclusi per consentire l’analisi di timociti diversi sottoinsiemi32. Un aspetto interessante del dosaggio attuale sta nel fatto che gli inibitori che ostacolano la segnalazione TCR rallenterebbe anche l’induzione di apoptosi, evidenziando ulteriormente la distinzione degli effetti di TCR-indipendente che gli inibitori possono avere sull’induzione della morte delle cellule. Inoltre, un’analisi di citometria a flusso-base consente l’utilizzo di più letture come marcatori di attivazione distinte, che potrebbero riferire gli effetti degli inibitori sui rami separati singoli di segnalazione TCR. Nel caso presentato qui, c’erano gli inibitori che hanno mostrato un’inibizione differenziale dell’attivazione di caspase-3 e CD69 upregulation. Poiché alcuni composti potrebbero influire sulle funzioni di pulizia come la sintesi proteica o traffico vescicolare dei suini, non è sorprendente osservare effetti sul upregulation del de novo sintetizzati gli indicatori (ad es., CD69) ma non su posttranslational modifiche (ad esempio, l’attivazione proteolitica di caspase-3).
Come il saggio presentato qui misure apoptosi come una lettura, è imperativo che gli effetti tossici latenti degli inibitori non oscurare i risultati. Ad esempio, nella schermata, abbiamo non diluire staurosporine oltre 1 nM, nonostante fosse ancora tossico per le cellule a quella concentrazione. I risultati rappresentativi sono d’accordo con staurosporine essendo un inibitore della chinasi promiscua e un induttore di apoptosi33. Senza una sufficiente diluizione dei composti testati a concentrazioni non tossiche, è possibile trascurare potenziali hit.
La strategia di screening dettagliata qui sarebbe difficilmente applicabile agli esseri umani dovuto le complicazioni connesse con l’ottenimento di un numero sufficiente di timociti per high throughput screening. Tuttavia, è possibile ottenere campioni di timo umano da biopsie cardiache pediatrica34,35 o da feti36,37. Ciò nonostante, come TCR segnalazione percorsi e le sequenze di aminoacidi delle proteine di segnalazione sono in gran parte conservate tra topi e nell’uomo, il dosaggio di timociti fornisce una strategia di screening preliminare utile, e tutti i risultati ottengono con questo test utilizzando il mouse timociti, quindi, verificabile in linfociti umani primari.
Una limitazione del protocollo dipendente dalla centrifugazione convenzionale riguarda la prospettiva di perdita delle cellule, che può essere attribuita alla natura più fasi del processo, che prevede misure quali la permeabilizzazione delle cellule e centrifugazione. Ogni centrifugazione e risospensione passo inevitabilmente comporta la perdita delle cellule. Mentre tali perdite potrebbero non essere fondamentale per gli studi che coinvolgono un numero limitato di campioni, si potrebbero porre dei problemi quando applicato nello screening di throughput più elevato, in particolare col progredire della analisi formato da 96 – a 384 – a 1536-bene. Un modo per aggirare questo problema è attraverso l’uso di sensori cellula-permeabile caspase fluorescente38 che permettono il rilevamento di attivazione delle caspasi, evitando le complicazioni di permeabilizzazione delle cellule e più lavaggi5. In alternativa, impiegando un metodo di centrifugazione indipendente di lavaggio celle di flusso laminare è anche possibile per minimizzare la perdita delle cellule. Con una piastra automatizzata stazione in combinazione con un piatto di parete-meno di lavaggio, le cellule vengono lavate da flusso laminare senza l’uso di una centrifuga. La diluizione esponenziale dei reagenti permette per la pulizia accurata ed efficiente di cellule in meno di 3 min, che rappresenta una diluizione equivalente a due giri di centrifuga lavaggio. Senza sollecitazioni esterne a causa di centrifugazione, le cellule sono più vitali e le perdite delle cellule sono ridotti al minimo.
Abbiamo anche esplorato la possibilità di utilizzare la piastra automatizzata stazione di lavaggio dopo la coltura i timociti in fondo U 96 pozzetti piastre e, anche, alla coltura delle celle direttamente in placche a muro-meno compatibili con la piastra automatizzata stazione di lavaggio. La coltura delle cellule nelle placche a muro-meno abilitato l’eliminazione di tutte le fasi di centrifugazione e ridotto al minimo la perdita delle cellule eliminando la necessità di un trasferimento di campione attraverso piastre. Generalmente, i tre protocolli differenti sono paragonabili in efficienza di stimolazione e la macchiatura. La stazione di lavaggio automatico fornisce il vantaggio di automazione, velocità ed efficienza, che rende più facile per un throughput più elevato analisi. Inoltre, con una maggiore automazione, i passaggi di lavaggio possono essere effettuati più velocemente, e c’è una maggiore coerenza tra gli esperimenti o sperimentatori. Tuttavia, la stazione di lavaggio presenta alcuni inconvenienti: grandi volumi di buffer di lavaggio sono necessari per la rondella di adescamento (150 mL ogni cambiamento di buffer, di cui 50 mL è utilizzato per il lavaggio); cura supplementare è necessaria quando si maneggia la piastra per evitare qualsiasi contaminazione dei pozzi a causa di partizionamento limitato tra i pozzetti della piastra piccolo-volume; buffer di residuo di 25 µ l nei pozzetti dopo lavaggio richiede l’uso di reagenti preparati a un più elevato di concentrazione di 1 x. Per risolvere i problemi di volume residuo e capacità di volume limitato della piastra, può essere aggiunto un accessorio per espandere il volume di incubazione da 70 µ l a 150 µ l, facilitando l’adozione di protocolli convenzionali. Mentre i sistemi di movimentazione automatizzata piastra sono attualmente disponibili, che hanno un’impronta significativa rispetto al sistema di lavaggio laminare, che è una piccola unità di ~ 1 piede cubico (~0.028 m3). Inoltre, l’integrazione di centrifugazione in piastra automatizzato, sistemi di movimentazione è impegnativo, limitando il loro uso nel lavaggio delle cellule. Non ci sono attualmente nessun altra cella centrifuga-indipendente lavaggio degli strumenti disponibili, per quanto sappiamo.
La strategia di screening qui presentata è in grado di identificare piccole molecole e loro chinasi destinazione presunta, che colpiscono TCR di segnalazione e attivazione delle cellule T. La libreria utilizzata qui comprende principalmente piccole molecole inibitori delle chinasi ed era in grado di generare un numero di hit potenzialmente interessanti. Il protocollo può anche essere prontamente applicato librerie inibitore di altre classi di enzimi o ad altri tipi di piccole molecole, così come librerie di altri composti (per esempio, varie macromolecole). Il protocollo è utilizzabile anche per altri tipi di cellule, quali i linfociti T periferici o cellule immortalizzate, compresi quelli che esprimono TCR transgenici o che trasportano sistemi reporter a schermo. Identificare e caratterizzare nuovi mediatori del T-cell signaling può migliorare la nostra conoscenza del pathway di segnalazione e anche un aiuto nello sviluppo della terapia mirata in malattie immuni13,14,15, 16. nel complesso, questo studio aggiunge alla gamma di opzioni disponibili per la rilevazione dei mediatori di segnalazione tramite HTS saggi di T-cellulare.
The authors have nothing to disclose.
Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni da Consiglio del Singapore Ministero della sanità nazionale delle ricerche mediche, NMRC CBRG15may017 e il Ministero dell’istruzione, 2014 Singapore-T2-1-136 (a N.R.J.G.).
RPMI | HyClone | SH30027FS | |
FBS | HyClone | SH3007103 | |
L-Glutamine | HyClone | SH3003401 | |
Sodium pyruvate | HyClone | SH3023901 | |
Penicillin/Streptomycin | HyClone | SV30010 | |
b-mercaptoethanol | Sigma Aldrich | 516732 | |
10X PBS | Vivantis | PB0344 – 1L | |
Kinase Screening Library (96-Well) | Cayman Chemical | 10505 | Exact contents of the library may vary |
DMSO | Sigma Aldrich | D2650 | |
Dexamethasone | Sigma Aldrich | D4902 | |
anti-CD3/CD28 beads | Thermo Fisher Scientific | 11452D | |
FITC Active Caspase-3 Apoptosis Kit | BD Pharmingen | 550480 | Contains Fixation/Permeabilisation buffer, 10X Perm/Wash buffer and anti-caspase 3 antibody |
DA-Cell Washer | CURIOX | HT1000 | |
96-well DA-Cell Plate | CURIOX | 96-DC-CL-05 | |
Antibodies | |||
CD3e | BioLegend | 100236 | |
TCRb | BD Biosciences | 553174 | |
CD4 | BD Biosciences | 740007 | |
CD8 | BD Biosciences | 563786 | |
CD69 | eBioscience | 25-0699-42 | |
Inhibitors | |||
TG003 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PKC 412 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Doramapimod | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Paclitaxel | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Erlotinib | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Necrostatin-5 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NVP-BEZ235 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Phthalazinone pyrazole | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-879 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
1-NA-PP1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Torin 1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide II | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
BIBF 1120 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SMI-4a | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide XI (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10657 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-703026 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Chelerythrine chloride | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Tunicamycin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
GSK 1059615 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Ruxolitinib | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Necrostatin-1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 505124 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
INK128 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Canertinib (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 431542 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 173074 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Valproic Acid (sodium salt) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 0325901 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 203580 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
VX-702 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Emodin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CHIR99021 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
BIO | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Imatinib (mesylate) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Sunitinib Malate | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Gefitinib | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PP2 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
3-Methyladenine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide I | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide IV | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide V | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NSC 663284 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
D 4476 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NU 7026 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
H-9 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Indirubin-3'-monoxime | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
KN-62 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
KN-93 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CGP 57380 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Iso-Olomoucine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
(S)-Glycyl-H-1152 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide VIII (acetate) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ST638 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SU 6656 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
LY364947 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 203580 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10621 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
YM-201636 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ZM 447439 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-041164 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NVP-AEW541 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PP242 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ABT-869 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10622 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
17β-hydroxy Wortmannin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10626 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SU 6668 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10572 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
N,N-Dimethylsphingosine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
LY294002 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
U-0126 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Staurosporine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
KN-92 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-605240 (potassium salt) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
O-1918 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Y-27632 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Leelamine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 98059 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 169316 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
TGX-221 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
(S)-H-1152 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-605240 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
D-erythro-Sphingosine C-18 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
OSU03012 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
JNJ-10198409 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Leelamine (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Arachidonic Acid Leelamide | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Lauric Acid Leelamide | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-252424 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10505 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PI-103 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PIK-75 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Sphingosine Kinase Inhibitor 2 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Piceatannol | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SC-1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
(R)-Roscovitine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
BAY-43-9006 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10561 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-604850 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PI3-Kinase α Inhibitor 2 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ML-9 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Triciribine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Erbstatin Analog | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Kenpaullone | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Olomoucine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-494 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-825 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-1478 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 216763 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 415286 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-17 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
H-8 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
LFM-A13 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SC-514 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Apigenin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-18 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10554 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
DRB | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
RG-13022 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
RG-14620 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-490 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-82 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-99 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-213 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-183 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Lavendustin C | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ZM 336372 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
5-Iodotubercidin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 202190 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10571 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Nilotinib | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SP 600125 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
L-threo-Sphingosine C-18 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
H-89 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
HA-1077 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-370 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Wortmannin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-1296 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
KT 5823 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Janex 1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10574 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10575 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10576 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NH125 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
TWS119 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NSC 210902 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10577 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10578 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 184161 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CCT018159 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Myricetin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |