Uso complementar de técnicas microscópicas e leitura de fluorescência no estudo de Cryptococcus-Amoeba interações

Os micróbios evoluíram ao longo do tempo para ocupar e prosperar em diferentes nichos ecológicos, como os limites físicos abertos do solo e da água, entre outros¹. Nesses nichos, os micróbios muitas vezes se envolvem na concorrência direta por recursos limitados; importante, para os nutrientes que eles usam para apoiar o seu crescimento ou espaço, que eles precisam para acomodar a população em expansão^2,3. Em certos casos, alguns organismos holozoicos como a ameba podem até mesmo antecedem em células criptocócicas como uma forma de extrair nutrientes de sua biomassa^4,5. Por sua vez, isso permite que tais organismos estabeleçam a dominância territorial através do controle dos números populacionais de suas presas. Devido a essa pressão predatória, algumas presas podem ser selecionadas para produzir fatores microbianos, como a cápsula criptocócica⁶, para conciliar os efeitos negativos da pressão. No entanto, como consequência não intencional desta pressão, alguns micróbios adquirem fatores que lhes permitem atravessar a barreira das espécies e procurar novos nichos para colonizar⁷, como os espaços confinados do corpo humano que são ricos em nutrientes e têm o ideal Condições. Este último pode explicar como um micródon terrestre como Cryptococcus (C.) neoformans pode se transformar para se tornar patogénico.

Para este fim, é importante estudar o contato inicial que as células criptocócicas podem ter com ameba e como isso pode selecioná-los para se tornarem patogênicos. Mais especificamente, isso pode dar pistas sobre como as células criptocócicas se comportam quando agiram por macrófagos durante a infecção. É por esta razão que a ameba foi escolhida como um modelo para os macrófagos aqui, pois é relativamente barata e fácil manter uma cultura de ameba em um laboratório⁸. Do interesse era examinar igualmente como Metabolites secundário criptocócica viz. os ácidos graxos 3-hydroxy^9,10 influenciam a interação entre amebas e pilhas criptocócica.

Uma maneira simples de perceber a interação entre a ameba e sua presa a olho nu é criar um gramado usando sua presa na superfície de uma placa de ágar e ameba local. A visualização de placas ou zonas claras na placa de agar retrata áreas onde a ameba pode ter alimentado sua presa. No entanto, neste nível macro, apenas o resultado do processo é observado, e o processo de fagocitose é mecanizado não pode ser observado. Portanto, para apreciar o processo em uma base célula a célula, existem vários métodos microscópicos que podem ser usados^11,12. Por exemplo, um microscópio invertido com uma câmara de incubação pode ser usado para gravar um lapso de tempo de eventos entre uma célula fagocítica e seu alvo¹³. Infelizmente, devido ao custo de um microscópio com uma funcionalidade de lapso de tempo, nem sempre é possível para os laboratórios para comprar tal microscópio, especialmente em recursos pobres-configurações.

Para contornar a limitação acima, este estudo apresenta um delineamento exploratório sequencial que avalia a interação de c. neoformans Viz c. neoformans uofs Y-1378 e c. neoformans Lmpe 046 com Acanthamoeba Castellani . Em primeiro lugar, é utilizado um método qualitativo que precede um método quantitativo. As imagens ainda são capturadas usando um microscópio de fluorescência invertido, bem como um microscópio eletrônico de transmissão para descrever ameba-interaçõesCryptococcus . Isto foi seguido quantificando a fluorescência usando um leitor da placa para estimar a eficiência do ameba para internalizar pilhas criptocócica. Ao reconciliar os achados desses métodos durante a fase de interpretação de dados, isso pode revelar igualmente tanta informação crítica quanto a utilização de um vídeo de lapso temporal de fagocitose.