クリプトコッカスの研究における顕微鏡技術と蛍光読解の補完的利用-アメーバ相互作用

微生物は、土壌と水の開いた物理的境界などの異なる生態学的ニッチを占有し、繁栄するために時間をかけて進化^{してきました。}これらのニッチでは、微生物はしばしば限られた資源のための直接競争に従事します。重要なことは、彼らが拡大する人口2、3を収容するために必要な成長または空間をサポートするために使用する栄養素のために。特定の例では、アメーバのようないくつかのホロゾニック生物は、バイオマス4、5から栄養素を抽出する方法としてクリプトコッカス細胞に先行することさえある。その結果、このような生物は、獲物の個体数を制御することにより、領土の支配を確立することができます。この捕食圧のために、一部の獲物は、圧力の負の影響を和らめるために、クリプトコッカス^{カプセル6}などの微生物因子を生成するために選択されてもよい。しかし、この圧力の意図しない結果として、一部の微生物は、種の障壁を越え、栄養素が豊富で理想を持つ人体の限られた空間のように、7を植民地化するための新しいニッチを探し出すことを可能にする因子を獲得する。条件。後者は、クリプトコッカスのような地上微生物がどのように説明するか(C.)ネオフォーマンは病原性に変容する可能性があります。

そのためには、クリプトコッカス細胞がアメーバと共に持つ可能性のある初期接触と、これが病原性になるためにそれらを選択する方法を研究することが重要です。より具体的には、これは、感染中にマクロファージによって作用したクリプトコッカス細胞がどのように動作するかの手がかりを与える可能性があります。アメーバは、^研究室8でアメーバの培養を比較的安価で維持しやすいため、マクロファージのモデルとして選ばれたのはこのためです。興味深いのは、クリプトコッカス二次代謝産物viz.3−ヒドロキシ脂肪酸9、10がアメーバとクリプトコッカス細胞との相互作用にどのように影響するかを調べることであった。

アメーバとその獲物と肉眼との相互作用を知覚する簡単な方法は、寒天プレートとスポットアメーバの表面に獲物を使用して芝生を作成することです。寒天プレート上のプラークまたはクリアゾーンの視覚化は、アメーバが獲物に餌を与えた可能性のある領域を示しています。しかし、このマクロレベルでは、プロセスの結果のみが指摘され、咽頭細胞症が機械化される過程は観察できない。したがって、細胞間ベースでプロセスを評価するために、11、12を使用することができるいくつかの顕微鏡的方法がある。例えば、インキュベーションチャンバを有する反転顕微鏡は、咽頭細胞とその^標的13との間の事象のタイムラプスを記録するために使用することができる。残念ながら、タイムラプス機能を備えた顕微鏡のコストのために、実験室は、特にリソースの貧弱な設定で、このような顕微鏡を購入することが常に可能であるとは限りません。

上記の制限を回避するために、本研究は、C.ネオフォルマンスviz C.ネオフォルマンスUOFS Y-1378とC.ネオフォルマンスLMPE 046とアカンタモエバ・カステラニとの相互作用を評価する順次探索的設計を提示する。.まず、定量的方法に先行する定性的な方法が用いられる。静止画は、反転蛍光顕微鏡と透過電子顕微鏡を使用して撮影され、アメーバ-クリプトコッカス相互作用を描写します。続いて、プレートリーダーを用いて蛍光を定量し、クリプトコッカス細胞を内部化するアメーバの効率を推定した。データ解釈段階でこれらの方法から得られた結果を調整する場合、これは、咽頭細胞症のタイムラプスビデオを熟読するのと同じくらい重要な情報を明らかにする可能性があります。