HUVEC tüp-formasyon assay doğal ürünlerin anjiyogenezi üzerinde etkisini değerlendirmek için
Summary
Burada, biz su ekstresinin etkilerini değerlendirmek Ruta graveolens gemi ağ oluşumu üzerinde bir tüp oluşumu tahlil kullanarak bir jelli Bodrum matris.
Abstract
Angiogenesis, endotel hücre proliferasyonu, farklılaşma ve göç gibi farklı süreçler içeren, yeni kan damarlarının oluşumuna yol açabilecek ve çeşitli sinyal iletim yollarından oluşan bir olgudur. Burada, tüp oluşumu tahlil doğal ürünlerin anjiyogenez üzerinde etkisini değerlendirmek ve ilgili moleküler mekanizmaları araştırmak için basit bir in vitro yöntemi olduğunu göstermektedir. Özellikle, Ruta graveolens (rgwe) su özü varlığı, endotel hücreleri artık bir hücre hücre ağı oluşturmak mümkün ve insan göbek ven endotel hücre üzerinde rgwe etkileri (HUVEC) tüp oluşumu tarafından kaldırılmıştır MEK kurucu aktivasyonu.
Introduction
Angiogenesis, önceden mevcut olanlarla yeni kan damarlarının oluşumuna yol açan ve embriyogenit ve organ büyümesi sırasında meydana gelen fizyolojik bir süreçtir. Yetişkinlikte, anjiyojenez sadece bisiklet yumurtası, gebelik sırasında plasenta, ve yara iyileşmesi ve onarımı sırasında aktive edilir. Anjiyojenez, endotelyal hücrelerin çoğalmasına, farklılaştırmaya ve bozulmamış bir vasküler ağ oluşturmak için göç edebilme yeteneğine bağlıdır1. Ancak, enflamatuar, metabolik ve romatizmal hastalıklar gibi çeşitli hastalıklarda anjiyojenik süreçler değiştirilir ve anjiyojenez aşırı olur. Ayrıca, kontrollü anjiyojenik süreçler de tümör progresyonu ve metasrik1uyarır. Bu nedenlerden dolayı, son on yıl içinde, araştırma çalışmaları kanser, oküler, eklem veya cilt bozuklukları2,3aşırı anjiyogenezi inhibisyonu amaçlayan yeni terapötik stratejilerin gelişmesine odaklanmaktadır.
Vasküler endotel büyüme faktörü (VEGF) mevcut antianjiyojenik tedavilerin ana hedefini temsil eder4, ve birçok ANTI-VEGF monoklonal antikorlar geliştirilmiştir ve aşırı anjiyogenezi önlemek için sentezlenmiş. Ancak, bu sentetik ilaçlar şiddetli yan etkileri gösterir ve olumsuz maliyet-to-fayda oranı5,6var. Bu nedenle, tamamlayıcı ve şu anda kullanılan ilaçlar ile birleştirmek için minimal yan etkileri ile aşırı anjiyogenezi sınırlamak için yeni terapötik stratejiler bulmak zorunludur. Bu yeni ilaçlar, yüksek kimyasal çeşitlilik ve biyokimyasal özgüllük ile karakterize doğal ürünler arasında bulunabilir.
Bu yazıda, RGWE ‘nin HUVECs ‘in bir jelli Bodrum Matrix in vitro5‘ te tübüller oluşturabilme yeteneğinin etkisini değerlendirmek için basit bir yöntem öneriyoruz. Nitekim, rgwe gibi flavonoidler ve polifenoller gibi ikincil metabolitlerin bir karışımı olan rutin büyük bileşen5. Birçoğu zaten anti-inflamatuar ve vazokoruyucu ajanlar olarak test edilmiştir7,8,9,10,11. Dahası, Geçenlerde göstermiştir ki RGWE, ama rutin değil, HUVEC yeteneği bir jelli Bodrum matrisinde tübüller oluşturmak için inhibe edebiliyoruz ve bu fenomen MEK-ERK yolu tarafından aracılı olduğunu, potansiyel bir tedavi aracı olarak RGWE gösteren mümkün aşırı yeni kan damar oluşumu önlemek5.
Protocol
Representative Results
Discussion
Doğal bileşikler yüksek kimyasal çeşitlilik ve biyokimyasal özgüllük ile karakterize ve potansiyel olarak terapötik moleküllerin bir kaynağını temsil eder. Burada, biz bitki R. graveolens su özü elde etmek için nasıl göstermek ve bir kolay gerçekleştirmek için tüp oluşumu tahlil önermek, güvenilir, ve nicel yöntemi anjiyojenez ÜZERINDE rgwe etkilerini araştırmak için yararlı. Bu R. graveolens yaprakları kaynatmak için önemlidir 1 h tam su özü elde emin olmak için. Da…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu iş Fondi di Ateneo tarafından Luca Colucci-d ‘Amato ve VALERE program fonları tarafından Maria Teresa Gentile ve AıSC Fund IG18999 Maurizio Bifulco ‘ya finanse edilmiştir.
Materials
| HUVEC cells | Clontech | C2519A | |
| FBS | Invitrogen | 10270106 | |
| EBM-2 basal medium | Clontech | cc3156 | |
| Single quot kit- supplemets and growth factors | clontech | cc4147 | |
| Matrigel | Corning | 354234 | |
| 96-well plates | Thermo Scientific | 167008 | |
| 15 mL conical tubes | Sarstedt | 62,554,502 | |
| 10 mL disposable serological pipette | Sarstedt | 861,254,001 | |
| 5 mL disposable serological pipette | Sarstedt | 861,253,001 | |
| 1000 μL pipette | Gilson | Pipetman classic | |
| 100 μL pipette | Gilson | Pipetman classic | |
| 20 μL pipette | Gilson | Pipetman classic | |
| p1000 pipette tips | Sarstedt | ||
| p20-200 pipette tips | Sarstedt | 70,760,502 | |
| Burker chamber | Fortuna | ||
| Trypan blu stain | Gibco | 15250-061 | |
| DPBS | Gibco | 14190-094 | |
| mill-ex 0.22 um filters | Millipore | SLGS033SS | |
| Lyophilizer | VirTis-SP Scientific | ||
| Incubator | Thermo Scientific | ||
| CO2 | AirCos | ||
| Pen-Strep | Gibco | 15070-063 | |
| 100 mm dish | Sarstedt | 833,902 | |
| pcDNA3 | Invitrogen | v79020 | |
| Lipofectamine-2000 | Invitrogen | 11668027 | |
| Opti-MEM | Gibco | 31985070 | Reduced serum medium |
| Rutin | Sigma-Aldrich | R5143-50G | |
| Axiovert 25 microscope | Zeiss | ||
| AmScope MD500 camera | AmScope | ||
| Dispase | Thermo Scientific | D4818 | |
| Lab heater | Falc | ||
| ParaFilm | American National Can |
References
- Carmeliet, P. Angiogenesis in life, disease and medicine. Nature. 438 (7070), 932-936 (2005).
- Carmeliet, P., Jain, R. K. Molecular mechanisms and clinical applications of angiogenesis. Nature. 473 (7347), 298-307 (2011).
- Ferrara, N., Kerbel, R. S. Angiogenesis as a therapeutic target. Nature. 438 (7070), 967-974 (2005).
- Ravishankar, D., Rajora, A. K., Greco, F., Osborn, H. M. I. Flavonoids as prospective compounds for anti-cancer therapy. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 45, 2821-2831 (2013).
- Gentile, M. T., et al. Ruta graveolens water extract inhibits cell-cell network formation in human umbilical endothelial cells via MEK-ERK1/2 pathway. Experimental Cell Research. 364 (1), 50-58 (2018).
- Butler, M. S. Natural products to drugs: natural product-derived compounds in clinical trials. Natural Product Reports. 25, 475-516 (2008).
- Sulaiman, R. S., Basavarajappa, H. D., Corson, T. W. Natural product inhibitors of ocular angiogenesis. Experimental Eye Research. 129, 161-171 (2014).
- Risau, W. Mechanisms of angiogenesis. Nature. 386 (6626), 671-674 (1997).
- Trung, N. X. In vitro models for angiogenesis. Journal of Science & Development. 13 (4), 850-858 (2015).
- Ucuzian, A. A., Greisler, H. P. In vitro Models of Angiogenesis. World Journal of Surgery. 31, 654-663 (2007).
- Simons, M., et al. American Heart Association Council on Basic Cardiovascular Sciences and Council on Cardiovascular Surgery and Anaesthesia. State-of-the-Art Methods for Evaluation of Angiogenesis and Tissue Vascularisation: A Scientific Statement From the American Heart Association. Circulation Research. 116 (11), e99-e132 (2015).
- Arnaoutova, I., Kleinman, H. K. In vitro angiogenesis: endothelial cell tube formation on gelled basement membrane extract. Nature Protocols. 5 (4), 628-635 (2010).
- DeCicco-Skinner, K. L., et al. Endothelial cell tube formation assay for the in vitro study of angiogenesis. Journal of Visualized Experiments. (91), e51312 (2014).
