NETQUANTを用いた好中球細胞トラップの自動画像ベース定量

好中球は、多種多様な微生物病原^体1に対する先天的な宿主防御応答の重要なメディエーターである。彼らは、抗菌タンパク^質2の広い配列を含む顆粒を放出することによって、その抗菌機能を実行し、活性酸素種(ROS)および次亜塩素^酸塩1を産生し、食細胞^症3を介して生じる。また、ブリンクマンら⁴は、好中球が侵入病原体を捕捉し排除する新しいメカニズムとして好中球細胞外トラップ(NETs)を記載した。彼らの発見^{は10年以上前4}年に以来、NETは感染^{性5、6および}非感染^性7罹患率の多種多様に関与してきた。NET形成は活性プロセスであり、顆粒由来抗菌タンパク^質8で被覆されたクロマチンDNAの押出をもたらす。NET形成に関連する細胞および核形態の主要な変化のいくつかは、核形態の喪失、クロマチン縮合、細胞質から核への顆粒タンパク質の動員および核および細胞直径^の増加を含^む。

ウェブ様NETは、細胞よりもわずかに大きい拡散構造として、または単一の好中球よりも数倍大きい構造として見えることがあり、NETosis^5、10の指標と考えられる。蛍光顕微鏡を用いて、4′,6-ジアミディノ-2-フェニルリンドール(DAPI)などの蛍光プローブでDNAを探査し、好中球エラスターゼなどのNET結合タンパク質に対する免疫蛍光染色によりNETを検出できます。DNAおよびNET結合タンパク質に対する染色の重なり領域の定量は、^画像11におけるNETの下の総面積を決定する。

NETs^11、12の蛍光画像ベースの定量を行うために、多くの画像解析オプションが利用可能である。しかし、これらのソフトウェアオプションは、ユーザーフレンドリーで完全に自動化されていないという制限があります。この記事では、バイアスのかからなからり完全に自動化された免疫蛍光顕微鏡顕微鏡画像ベースのNET定量を実行できる、自由に利用できるアプリ「NETQUANT^13」の動作を実演します。アプリは、ユーザーフレンドリーなグラフィカルインターフェイス(GUI)を持っており、単一セル分析を実行することができます。本ソフトウェアは、DNA-NET結合マーカーの領域における形態学的変化を検出することにより、画像中のNETosisを定量し、クロマチンは核の変形に関連し、DNA:NET結合タンパク質比の増加を検出する。複数の NET 定義基準を組み合わせることで、複数のデータ セット間で厳密な NET 定量を公平に行うことができます。