قياس معدل الترشيح الكبيبي في الفئران عبر الجلد

هذه المخطوطة والفيديو التدريب المصاحب توفير مبادئ توجيهية عملية لاستخدام عبر الجلد شاشات GFR في الفئران. من أهم الخطوات في الإجراء الملحق الصحيح للجهاز على ظهر الحيوان، والتفاف الشريط حول البطن بشكل أمن. أفضل وضع قليلاً اليسرى أو اليمنى من خط الوسط، عبر القفص الصدري. التصحيح والجهاز بحاجة لإلحاقها بحزم بالجلد، ولكن لا تكون ضيق حيث أنها تحد من التنفس، الحركة، أو تؤثر على الدورة الدموية في الجلد تحت الجهاز، كما سيؤدي ذلك إلى القياسات الخاطئة/غير دقيقة. وبالإضافة إلى ذلك، نظراً لرصد حدوث في الفئران واعية بعد أنهم استعادوا من التخدير، تصحيح وضع الجهاز من جانب الجسم مع تدخل أدنى من نتائج الحركة في القياسات عبر الجلد مع القليل من المصنوعات اليدوية حركة. ولهذا السبب، من المهم أن لا يتم وضع الجهاز قريبة جداً من الأطراف العليا حيث أن الفئران يمكن أن تتحرك أكتافهم بحرية.

من المهم أن تضطرين الفئران يوم أو يومين قبل قياس GFR، إزالة الشعر يؤثر على قياس إزالة فيتك-سينيسترين، مع البيانات الأولية تشير إلى أن إزالة الشعر قبل قياس GFR يزيد عبر الجلد مباشرة الظاهر نصف عمر فيتك-سينيسترين. إليه هذا غير معروف. ولذلك، من أجل الحصول على قياسات موثوقة عبر نقاط زمنية متعددة وبين التجارب، من المستصوب تضطرين الفئران في وقت مبكر، للسماح للجلد للتعافي من هذه العملية قبل المتابعة مع قياسات GFR. ينبغي عدم تطبيق كريم إزالة الشعر لنفس المنطقة من الجلد داخل ح 72 طلب مسبق، لتجنب الأضرار الكيميائية على الجلد. في كثير من الحالات، إعادة نمو الفراء يستغرق عدة أيام أو حتى أسبوع، وحتى إعادة التطبيق لإزالة الشعر كريم داخل ح 72 يمكن تجنبها بسهولة.

لتصل إلى 50% من مصل الدم يفرز كرياتينين قسم أنبوبي في الفئران¹³، ولأن هناك زيادة الاستيعاب من اليوريا من الكلوية عند الفئران المجففة¹⁴، كرياتينين المصل وبون علامات سوء الوظيفة الكلوية. ومع ذلك، بسبب راحتهم، تواصل هذه الاختبارات استخدامها كمقياس الرئيسي للوظيفة الكلوية في الدراسات الإكلينيكية AKI وكد في الفئران. بيد تمشيا مع مساهمة كبيرة من إفراز أنبوبي لإفراز الكرياتينين في الفئران مع العادي أو بالقرب من وظيفة كلوية طبيعية¹³، كرياتينين المصل أظهرت العلاقة قليلاً مع إزالة فيتك-سينيسترين في معدلات إزالة الألغام عالية (منخفضة عمر فيتكسينيسترين)، التي تشير إلى أن الكرياتينين تدبير غير حساسة لوظيفة الكلي في الفئران مع إصابة الكلي معتدل. على النقيض من ذلك، بينما كعكة يرتبط ارتباطاً جيدا مع إزالة فيتك-سينيسترين في الفئران مع الكلوي معتدل، هناك ترابط الفقراء بين بون وفيتك-سينيسترين التخليص في الفئران مع أشد الضرر الكلي (من نصف العمر فيتك-سينيسترين عالية). المرجح أن يحدث هذا بسبب آثار الاستيعاب اليوريا المرتبطة بالجفاف في الحيوانات المريضة بإصابة الكلي الحادة.

وميزة رئيسية لقياس GFR عبر الجلد، بالمقارنة مع سائر التخليص بلعه أو تقنيات ضخ مستمر لقياس GFR، أنها تتطلب عناية توقيت مجموعات الدم أو البول. يمكن أن تكون هذه تحديا كبيرا في الفئران كما لديهم كميات الدم الإجمالي المنخفض وإخراج البول مقارنة بالفئران. وعلاوة على ذلك، تحتاج الفئران إلى معالجة فقط للحجز على الجهاز والحقن، ولكن ليس فينيبونكتوريس متعددة، كما هو مطلوب بلعه الكلاسيكية التخليص تجارب¹⁵. وعلاوة على ذلك، مدة التخدير قصيرة، وعلى هذا النحو فمن الممكن لإجراء القياسات المتكررة في الفئران الفردية على مر الزمن. التردد الذي يمكن إجراء القياسات أساسا يعتمد على الحالة الصحية للفئران، والاستعداد للباحث للحقن الوريدي، والأنظمة المؤسسية المحلية على دورات متكررة من التخدير. في الفئران صحية، يصب، يمكن إجراء قياسات GFR عبر الجلد يوميا، مع آثار ضئيلة أو لا الضارة على الماوس. بيد أن الفئران المصابين يعانون من AKI أو كد من غير المحتمل أن تتسامح مع دورات التخدير المتكررة وكذلك الفئران صحية وهكذا ينبغي تخفيض تواتر القياسات.

القيد الرئيسي لقياس GFR عبر الجلد، مقارنة بأساليب إزالة بلعه لقياس GFR في الفئران أن حركية الإفراز تقاس فقط كتغيير في كثافة fluorescence النسبي على مر الزمن، وليس تركيزات الراسم المطلق. وبسبب هذا، فمن الممكن لقياس ثابت معدل من الانحلال الأسى واحد من إفراز الحركية، وتقدير قريب جداً من GFR تطبيع على حجم خارج الخلية¹⁶فقط. للتعبير عن GFR في مل/دقيقة، قد حجم خارج الخلية من الحيوان تقدير استخدام معامل التحويل الذي أنشئ في الدراسات السابقة التي كانت قياسات متزامنة من تركيزات البلازما فيتك-سينيسترين إجراء¹. ومع ذلك، عامل التحويل هذا قد لا بشكل صحيح تقدير حجم السوائل خارج الخلية على قدم المساواة جيدا في جميع الفئران، نظراً لحجم السوائل يمكن أن تتأثر بمجموعة متنوعة من عوامل خارجية، بما في ذلك العمر، والجنس، والحالة ترطيب (والتي يمكن أن تتأثر بالعمليات الجراحية التدخلات، فضلا عن إصابة الكلي)، والوزن¹⁷. بيد يخضع قياس GFR transcutaneous خلافا بلعه الجرعات أسلوب تقييم GFR في الفئران، أقل تقلب تتوقف على المشغل كما أنه لا يتأثر بالجرعات أخطاء أو أخطاء في توقيت مجموعات الدم.

قيد آخر من تقنية قياس GFR transcutaneous أن الأساس إشارة تحولات قد تحدث أثناء القياس سبب تبيض فلوروفوريس الجلد والتخدير اللازمة لحقن الجهاز المرفق والتتبع. هذا القيد ألقي فريديمان والزملاء بتنفيذ خوارزمية تصحيح³. أن تنفيذ هذه الخوارزمية التي أدت إلى تحسين الدقة في تقنية مماثلة لأسلوب تسريب مستمر من الاقتطاعات GFR عبر الجلد.

المتداولة وسؤال ما إذا كان يؤثر لون بشرة في سلالات مختلفة من الماوس عبر الجلد تطهير فيتك-سينيسترين. لون بشرة يقلل كثافة إشارة فيتك-سينيسترين حيث تمتص الصبغات الداكنة الإثارة زرقاء وخضراء انبعاث إشارات من القياسات فيتك-سينيسترين. معدل إفراز فيتك-سينيسترين غير مستقلة عن مجمل إشارة كثافة. وعلاوة على ذلك، في حين انخفاض إشارة المقاسة، الإشارات الخلفية أيضا أقل في الفئران المصطبغة. لأن الإشارات الخلفية عبارة عن خليط من أوتوفلوريسسينسي فلوروفوريس الجلد وانعكاس الضوء الإثارة، وجدنا أن نسبة الإشارات الخلفية إلى حد أقصى مماثل، أو حتى أفضل، في الحيوانات المصطبغة. وباﻹضافة إلى ذلك، التحف الحركة، التي يسببها التعرض للجلد المحيطة بها ليعكس الضوء، خفضت في الفئران المصطبغة منذ الضوء المنعكس أيضا تمتصه بشرة.

وفي الختام، يسمح هذا الأسلوب وقد قدمنا دقة قياس GFR في واعية، تتحرك بحرية الفئران لجميع أنواع البشرة. كما التقنية مستقلة لأخذ عينات من الدم، يمكن استخدامه مرارا وتكرارا على الحيوان نفس الملاحظات طولية في نماذج كد، وكذلك لقياس التغيرات السريعة التي تحدث بعد تحريض أكي من GFR.