Une méthode In Vivo pour étudier l’intégrité barrière de sang-testicule souris

La spermatogénèse chez les mammifères est considéré comme un processus hautement structuré qui englobe les spermatogonies autorenouvellement et différenciation par le biais de spermatocytes en spermatozoïdes haploïdes par mitose et méiose spermiogenèse, au cours de laquelle dramatique modifications morphologiques et biochimiques se produisent. Développement des cellules germinales sont progressivement transportés de la base de la tube séminifère vers la lumière. Ce processus est réglé par contacts cellules entre les cellules germinales et les cellules de Sertoli^1,2. Les cellules de Sertoli adjacentes forment le BTB qui se trouve près de la base du tube séminifère. BTB divise physiquement l’épithélium en une basale et un compartiment adluminales. Stades VIII – IX du cycle épithélial, preleptotene/leptotène spermatocytes des compartiments basales qui traversent le BTB, entrant dans les compartiments d’adluminales³. Par conséquent, la fonction de BTB est de fournir un microenvironnement immunoprivileged pour l’achèvement de la méiose et la spermiogenèse^4,5,6. Contrairement à d’autres obstacles de la sang-tissus (p. ex., barrière hémato – encéphalique) qui sont composées uniquement de jonctions serrées (TJs), le BTB est formé par quatre jonctions différentes (TJs, spécialisations ectoplasmique, jonctions lacunaires et intermédiaire axée sur le filament desmosomes) entre Sertoli, cellules de^1,7.

De nombreuses études ont utilisé des souris génétiquement modifiées, infections virales et substances toxiques environnementales pour étudier les mécanismes de BTB intégrité^7,8,9. La perturbation de BTB induit une déficience de la spermatogenèse et hypofertilité ou d’infertilité. Depuis la formation de BTB et l’intégrité ont été confirmés d’être affectés par des contacts entre les cellules de Sertoli⁸, un modèle in vitro basé sur des cultures primaires de cellules de Sertoli isolées a été utilisé pour l’étude BTB. Toutefois, ce modèle ne peut pas imiter avec précision BTB dynamics in vivo. En outre, aucune telle co-culture de cellules germinales avec les cellules de Sertoli n’a été établie comme capables de refléter tous les éléments pertinents de structurelles et fonctionnelles du BTB^10,11.

En général, en vivo BTB intégrité tests reposent généralement sur petites molécules, telles que EZ-Link Sulfo-NHS-LC-biotine et inuline conjugué FITC (inuline-FITC). Normalement, la diffusion de la biotine ou inuline-FITC du compartiment basal est bloquée par la structure de BTB. Par conséquent, nous sommes en mesure d’utiliser cette méthode pour évaluer l’étendue des dégâts BTB comparée aux groupes témoins. BTB peut être compromise avec certains types de stimulations, telles que le traitement avec cadmium chlorure (CdCl₂)¹², BTB devient accessible aux petites molécules, qui finit par pénétrer dans le compartiment d’adluminales comme indicateurs.

Un début essai in vivo BTB intégrité avec consiste à injecter de la biotine ou inuline-FITC dans la veine jugulaire, qui implique une chirurgie et est envahissante, compliqué et chronophage. En outre, comme les substances journaliste diffusent à travers tout le corps par l’intermédiaire de la circulation, la concentration locale de biotine ou inuline-FITC dans les tubules séminifères est limitée. En outre, l’exposition systémique peut induire des réactions immunitaires. Nous présentons ici un simple et efficace essai in vivo BTB intégrité avec permettant une injection directe d’une petite aliquote d’inuline-FITC dans l’interstitium d’un testicule. En utilisant la fluorescence méthode d’étiquetage, le processus de coloration est commode, comme anticorps secondaires ne sont pas nécessaires. Ici, le processus de colorant fluorescent entrant dans le testicule est visualisé.