Utilisation de Autometallography pour localiser et semi-quantifier argent dans les tissus de cétacés

Nanoparticules d’argent (AgNPs) ont été largement utilisés dans les produits commerciaux, y compris les textiles, cosmétiques et Articles de soins de santé, en raison de leur grand effets antimicrobiens^1,2. Par conséquent, la production de AgNPs et le nombre de produits contenant de l’AGP sont augmentés au fil du temps^3,4. Cependant, AgNPs peut être rejetée dans l’environnement et s’accumulent dans l’océan^5,6. Ils sont devenus la principale source de contamination de l’Ag, et la sensibilisation du public de la toxicité environnementale de Ag est en augmentation.

Le statut de l’AgNPs et Ag dans le milieu marin est complexe et en constante évolution. Des études antérieures ont indiqué que l’AgNPs peut rester comme particules, agrégats, dissolvent, réagissent avec les différentes espèces chimiques ou être régénérés à partir de^7,ions Ag^{+ 8}. Plusieurs types de composés Ag comme AgCl, ont été trouvés dans les sédiments marins, où ils peuvent être ingérés par les organismes benthiques et entrer dans la chaîne alimentaire^9,10. Selon une étude précédente menée dans la région de Chi-ku Lagoon le long de la côte sud-ouest de Taïwan, les concentrations de l’Ag de sédiments marins sont extrêmement faible et similaire à l’abondance crustale, et celles du tissu de foie de poisson sont généralement inférieures à la détection limite (< 0,025 μg/g humide/humide)¹¹. Toutefois, des études antérieures menées dans différents pays ont montré des concentrations relativement élevées de Ag dans le foie des cétacés^12,13. La concentration de l’Ag dans le foie des cétacés est fonction de l’âge, ce qui suggère que la source des Ag dans leur corps est très probablement leurs proies¹². Ces résultats suggèrent la bioamplification de l’Ag chez les animaux à des niveaux trophiques plus élevés. Cétacés, comme les prédateurs de l’océan, pourraient avoir subi les impacts négatifs sur la santé causés par Ag/Ag composés^12,13,14. Plus important encore, comme les cétacés, les humains sont des mammifères et les impacts causés par des composés de Ag/Ag chez les cétacés peuvent également survenir chez les humains néfastes pour la santé. En d’autres termes, les cétacés pourraient être animaux sentinelles pour la santé du milieu marin et les êtres humains. Par conséquent, les effets sur la santé, la distribution tissulaire et la concentration de l’Ag chez les cétacés sont très préoccupante.

Bien que les concentrations de composés Ag/Ag dans les tissus cétacés peuvent être mesurées par spectrométrie de masse à plasma inductif (ICP-MS), l’utilisation de l’ICP-MS est limitée par son coût en capital élevé (instrument et entretien) et les exigences pour le stockage de tissus /PREPARATION^12,15. En outre, il est généralement difficile de recueillir des échantillons de tissus complète dans toutes les enquêtes sur des cas de cétacés échoués en raison de difficultés logistiques, une pénurie de main-d’oeuvre et un manque de ressources connexes¹². Les échantillons de tissus congelés pour analyse par ICP-SM ne se trouvant pas facilement à cause de l’espace limité de réfrigération, et les échantillons de tissus congelés peuvent être ignorés en raison de l’ équipement de réfrigération cassé¹². Ces obstacles précités entravent les enquêtes sur les niveaux de contamination dans les tissus de cétacés par ICP-MS analyse en utilisant des échantillons de tissus congelés. En revanche, formol fixe des échantillons de tissus sont relativement faciles à recueillir au cours de l’autopsie des cétacés morts-brin. Par conséquent, il est nécessaire de développer une méthode facile à utiliser et peu coûteuse pour détecter/mesure des métaux lourds dans les tissus de cétacés à l’aide de formol fixé des échantillons de tissus.

Bien que les concentrations de métaux alcalins et alcalino-terreux et distributions de suborgan peuvent être modifiées au cours de la formaline-fixes, paraffine (FFIP) processus, seulement des effets moindre sur les métaux de transition, tels que Ag, été noté¹⁶. Par conséquent, tissu FFPE a été considéré comme une ressource d’échantillon idéal pour localisation métal et mesures^16,17. Autometallography (AMG), un processus histochimique, peut amplifier les métaux lourds comme taille jaune d’or à des signaux positifs AMG noirs sur coupes tissulaires FFPE, et ces métaux lourds amplifié peut être visualisée sous microscopie optique^{18, 19 , 20 , 21}. par conséquent, la méthode AMG fournit des informations sur les distributions de suborgan des métaux lourds. Il peut fournir des informations supplémentaires importantes pour étudier les voies métaboliques de métaux lourds dans les systèmes biologiques parce qu’ICP-MS ne peut mesurer la concentration de métaux lourds à l’orgue de niveau¹⁸. En outre, logiciel d’analyse des images numériques, comme ImageJ, a été appliquée à l’analyse quantitative des tissus histologiques sections^22,23. Le jaune doré taille variable à des signaux positifs AMG noirs des coupes de tissu FFPE peut être quantifié et utilisée pour estimer les concentrations de métaux lourds. Bien que la concentration absolue en Ag ne peut être déterminée directement par la méthode AMG avec analyse quantitative d’images, il peut être estimée par un modèle de régression basé sur les données obtenues par l’analyse quantitative d’images et l’ICP-MS, ce qui porte le nom de cétacés test de Ag histologique (CHAA). Compte tenu des difficultés de mesure des concentrations d’Ag par ICP-MS analyse chez les cétacés échoués plus, CHAA est une méthode de traitement adjuvant utile pour estimer les concentrations d’Ag dans les tissus de cétacés, qui ne peuvent être déterminées par l’analyse des ICP-MS à cause du manque de surgelés échantillons de tissus. Cet article décrit le protocole d’une technique histochimique (méthode AMG) pour localiser le Ag au niveau suborgan et un test nommé CHAA pour estimer les concentrations d’Ag dans les tissus du foie et les reins des cétacés.

Figure 1 : organigramme illustrant la création et l’application de test de Ag histologique cétacé (CHAA) pour estimer les concentrations Ag. CHAA = cétacé test histologique d’Ag, FFIP = fixés au formol, paraffine, ICP-MS = spectrométrie de masse à plasma inductif. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.