デザインと二枚貝のサスペンションが海で餌を定量化するための装置の使用

1. ジンバル テーブルと供給装置 構築し、図 1 aに示すようから成っている 2 つのフレーム、ジンバル テーブル、およびバラスト タンクにジンバル テーブルを組み立てます。 広いと 90 センチ 0.65 cm ポリ塩化ビニル (PVC) の在庫を使用して最も外側のフレームに 130 cm 92 cm を構築します。フレームを形成するのにステンレス鋼ボルト ・ ナットを使用します。 4 × 10 cm ポリ塩化ビニルからの最も内側のフレーム (125 cm と 80 cm 幅) (PVC) 株式を構築します。内部のジンバルのフレームを受信するフレームの短い側面の上部に大きく補強のセクションに適合します。外側のフレームの内で自由にスイングするインナー フレームを許可するようにステンレス製のピンを永久に固定します。 同様に、自由にスイングすることができます、ジンバル テーブルに取り付けられたステンレス製ピンに対応するインナー フレームの長い側面の補強のセクションがあります。 取り外し可能なバラストと PVC キューブをストックします。海水の 85 kg のバラスト タンクを記入し、バラスト タンクの底に 50 kg 亜鉛重量を挿入それに水を差すが、テーブルの振動を制限するカウンターウェイトとして機能します。注: バラスト タンクは、ステンレス製のナットとボルトでジンバル テーブルにアタッチされます。 図 1: 二枚貝懸濁液餌ボートに乗って biodeposition 法を用いた定量化するためジンバル テーブルと給餌装置を開発した.(、) このパネルは、組み立てたジンバル テーブルのイメージ供給装置です。(b) このパネルは組み立てられた送り装置の概略図を示しています。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。 構築し、ヘッド タンクと授乳室 (図 1 b) 10 の 2 セットで構成される供給装置を組み立てます。 6.5 mm の PVC を使用して長さ x 30 幅 x 12 cm 高さ (図 2 a) の cm で 70 cm 頭のタンクをビルドします。上部から 3 cm で 30 cm 左側の中央に直径 25 mm の穴をドリルします。 各穴の中心は、基地から 2.5 cm、各四角形の 70 cm PVC 部分の直径 13 mm の 10 の穴をドリルします。ヘッド タンクの側から 40 mm の最初の穴をドリルします。その後、連続穴のセンターは互いに離れて 69 mm です。 スレッド ヘッド タンクを残して水を許可するそれぞれの穴内径 7 mm のプラスチック製バルクヘッド コネクタを配置します。コネクタに内径 6.5 mm のシリコン チューブに収まります。頭のタンクと授乳室、各チューブの途中で授乳室に入る流れを制御するチューブに調節可能なバルブを接続します。注: ヘッド水槽の水で中断された粒子が維持できるように、授乳室に均等に分散、エアース トーンを使用してタンクの中の通気を追加またはチューブを空気します。 各給餌箱の内部対策が 17.5 cm 長さ x 6 cm 幅 x 6 cm 高さ (図 2 b)。6 cm の辺のいずれかの中央に 1 つの直径 13 mm 穴をドリル穴の中心は底から 15 mm。6 cm の反対側に各商工会議所、下から 45 mm 直径 13 mm 穴をドリルします。 各餌室内部バッフルが含まれますバッフルは幅 6 cm 高さ 3 cm、底から 15 mm のドリル穴には授乳室の 6 cm 側から 3.5 cm に配置するフィギュア作品です。チャンバーの下部にバッフルを接着すると、水が流れます。 可動は 2枚目バッフルなど 50 mm 長い、および T 形部分 (58 mm、トップから 15 mm で、T の下にそれは 72 の mm の幅広げる)。図形では、商工会議所 (図 2 c) でバッフルの下で流れる水、餌の商工会議所の壁の上に残りの部分にバッフルをことができます。可動の場所は、チャンバーの下部に二枚貝の上に直接に水の流れを強制する二枚貝の前に 1-2 cm バッフルします。 頭の商工会議所およびジンバル テーブルの上送り装置に合うし、滑り止めマットのある場所でそれらを保持します。このモジュラー方法で梱包、移動、およびストレージを容易にするシステムです。 図 2: ヘッド タンクの測定の詳細し、チャンバーを摂食します。(、) これは詳細測定でヘッド タンクの図面。(b) これは給食の図面詳細測定で商工会議所。ストライプ ラインは、固定のバッフルの位置を示します。(c) これは図面と可動のバッフルの測定。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。 2. 流量校正室を授乳のため 、流量を調整するには、授乳室の出口で 100 mL ガラスまたはプラスチックのメスシリンダーを配置します。すぐにストップウォッチで時間の記録を開始します。 30 後 s、メスシリンダーを削除し、収集された水の量をチェックします。理想的には、100 mL の水に 12 L h-1の授乳室頭のタンクからフローに匹敵するを収集します。注: 12 L h-1流量の前実験による水の循環なし水槽間の粒子の均一な分布を生成するとしました。 集められる水の量が 100 mL ターゲットの 5 mL 内ではなく場合、は、閉じる、またはヘッド タンクと授乳室の間にある弁を開く流れを調整します。30 s と所望の流量が得られるまでこの手順の繰り返しのための水を収集することにより、新しい流量を再度確認します。 各給餌商工会議所は、データ収集の開始する前に、コントロール室を含む同じキャリブレーション手順を繰り返します。 3. Biodeposition メソッドのフィルターの準備 注: 水、pseudofeces、および糞便の合計、有機、および無機粒子状物質の定量を行うと 25 mm 径の GF/C ガラス繊維フィルターを使用します。サンプル コレクションの前に、フィルターは、洗浄、乾燥、焼却、preweighed を確認します。常にフラット先端の鉗子を使用して、すべてのプロセスの中にフィルターを処理します。フィルターは、休憩や穴がある場合、は、それを使用せず破棄します。 フィルターを洗って、まず、200 mL の蒸留水をビーカーに約 10 フィルターを追加し、それらを手動でかき混ぜます。後 15 秒、以前きれいな水が中に白い繊維を保持しています。これらはフィルターによってリリースされた緩やかなほこりのようなガラス繊維です。攪拌を停止します。 ビーカーに水をデカントし、200 mL の蒸留水を再び追加します。3 フィルターの洗浄の合計 x。洗浄工程まで完全供給を実施する十分なフィルターが利用実験、つまり、約 48 フィルター水のろ過実験続きます 2 h、水の収集 15 分毎、糞便および 16 二枚貝 pseudofeces のフィルターを 32 を繰り返します. 乾燥 60 ° c 少なくとも 1 h. のためのフィルターは、まっフル炉汚染有機素材を削除する 4 h 450 ° c で乾燥フィルターを焼きます。炉から、フィルターを削除、乾燥器に移して、室温に来るにフィルターを使用できます。 フィルター分析用天秤で重量を量る、重量を記録します。フィルターのウェイトを追跡するための 2 つの方法は次のとおりです。 サンプルは柔らかい鉛筆を使用して、ろ過、受信エリア外、非常にエッジ上の各フィルターを数します。それにのぼた後フィルターの重量を量る、ノートにその数値と重量を記録し、フィルター箱にそれらを計量した後フィルターを格納します。 個別に各フィルターの重量を量る、くぐもったアルミホイルの部分でそれをラップし、箔に対応する重量を記録します。サンプルが収集された後にフィールドとノートブックの重量ダウン書き込みで使用されるまでは、ラップされたフィルターを格納します。 4. 腸内通過時間 ガラスまたはプラスチック ビーカーで個別に場所 5 二枚貝は、アンビエント、フィルタ リングされていない海水の 300 mL でいっぱい。 それぞれのビーカーに光合成の sp 単作の 2 mL を追加し、シェル gape によって示されるそれぞれの個々 の二枚貝を開くと、時間を記録します。注:光合成の sp はため腸通過時間による二枚貝の種では容易に摂取結果糞便が茶色の糞便を自然の消化後生産からそれらを区別する色のダーク グリーンプランクトン群集。 二枚貝が開いていると生産の糞便を維持できるようにすべての 3-5 分の各ビーカーを確認してください。 糞便は二枚貝 (図 3) の消化の過程から生じる最密充填、タイトな文字列であり、戻されるときそれらの構造維持を確認してください。 収集した預金糞便としない場合は、光合成sp の超過分の結果として、すぐに生産されている (図 3)、pseudofeces の確認します。pseudofeces は、ピペットで収集されたときを迅速に再懸濁します非摂取の粒子の軽く満載、雲状の堆積物です。 図 3: 二枚貝の糞便と pseudofeces との間の違いの図。左側のパネルは、作り出された糞便および pseudofeces を表す矢印の付いたリブ ムール貝 (Geukensia demissa) を示しています。右側のパネルは、緑色便と光合成の sp 単作のろ過や茶色の便の後に生産 pseudofeces 自然植物プランクトン群集の濾過後に生産 pseudofeces 詳細に示します。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。 緑の便が表示され、レコードごとの個々 の二枚貝の時間。二枚貝の開口部と緑の糞便の生産間の時間の長さはその腸内通過時間です。平均すべて 5 二枚貝の腸通過時間は、水試料のコレクションと糞便の間のオフセットをタイミングに使用する平均腸内通過時間を取得にレプリケートします。注: 開くまたは糞便を生成する 1 つまたは複数の二枚貝が失敗する場合に使用 5 がレプリケートされます。理想的には、平均の腸内通過時間が 3 つ以上の複製に基づいてされます。 5. サンプル コレクション (各側面 2 本)、実験で使用される同じ二枚貝種と大便と各二枚貝によって生成される pseudofeces の空のシェルを含む制御チャンバーからの水のヘッド タンクから溢れた水のサンプルを収集します。Epibionts や授乳室で二枚貝を配置する前に、他の動物によってろ過を避けるために他の encrusting 生物の二枚貝をクリーンアップします。注: 二枚貝の給餌は、部屋を移動、だから糞便および pseudofeces のコレクションを容易にするそれらを修正ファスナー (例えばVelcro) を使用してそれぞれのチャンバー内の箇所で。 Preweighed フィルター (すなわち、時間ポイントごと 3 フィルター) を 300 mL の水 2 における 2 つのオーバーフロー水と、設定別にフィルター制御チャンバーの 15 分毎を収集します。フィルターがまだろ過マニホールド間 〜 5 ml のギ酸アンモニウム等張のフィルターをすすいでください。 プロトコルのセクション 4 で説明されているように決定された平均腸通過時間の長さによって水コレクションから biodeposit コレクションの発症を遅らせます。たとえば、平均腸内通過時間が 1 h の場合は、授乳室で二枚貝を開くとすぐに水コレクションを開始します。1 時間後すべての feces そして生産しており、その後、すべての後続の feces そして pseudofeces の収集を開始する pseudofeces の部屋をオフにします。 授乳室とフィードを開く二枚貝類の数を増やす腸輸送コンテナーの両方で二枚貝をシェードします。 糞便やガラス ピペットで別に pseudofeces を収集し、各二枚貝 2 h コレクション期間中の別の容器 (フラスコまたはチューブ) に biodeposits を維持します。Preweighed フィルターを個別に各コンテナーに biodeposits をフィルターし、ギ酸アンモニウム等張の 5 mL で洗浄します。注: 2 h コレクションの終わりがあります収集便 16 容器と 16 pseudofeces フィルター 32 コンテナーの合計の収集容器。 シャーレまたは輸送のため研究室にこもってアルミホイル フィルターを格納します。アルミ箔をこもって場合は運搬に使用される、最初のフィルターを半分に折り、折り目の内側にフィルター素材、箔との接触を介して材料の損失を防ぐためにフィルタ リングします。氷とクーラーですべてのフィルターを格納します。 研究室では、少なくとも 24 時間の 60 ° C のオーブンですべてのフィルターを乾燥します。 分析用天秤を使用して各フィルターを reweigh します。合計の粒子状物質を決定する最終的な重量から初期の重さを引きます。 4 h 炉から、フィルターを削除、乾燥器に移して、室温に来るにフィルターを許可するまっフル炉 450 ° c ですべてのフィルターを焼きます。分析用天秤にもう一度フィルターの重量を量る。無機粉じんを決定する乾燥フィルター重量から燃やされたフィルター重量を減算します。注: 粒子状有機物は総粒子状物質と粒子状無機物質の違いです。