עיצוב ושימוש של מנגנון לכימות תנועת השעיה של ביואלו האכלה בים

1. gimbal טבלה והתקן האכלה לבנות ולהרכיב השולחן gimbal מורכבת של שתי מסגרות, טבלה gimbal טנק רבד, כפי שמוצג באיור 1a. לבנות המסגרת החיצונית 130 ס מ, 92 ס מ רחב, גבוה באמצעות מניות פוליוויניל כלוריד (PVC) 0.65 ס”מ 90 ס מ. השתמש מפלדת ואומים כדי ליצור את המסגרת. לבנות המסגרת הפנימית ביותר (125 ס מ ו- 80 ס”מ) מ- 4 ס”מ x 10 ס”מ פוליוויניל כלוריד (PVC) מניות. מתאים הסעיפים בכבדות מחוזק בחלק העליון של הצדדים קצר של המסגרת כדי לקבל את המסגרת gimbal הפנימי. לצמיתות לתקן פינים מפלדת כדי לאפשר את המסגרת הפנימית להתנדנד בחופשיות בתוך המסגרת החיצונית. באופן דומה, כוללים סעיפים מחוזק בצדדים ארוכים של המסגרת הפנימית כדי להכיל פינים מפלדת רכוב אל הטבלה gimbal, ולאפשר לו להניף בחופשיות. . קוביית מניות ה-PVC עם נטל נשלף למלא את מיכל באלאסט 85 ק ג של מי ים והוספת משקולת אבץ 50-ק”ג לתחתית המיכל רבד; היא פועלת כמו יויו לצנן, אבל לא להגביל, הנדנדה של הטבלה.הערה: למיכל באלאסט מצורפת אל השולחן gimbal מאת מפלדת ואומים. איור 1: Gimbal שולחן האכלה מכשירים שפותחו עבור לכימות השעיה של ביואלו האכלה באמצעות שיטת biodeposition על סיפון ספינה. () לוח זה מראה תמונה של השולחן שהורכב gimbal עם המכשיר האכלה. (b) לוח זה מראה סכימטי של המכשיר האכלה מורכבים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת. לבנות ולהרכיב את המכשיר האכלה, אשר מורכב של מיכל ראש ו- 2 סטים של 10 האכלה צ’יימברס (איור 1b). לבנות את המיכל הראשי באמצעות 6.5 מ מ PVC יהיה 70 ס מ אורך x 30 ס מ רוחב x 12 ס מ, גובה (איור 2 א). לקדוח חור בקוטר 25 מ מבמרכז בצד שמאל 30 ס מ- 3 ס מ מהחלק העליון. תרגיל 10 חורים של 13 מ מ קוטר דרך כל אחד מהחלקים PVC 70 ס מ של המלבן כך במרכז כל חור הוא 2.5 ס מ הבסיס. . לקדוח את החור הראשון 40 מ מ מהצד של המיכל הראשי; . אז, המרכזים של החורים ברציפות הם 69 מ מ אחד מהשני. מקום המחיצה פלסטיק מחברים של 7 מ מ בקוטר פנימי משורשרות כל חור כדי לאפשר מים להשאיר את המיכל הראשי. מתאים סיליקון אבובים של 6.5 מ מ בקוטר הפנימי אל המחברים. באמצע כל שפופרת, בין המיכל הראשי של תאי האכלה, להתחבר שסתומים מתכוונן לאורך צינור כדי לשלוט בזרימה להזין את תאי האכלה.הערה: כדי להבטיח החלקיקים יישארו מושעה במים מיכל ראש, מופץ באופן שווה על-פני התאים האכלה, להוסיף לערבב ברחבי הטנק באמצעות אבנים האוויר או אוויר אבובים. אמצעים הפנימי של כל חדר האכילה הינם 17.5 ס מ אורך x 6 ס מ רוחב x 6 ס מ, גובה (איור 2b). לקדוח חור בקוטר 13 מ מאחד במרכז של אחד מן הצדדים 6 ס מ, כך מרכז החור הוא 15 מ”מ מלמטה. בצד השני 6 ס מ של כל חדר, לקדוח חור בקוטר 13 מ מ- 45 מ”מ מלמטה. כוללים בתימהון בתוך כל תא האכלה; בתימהון הוא פיסת PVC 3 ס”מ גובה ו 6 ס מ, יש למקם 3.5 ס”מ מהצד 6 ס מ של תא האכלה בעל הבור קדח 15 מ”מ מלמטה. הדבק את בתימהון לתחתית התא כך מים זורמים מעליו. כולל החלק השני בתימהון ניידת, חתיכה ארוכה, ולא בצורת T 50 מ מ (58 מ מ רחב בחלק התחתון של ה-T, ב- 15 מ מ מלמעלה; זה מרחיב לרוחב של 72 מ מ). הצורה מאפשר את בתימהון לנוח על גבי קירות החדר האכלה, למים לזרום מתחת בתימהון בבית הבליעה (איור 2 c). המקום זחיח ולהביך 1-2 ס מ מול ביואלו, שכופה את זרימת המים ישירות אל ביואלו בחלק התחתון של החדר. להתאים את לשכת ראש המכשיר האכלה על גבי השולחן gimbal והחזיקו אותם במקום עם מחצלות נגד החלקה. המערכת מתוכננת באופן מודולרי זה כדי להקל על אריזה, העברת ואחסנה. איור 2: מפורט מדידות של הטנקים הראש ולהאכיל צ’יימברס. () זה ציור של הטנקים ראש עם מדידות מפורט. (b) זה ציור של אחד האכלה קאמרית עם מדידות מפורט. הקו מפוצל מציין את מיקומו של בתימהון קבוע. (ג) זהו שרטוט ומידות מטלטלין בתימהון. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת. 2. זרימה כיול האכלה צ’יימברס כדי לכייל את המחירים זרימה, במקום 100-מ ל זכוכית או פלסטיק משורה ביציאה של תא האכלה. מיד להתחיל הקלטת הזמן עם סטופר. לאחר 30 s, להסיר את משורה ולבדוק את נפח המים שנאספו. באופן אידיאלי, לאסוף 100 מ של מים, אשר שווה לזרם ממיכל ראש ממנו לאהלי האכלה h 12 L-1.הערה: קצב הזרימה של h 12 L-1 נקבע על ידי ניסויים במעבדה הקודמת להניב התפלגות הומוגנית של חלקיקים בין aquaria ללא מים recirculation. אם נפח המים שנאספו לא בתוך 5 מ של המטרה 100-mL, להתאים את זרימת לסגור או לפתוח את השסתום הממוקם בין המיכל ראש תא האכלה. בדוק קצב הזרימה חדש שוב על ידי איסוף מים 30 s ו לחזור על זה. צעד עד קצב הזרימה הרצויה מושגת. חזור על הפעולות כיול זהה עבור כל חדר האכלה, לרבות חדרי בקרה, לפני תחילת איסוף הנתונים. 3. הכנת מסננים עבור פעולת השירות Biodeposition הערה: קביעת סה כ, אורגניים ולא אורגניים חלקיקי המים, pseudofeces ו צואה נעשית באמצעות מסננים סיבי זכוכית GF/C-קוטר 25 מ מ. לפני איסוף הדגימה, ודא כי המסננים, מיובשים, שרף, שטופים preweighed. השתמש תמיד מלקחיים שטוח-טיפ כדי לטפל המסננים במהלך כל התהליכים. אם מסנן שובר או יש חור, למחוק אותו ללא שימוש זה. לשטוף את המסננים, ראשית, להוסיף כ 10 פילטרים גביע עם 200 מ של מים מזוקקים ומערבבים אותם באופן ידני. לאחר 15 s, הערה כי מים צלולים לשעבר יש סיבים לבנים בו; אלה הם פיברגלס, כמו אבק רופף שפרסם את המסננים. תפסיק לערבב. Decant את המים במיכל ולהוסיף 200 מ של מים מזוקקים שוב. לשטוף את המסננים 3 x סה כ. חזור על הניסוי תהליך הכביסה עד מספיק מסננים זמינים לנהל הנקה מלאה, כ 48 מסננים עבור סינון מים אם הניסוי נמשך שעתיים, המים נאספים כל 15 דקות, 32 מסננים עבור צואה ו pseudofeces של צדפות 16 . יבש המסננים ב 60 מעלות צלזיוס לפחות 1 ה’ לשרוף את המסננים מיובשים תנור לעמעם ב 450 מעלות צלזיוס במשך 4 שעות להסיר את כל חומר אורגני משחיתה. הסר את המסננים הכבשן, להעביר אותם desiccator, ולאפשר את המסננים להגיע לטמפרטורת החדר. שוקל את המסננים על איזון האנליטי ולהקליט את המשקולות. שתי שיטות אפשריות שמירה על מסלול של משקולות מסנן הם כדלקמן. מספר כל מסנן על הקצה מאוד, מחוץ לאזור אשר יקבל את הדגימה במהלך הסינון, באמצעות עיפרון רך. שוקל את המסנן לאחר מספור זה, להקליט את המספר ואת משקל במחברת, ולאחסן את המסננים לאחר שקילה אותם בתיבה מסנן המקורי שלהם. שוקל כל מסנן בנפרד לעטוף אותה פיסת נייר אלומיניום עמום ואז רושמות את משקל המתאים על מסכל. אחסן את המסננים עטוף עד שימוש השטח, תרשמו המשקל במחברת לאחר דגימה נאסף. 4. זמן העברה בטן המקום צדפות חמש בנפרד בתוך זכוכית או פלסטיק ספלים מלאים 300 מ של מי ים אמביינט, לא מסונן. להוסיף 2 מ של Tetraselmis sp. מונוקולטורה כל גביע, לרשום את הזמן שכל ביואלו בודדים פותח, אשר הוא אותת על ידי חיוך מעטפת.הערה: Tetraselmis sp. משמש לקביעת הזמן המעבר הבטן כי ברצון בליעתו על ידי מינים של ביואלו, הצואה וכתוצאה מכך הם ירוק כהה בצבע, המבדילים אותם מן הצואה חום שנוצר אחרי העיכול של כישרון טבעי פלנקטון קהילה. בדוק כל גביע כל 3-5 דקות כדי להבטיח צדפות יישארו פתוחים, לעשיית צואה. בדוק כי הצואה הן מחרוזות צפופה, חזק הנובע מתהליך העיכול צדפות (איור 3) לשמור על המבנה שלהם בעת pipetted. להבטיח כי ההפקדות שנאספו צואה ו לא pseudofeces (איור 3), אשר, אם הפיק, מיוצרים באופן מיידי כתוצאה מעודף Tetraselmis sp; pseudofeces הם פיקדונות וגדוש בקלילות, כמו ענן של חלקיקים שאינם בלע במהירות resuspend כאשר נאספו עם פיפטה. איור 3: איור של ההבדלים החזותיים בין צואה של ביואלו pseudofeces. החלונית השמאלית מציגה של מאסל משונן (Geukensia demissa), עם חיצים המציינים את הצואה המיוצר ואת pseudofeces. הלוח נכון מציג בפירוט צואה ירוקה ו pseudofeces המיוצר לאחר סינון של מונוקולטורה sp. Tetraselmis , ואת הצואה חום pseudofeces המיוצר לאחר סינון של קהילה פיטופלנקטון טבעי. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת. כאשר מופיעים צואה ירוקה, רשום את הזמן עבור כל ביואלו בודדים. משך הזמן בין הפתח של ביואלו הייצור של צואה ירוקה הוא זמן העברה הבטן שלה. משכפל זמני הובלה של הבטן של ביואלו חמש כל הממוצע להשיג הזמן המעבר בטן מתכוון להשתמש בעיתוי ההיסט בין האוסף של דגימות מים דגימות צואה.הערה: שימוש חמש משכפל למקרה אחד או יותר צדפות להיכשל כדי לפתוח או לייצר צואה. באופן אידיאלי, הפעם המעבר בטן רעה ותהיה מבוססת על יותר משלושה משכפל. 5. דוגמה אוסף לאסוף דגימות מים על גדותיו ממיכל ראש, מים מיכשור, אשר מכילים תרמילים ריקים מאותו המין של ביואלו המשמשים את הניסויים (שניים בכל צד), ועל צואה של pseudofeces המיוצר על ידי כל ביואלו. לנקות את צדפות של epibionts ואורגניזמים אחרים encrusting כדי למנוע סינון על-ידי אחרים החי לפני הצבת את צדפות בתאי האכלה.הערה: צדפות להציב את ההאכלה צ’יימברס יכול לנוע, אז כדי להקל על האוסף צואה של pseudofeces, לתקן אותם במקום בתוך כל תא באמצעות מהדקים (למשל, Velcro). לאסוף 300 מ ל מים כל 15 דקות עבור 2 ח’ בנפרד מסנן המים גלישה והמים משני סטים של מיכשור דרך מסננים preweighed (קרי, 3 מסננים לכל נקודת זמן). יש לשטוף את המסננים ~ 5 מ של אמוניום מול formate המסננים אמנם עדיין על יריעה סינון. לעכב את התחלתה של האוסף biodeposit של אוסף מים באורך של הזמן המעבר בטן מרושע זה נקבע כמתואר בסעיף 4 של הפרוטוקול. לדוגמה, אם הזמן המעבר בטן מרושע היה 1 h, להתחיל אוסף מים ברגע לפתוח צדפות בתאי האכלה. לאחר 1 h, נקה הצ’יימברס של כל צואה של pseudofeces אשר הופקו ו, אז, מתחילים את האוסף של כל צואה עוקבות של pseudofeces. צל של צדפות הצ’יימברס האכלה והן המכולות טרנזיט הבטן כדי להגדיל את מספר צדפות לפתוח להאכיל. לאסוף את הצואה ואת pseudofeces בנפרד עם פיפטה מזכוכית ולשמור את biodeposits במיכל נפרד (הבקבוק או צינור) עבור כל ביואלו לאורך כל תקופת אוסף 2-h. לסנן את biodeposits כל מכולה בנפרד על מסנן preweighed ולשטוף אותם עם 5 מ של אמוניום מול formate.הערה: בסוף של אוסף 2-h, יהיו 16 מכולות עם צואה שנאספו 16 מכולות עם pseudofeces שנאספו, עבור סכום כולל של 32 מכולות לסינון. אחסן את המסננים פטרי או רדיד אלומיניום עמום להובלה למעבדה. אם עמומים רדיד אלומיניום הוא שימוש להובלה, תחילה קפל את המסננים לשניים, עם החומר מסנן בצד הפנימי של הקיפול, כדי למנוע אובדן של סינון חומר באמצעות מגע עם מסכל. אחסן את כל המסננים צידנית עם קרח. במעבדה, יבש כל המסננים בתנור ב 60 מעלות צלזיוס במשך לפחות 24 שעות. Reweigh כל מסנן באמצעות איזון האנליטי. להחסיר את המשקל הראשוני לפי המשקל הסופי כדי לקבוע את חלקיקי הכולל. לשרוף את כל המסננים בכבשן לעמעם ב 450 מעלות צלזיוס במשך 4 h. הסר את המסננים הכבשן, להעביר אותם ל desiccator ולאפשר את המסננים להגיע לטמפרטורת החדר. שוקלים את המסננים שוב על איזון האנליטי. להחסיר המשקל הצרוב מסנן לפי המשקל מסנן מיובשים כדי לקבוע את חלקיקים אורגניים.הערה: ואלכסנדר הוא ההבדל בין חלקיקי החומר הכולל של חלקיקים אורגניים.