Türetme ve köpek yumurtalık mezenkimal kök hücre farklılaşma
Summary
Burada, yalıtım, genişleme ve köpek yumurtalık dokusundan mezenkimal kök hücre farklılaşma için bir yöntem açıklanmaktadır.
Abstract
Mezenkimal kök hücre (MSCs) ilgi yalıtım, genişleme ve kültür kolaylığı nedeniyle son on yıl içinde artmıştır. Son zamanlarda, çalışmalar bu hücreler sahip geniş farklılaşma kapasite göstermiştir. Yumurtalık hücre tabanlı terapiler için umut verici bir aday MSCs içinde zengin ve sık sık biyolojik atık olarak ovariectomy ameliyat sonra atılan nedeniyle gerçeğini temsil eder. Bu makalede, yalıtım, genişleme, için yordamlar açıklanır ve MSCs farklılaşma hücre sıralama gerekliliği olmadan köpek yumurtalık türetilmiştir teknikleri. Bu iletişim kuralı rejeneratif tıp için önemli bir araç nedeniyle klinik çalışmalar son derece türevlenebilir bu hücrelerde geniş uygulanabilirliği temsil eder ve terapötik kullanır.
Introduction
Kök hücreler üzerinde odak önemli ölçüde güçlü rejeneratif tıp terapiler keşfetmek toplu amacı tarafından yakıt oldu bir araştırma çaba son on yıl içinde artmıştır yayımlanmış çalışmaları sayısı. Kök hücreler var iki birincil tanımlama işaretleri: öz – yenileme ve farklılaşma. Mezenkimal kök hücre normal doku ciro için sorumlu ve embriyonik kök hücre1‘ e göre farklılaşma daha sınırlı bir kapasiteye sahip. Son zamanlarda, birçok çalışma geniş bir MSCs farklılaşma göstermiştir ve olup farklar embriyonik ve yetişkin kök hücreleri arasındaki tüm2adlı bir konudur tartışma altında.
Ovarium yüzey epitel hücreleri yanıt olarak farklı türdeki ayırt etmek için kapasite istinat hem epitelyal ve mezenkimal işaretçileri3, ifade farklılaşmış, bir kaydedilmemiş katman hücre, nispeten daha az olduğunu çevre sinyalleri4. Yumurtalık kök hücre tam konumunu iyi bilinen değildir; Ancak, tunica albuginea bipotential ataları germ hücreleri5‘ e çıkmasına önerilmiştir. İmmünolojik araştırmalar bu hücreler stromal kökenli6 veya içinde bulunduğu veya proksimal Over yüzey7onaylanmadığına karar. Mezenkimal kök hücre hücre adezyon8‘ önemli bir rol oynamaktadır çok sayıda reseptörleri hızlı beri bir deney bir nüfus hızlı adezyon içeren hücrelerin seçerek hücreleri nüfusu açıkça ayırmak hipotezi test etmek için tasarlanmıştır doğada mezenkimal olarak characterizable. Son zamanlarda, bizim grup MSCs türetmeye yumurtalık dokusu hücreleri hızlı yapışma9sergilenmesi arıtılmış nüfusu elde etmek için onların ilk 3 h kültür, kültür tabakta plastik yüzeyine yapışma üzerine kurulu kapasiteli bildirdi. Burada, yumurtalık dokusu mezenkimal kök hücre izolasyon için geliştirilen yöntem açıklanmaktadır.
Protocol
Representative Results
Discussion
Burada kanıt MSCs ovariectomy sonra biyolojik atık olarak kabul edilir köpek yumurtalık dokusu yalıtılmış olmasını sağlamak. Birçok hücre tipleri-ebilmek bulunmak içinde Yumurtalık nedeniyle gerçeğini, başarılı bir şekilde büyüdü hücreleri bir monolayer fibroblast benzeri görünümdeki seçili plastik hızlı onların bağlılığı dayalı MSCs seçmek için bir protokol evlenme teklif etti.
MSCs türetmeye kemik iliği ilk rapor MSCs plastik yapışma kapasitesini k…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar köpek sterilizasyon program UNESP-FCAV, lütfen yumurtalık sağlamak için kabul etmiş oluyorsunuz. Bu eser FAPESP (işlem No 2013/14293-0) ve burunları gelen hibe tarafından desteklenmiştir.
Materials
| DPBS | Thermo Fisher | 14190144 | |
| Collagenase I | Thermo Fisher | 17100017 | |
| Tissue flask | Corning | CLS3056 | |
| DMEM low glucose | Thermo Fisher | 11054020 | |
| FBS | Thermo Fisher | 12484-010 | |
| TrypLE express | Thermo Fisher | 12604021 | |
| StemPro Adipogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007001 | |
| StemPro Chondrogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007101 | |
| StemPro Osteogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007201 | |
| STEMdiff Definitive Endoderm Kit | StemCell | 5110 | |
| Penicillin-Streptomycin | Thermo Fisher | 15070063 | |
| CD45 | AbD Serotec | MCA 2035S | |
| CD34 | AbD Serotec | MCA 2411GA | |
| CD90 | AbD Serotec | MCA 1036G | |
| CD44 | AbD Serotec | MCA 1041 | |
| Nestin | Milipore | MAB353 | |
| β-Tubulin | Milipore | MAB1637 | |
| DDX4 | Invitrogen | PA5 -23378 | |
| IgG- FITC | AbD Serotec | STAR80F | |
| IgG- FITC | AbD Serotec | STAR120F |
References
- Gazit, Z., Pelled, G., Sheyn, D., Kimelman, N., Gazit, D., Atala, A., Lanza, R. Mesenchymal stem cells. Handbook of Stem Cells (2nd Edition). , 513-527 (2013).
- Zipori, D. The nature of stem cells: state rather than entity. Nature Reviews Genetics. 5 (11), 873-878 (2004).
- Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology. Endocrine Reviews. 22 (2), 255-288 (2001).
- Ahmed, N., Thompson, E. W., Quinn, M. A. Epithelial-mesenchymal interconversions in normal ovarian surface epithelium and ovarian carcinomas: an exception to the norm. Journal of Cellular Physiology. 213 (3), 581-588 (2007).
- Bukovsky, A., Svetlikova, M., Caudle, M. R. Oogenesis in cultures derived from adult human ovaries. Reproductive Biology and Endocrinology. 3 (1), 17 (2005).
- Gong, S. P., et al. Embryonic stem cell-like cells established by culture of adult ovarian cells in mice. Fertility and Sterility. 93 (8), 2594-2601 (2010).
- Johnson, J., Canning, J., Kaneko, T., Pru, J. K., Tilly, J. L. Germline stem cells and follicular renewal in the postnatal mammalian ovary. Nature. 428 (6979), 145 (2004).
- Deans, R. J., Moseley, A. B. Mesenchymal stem cells: biology and potential clinical uses. Experimental Hematology. 28 (8), 875-884 (2000).
- Trinda Hill, A. B. T., Therrien, J., Garcia, J. M., Smith, L. C. Mesenchymal-like stem cells in canine ovary show high differentiation potential. Cell Proliferation. 50 (6), 12391 (2017).
- Dominici, M. L. B. K., et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 8, 4315-4317 (2006).
- Friedenstein, A. J., Piatetzky-Shapiro, I. I., Petrakova, K. V. Osteogenesis in transplants of bone marrow cells. Development. 16 (3), 381-390 (1966).
- Kuznetsov, S. A., et al. Single-colony derived strains of human marrow stromal fibroblasts form bone after transplantation in vivo. Journal of Bone and Mineral Research. 12 (9), 1335-1347 (1997).
