Дифференцирование и дифференциации собак яичников мезенхимальных стволовых клеток
Summary
Здесь мы описываем метод для изоляции, расширения и дифференцирования мезенхимальных стволовых клеток из собачьего тканей яичника.
Abstract
За последнее десятилетие из-за их легкости изоляции, расширения и культуры возрос интерес к мезенхимальных стволовых клеток (МСК). Недавно исследования продемонстрировали способность широкий дифференциации, что эти клетки обладают. Яичника представляет перспективный кандидат для терапии на базе ячеек с тем, что он богат MSCs, и что он часто удаляются после овариоэктомии операций как биологические отходы. Эта статья описывает процедуры для изоляции, расширение, и дифференцировки МСК, полученных от собак яичника, без необходимости сортировки клеток методики. Этот протокол является важным инструментом для регенеративной медицины из-за широкой применимости этих крайне дифференцируемая клеток в клинических испытаниях и лечебных целях.
Introduction
Число опубликованных исследований, которые сосредоточиться на стволовые клетки значительно увеличился за последнее десятилетие, исследования, который был вызван коллективной цели обнаружения мощный регенеративной медицины терапии. Стволовые клетки имеют два основных определяющих маркеры: self – ремонт и дифференциации. Мезенхимальные стволовые клетки отвечают за оборот обычных тканей и имеют более ограниченные возможности дифференциации по сравнению с1эмбриональных стволовых клеток. Недавно многие исследования показали широкий спектр дифференциации MSCs, и предметом обсуждения является вопрос о том, существуют ли различия между эмбриональных и взрослых стволовых клеток на все2.
Поверхности эпителия яичника является незафиксированных слой клеток, относительно менее продифференцировано, который выражает как маркеры эпителия и мезенхимальных3, сохраняя способность дифференцироваться в различные типы клеток в ответ на Экологические сигналы4. Точное местоположение стволовых клеток в яичниках не хорошо известна; Однако было предложено, что родоначальниками bipotential в белочной порождают клетки семенозачатка5. Иммунологические исследования предположил, что эти клетки имеют стромальные происхождения6 или расположены в или проксимальной поверхности яичников7. Так как мезенхимальных стволовых клеток выразить множество рецепторов, которые играют важную роль в ячейке сцепления8, эксперимент был разработан для проверки гипотезы, что выбор популяция клеток с Быстрое сцепление будет изолировать население клеток четко characterizable как мезенхимальных в природе. Недавно наша группа сообщила дифференцирование MSCs из тканей яичника, основанные на их способности адгезии к поверхности пластика культуры блюдо в течение первых 3 ч культуры, с целью получения очищенного населения экспонируется Быстрое сцепление9клеток. Здесь мы описываем разработанный метод для изоляции мезенхимальных стволовых клеток из тканей яичника.
Protocol
Representative Results
Discussion
Здесь мы предоставляем доказательства того, что MSCs могут быть изолированы от собак тканей яичника, которая считается биологические отходы после овариоэктомии. С тем, что многие типы клеток можно найти в яичнике, мы предложили протокол для выбора MSCs, основанные на их быстрое присоединен…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы признают программу стерилизации собак в UNESP-FCAV за любезно предоставление яичников. Эта работа была поддержана грантов от FAPESP (процесс № 2013/14293-0) и МЫСОВ.
Materials
| DPBS | Thermo Fisher | 14190144 | |
| Collagenase I | Thermo Fisher | 17100017 | |
| Tissue flask | Corning | CLS3056 | |
| DMEM low glucose | Thermo Fisher | 11054020 | |
| FBS | Thermo Fisher | 12484-010 | |
| TrypLE express | Thermo Fisher | 12604021 | |
| StemPro Adipogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007001 | |
| StemPro Chondrogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007101 | |
| StemPro Osteogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007201 | |
| STEMdiff Definitive Endoderm Kit | StemCell | 5110 | |
| Penicillin-Streptomycin | Thermo Fisher | 15070063 | |
| CD45 | AbD Serotec | MCA 2035S | |
| CD34 | AbD Serotec | MCA 2411GA | |
| CD90 | AbD Serotec | MCA 1036G | |
| CD44 | AbD Serotec | MCA 1041 | |
| Nestin | Milipore | MAB353 | |
| β-Tubulin | Milipore | MAB1637 | |
| DDX4 | Invitrogen | PA5 -23378 | |
| IgG- FITC | AbD Serotec | STAR80F | |
| IgG- FITC | AbD Serotec | STAR120F |
References
- Gazit, Z., Pelled, G., Sheyn, D., Kimelman, N., Gazit, D., Atala, A., Lanza, R. Mesenchymal stem cells. Handbook of Stem Cells (2nd Edition). , 513-527 (2013).
- Zipori, D. The nature of stem cells: state rather than entity. Nature Reviews Genetics. 5 (11), 873-878 (2004).
- Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology. Endocrine Reviews. 22 (2), 255-288 (2001).
- Ahmed, N., Thompson, E. W., Quinn, M. A. Epithelial-mesenchymal interconversions in normal ovarian surface epithelium and ovarian carcinomas: an exception to the norm. Journal of Cellular Physiology. 213 (3), 581-588 (2007).
- Bukovsky, A., Svetlikova, M., Caudle, M. R. Oogenesis in cultures derived from adult human ovaries. Reproductive Biology and Endocrinology. 3 (1), 17 (2005).
- Gong, S. P., et al. Embryonic stem cell-like cells established by culture of adult ovarian cells in mice. Fertility and Sterility. 93 (8), 2594-2601 (2010).
- Johnson, J., Canning, J., Kaneko, T., Pru, J. K., Tilly, J. L. Germline stem cells and follicular renewal in the postnatal mammalian ovary. Nature. 428 (6979), 145 (2004).
- Deans, R. J., Moseley, A. B. Mesenchymal stem cells: biology and potential clinical uses. Experimental Hematology. 28 (8), 875-884 (2000).
- Trinda Hill, A. B. T., Therrien, J., Garcia, J. M., Smith, L. C. Mesenchymal-like stem cells in canine ovary show high differentiation potential. Cell Proliferation. 50 (6), 12391 (2017).
- Dominici, M. L. B. K., et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 8, 4315-4317 (2006).
- Friedenstein, A. J., Piatetzky-Shapiro, I. I., Petrakova, K. V. Osteogenesis in transplants of bone marrow cells. Development. 16 (3), 381-390 (1966).
- Kuznetsov, S. A., et al. Single-colony derived strains of human marrow stromal fibroblasts form bone after transplantation in vivo. Journal of Bone and Mineral Research. 12 (9), 1335-1347 (1997).
