Ableitung und Differenzierung von Eckzahn Eierstock mesenchymalen Stammzellen
Summary
Hier beschreiben wir eine Methode zur Isolierung, Erweiterung und Differenzierung von mesenchymalen Stammzellen aus Eckzahn Ovargewebe.
Abstract
Interesse an mesenchymalen Stammzellen (MSCs) hat im letzten Jahrzehnt aufgrund ihrer einfachen Isolierung, Expansion und Kultur zugenommen. Studien haben vor kurzem die breite Differenzierung Kapazität gezeigt, die diese Zellen besitzen. Der Eierstock stellt einen viel versprechender Kandidat für zellbasierte Therapien, es reich an MSCs ist und, die es ist häufig nach Ovariectomy Operationen als Bioabfall entsorgt. Dieser Artikel beschreibt Verfahren zur Isolierung, Ausbau, und Differenzierung der MSCs abgeleitet aus dem Eckzahn Eierstock, ohne die Notwendigkeit der Zellsortierung Techniken. Dieses Protokoll stellt ein wichtiges Instrument für die regenerative Medizin wegen der breiten Anwendbarkeit dieser höchst differenzierbare Zellen in der klinischen und therapeutischen verwendet.
Introduction
Die Anzahl der veröffentlichten Studien, die Fokus auf Stammzellen im letzten Jahrzehnt eine Forschungsarbeit, die durch das kollektive Ziel entdecken starke regenerative Medizin Therapien angeheizt hat, erheblich gestiegen ist. Stammzellen haben zwei primäre bestimmende Marker: selbst – Renovierung und Differenzierung. Mesenchymaler Stammzellen sind verantwortlich für regelmäßige Gewebe Umsatz und haben eine eingeschränktere Kapazität der Differenzierung im Vergleich zu embryonalen Stammzellen1. Vor kurzem, zahlreiche Studien belegen eine Vielzahl der Differenzierung der MSCs, und ein Thema in der Diskussion ist, ob Unterschiede zwischen embryonalen und adulten Stammzellen alle2existieren.
Das Ovarium Oberflächenepithel ist ein ohne Commit Schicht von Zellen, relativ weniger differenziert, die beiden epithelialen und mesenchymalen Marker3, behalten die Fähigkeit, sich in verschiedenen Arten von Zellen als Reaktion auf differenzieren ausdrückt Umweltsignale4. Die genaue Lage von Stammzellen im Eierstock ist nicht bekannt; jedoch wurde vorgeschlagen, dass bipotentialen Vorfahren in der Tunica Albuginea zu Keimzellen5führen. Immunologische Untersuchungen haben die Hypothese, dass diese Zellen eine stromale Herkunft6 oder im oder proximalen dem Eierstock Oberfläche7. Da mesenchymaler Stammzellen zahlreiche Rezeptoren zum Ausdruck, die eine wichtige in der Zelle Adhäsion8 bringen Rolle, wurde ein Experiment entwickelt, um die Hypothese zu testen, die Auswahl einer Bevölkerung der Zellen mit schnellen Adhäsion eine Bevölkerung der Zellen deutlich isolieren würde charakterisierbar als mesenchymale in der Natur. Unsere Fraktion berichtete kürzlich, die Ableitung von MSCs von Eierstockgewebe basierend auf ihre Kapazität der Haftung auf die Kunststoffoberfläche der Kulturschale in den ersten 3 h von Kultur, um eine gereinigte Population von Zellen ausstellenden schnelle Haftung9zu erhalten. Hier beschreiben wir die entwickelte Methode für mesenchymale Stammzellen isoliert von der ovariellen Gewebe.
Protocol
Representative Results
Discussion
Hier stellen wir Hinweise darauf, dass MSCs von Eckzahn Eierstockgewebe isoliert werden können die biologische Abfälle nach Ovariectomy gilt. Da viele Zelltypen in den Eierstöcken gefunden werden können, haben wir vorgeschlagen, ein Protokoll, um wählen MSCs basierend auf ihre schnelle Einhaltung der Kunststoff, der Zellen, die wuchs in einem monomolekularen Film mit einer Fibroblasten-ähnliche Morphologie erfolgreich ausgewählt.
Der erste Bericht über die Ableitung von MSCs aus dem Kn…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren erkennen die Hunde Sterilisationsprogramm bei UNESP-FCAV für die freundliche Bereitstellung die Eierstöcke. Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse von FAPESP (Prozess -Nr. 2013/14293-0) und CAPES unterstützt.
Materials
| DPBS | Thermo Fisher | 14190144 | |
| Collagenase I | Thermo Fisher | 17100017 | |
| Tissue flask | Corning | CLS3056 | |
| DMEM low glucose | Thermo Fisher | 11054020 | |
| FBS | Thermo Fisher | 12484-010 | |
| TrypLE express | Thermo Fisher | 12604021 | |
| StemPro Adipogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007001 | |
| StemPro Chondrogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007101 | |
| StemPro Osteogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007201 | |
| STEMdiff Definitive Endoderm Kit | StemCell | 5110 | |
| Penicillin-Streptomycin | Thermo Fisher | 15070063 | |
| CD45 | AbD Serotec | MCA 2035S | |
| CD34 | AbD Serotec | MCA 2411GA | |
| CD90 | AbD Serotec | MCA 1036G | |
| CD44 | AbD Serotec | MCA 1041 | |
| Nestin | Milipore | MAB353 | |
| β-Tubulin | Milipore | MAB1637 | |
| DDX4 | Invitrogen | PA5 -23378 | |
| IgG- FITC | AbD Serotec | STAR80F | |
| IgG- FITC | AbD Serotec | STAR120F |
References
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